Study procedure 31

AHEI = Alternate Healthy Eating Index, AHEI-T = Alternate Healthy Eating Index for Taiwan.

醫師轉介

參考Ainsworth 等於 2000 年公佈的運動量表（Ainsworth et al., 2000）

（附錄5）計算出受試者的 MET（Metabolic equivalent）‧min / day。

二、人體測量學與血壓

1. 身高：使用二段式身高計，型號：T-110A（富誠，台灣）測量。

量測時受試者需脫鞋，眼睛平視，身高以公分為單位，計量至

小數點以下一位。

2. 體重及體脂肪：使用體重、體脂肪計，型號：HBF-356W（Omron 公司，日本）測量。量測時受訪者需脫鞋襪，並雙手伸直握住電擊棒，體重以公斤為單位，計量至小數點以下一位。體脂肪測量是利用生物電阻分析法（Bioelectrical impedance analysis, BIA）之攜帶型體脂計測量，單位為%。

3. 身體質量指數（Body mass index, BMI）：以量測出的體重與身高代入公式 = 體重（kg）/ ［身高（m）］²計算之。

4. 腰圍：使用皮尺測量，測量受試者肋骨最下端與腸骨最上端的

中心點即腹部中線，測量時盡量貼近身體，並於呼吸吐氣結束後測量（國民健康局，2007），計量至小數點以下一位。

5. 臀圍：測量受試者側身站立臀部的最高位，計量至小數點以下一位。

6. 腰臀比：以量測出的腰圍與臀圍代入公式 = 腰圍（cm） / 臀圍（cm）。

7. 血壓（含收縮壓及舒張壓）：要求受試者稍作休息，心情平伏

後，由專業護理師利用水銀血壓計K300 (KENLU, TAIWAN) 測量，計量至整數。

三、血液檢測

經由空腹10 小時後進行採血，委托 TMUH 檢驗科進行分析。

血液樣本利用Hitachi 710 型離心機（Hitachi, JAPAN）在 3000 轉 /分鐘（Rotate per minute）離心 30 分鐘後，分離血漿及血清，取樣本血清進行分析。

A1C 是利用 HLC-723 G 7（TOSOH, JAPAN）儀器作分析。

檢驗方法：Cation-Exchange HPLC

原理：全血的檢體以溶離液及沖洗液自動地加以稀釋再進入 column 中，依賴於各血色素 N-端所帶的電荷不同，從陰電性強至弱依序分離出：A1a, A1b, F,L-A1c,S-A1c,A0。各種血色素的組成經由 column 沖出後通過偵測器，在波長 415nm 下監測吸光值的改變。每一個peak 面積總和(以 mVsec 為單位)表示成 Total Area，以每一個 peak 的面積除以Total Area 的比例表示成百分比。例如：A1C(%)=A1C Area/Total Area

試劑：

名稱：日本TOSOH: HSi Hemolysis Wash Solution Cat No:18431 包裝:2000ml

日本TOSOH: G7 Elution Buffer Hsi No.1 (S), Cat No:19544 包裝:800ml

G6PDH

日本: TOSOH: G7 Elution Buffer Hsi No.2 (S) Cat No:19545 包裝:800ml

日本: TOSOH: G7 Elution Buffer Hsi No.3 (S)。

Cat No:19546 包裝:800ml

AC-sugar、PC-sugar、TC、TG、HDL-C 和 LDL-C 是利用全自動血糖分析儀(Roche Modular P800, Hitachi, JAPAN )儀器作分析，測定原理如下：

AC-sugar、PC-sugar：

檢驗方法：Hexokinase method (UV test)

原理：六碳糖激酶用ATP 催化葡萄糖磷酸化作用，形成

glucose-6-phosphate。Glucose-6-phosphate 脫氫酶（G-6-PDH），在 NADP 的存在下氧化，成為 gluconate-6-phosphate。NADPH 的生成速率和葡萄糖濃度成正比，反應式如下：

Glucose + ATP Glucose-6-phosphat + ADP

Glucose-6-phosphate + NADP⁺ Gluconate-6-P + NADPH + H⁺

試劑：

esterase

oxidase

R1 Buffer/ATP/NADP；TRIS buffer*：100 mmol/L，pH 7.8；Mg²⁺：4 mmol/L；ATP D 1.7 mmol/L；NADP D 1.0 mmol/L; preservative；

R2 HK/G-6-PDH；HEPES buffer**：30 mmol/L，pH 7.0；Mg²⁺： 4 mmol/L；HK D 8.3 U/mL (yeast)；G-6-PDH D 15 U/mL (E. coli);

preservative

* TRIS = Tris(hydroxymethyl)-aminomethane

**HEPES = 2-[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinyl]-ethane sulfonic acid

TC：

檢驗方法：Enzymatic colormetric method

原理：檢體加R1 試劑（膽固醇試劑）反應，利用膽固醇解脂酶和氧化偵測膽固醇：

cholesterol esters + H₂O cholesterol cholesterol + RCOOH

cholesterol + O₂ cholesterol cholest-4-en-3-one + H₂O₂

膽固醇酯被解脂酶分解成游離的膽固醇和脂肪酸膽固醇氧化幫助氧使膽固醇轉化成cholest-4-en-3-one 以及過氧化氫。

2 H₂O₂ + 4-aminophenazone + phenol peroxidase

4-(p-benzoquinone-monoimino)-phneazone + 4 H₂O

在過氧化酶的催化作用下，過氧化氫和4-aminophenazone 、phenol

反應形成紅色的複合物。顏色的深淺和膽固醇的濃度成正比。

試劑：

R1 試劑： PIPES 緩衝液*：75 mmol/L，pH 6.8；

Mg²⁺ ：10 mmol/L;

sodium cholate：0.2 mmol/L；

4-aminophenazone ≥ 0.15 mmol/L；

phenol ≥ 4.2 mmol/L；

fatty alcohol polyglycol ether：1%;

cholesterol esterase (Pseudomonas spec.) ≥ 0.5 U/ml；

cholesterol oxidase (E.coli) ≥ 0.15 U/mL；

peroxidase (horseradish) ≥ 0.25 U/mL；穩定劑；保存劑；

*PIPES =Piperazine-1,4-bis(2-ethane sulfonic acid)。

TG：

檢驗方法：Enzymatic colorimetry assay

原理：利用脂蛋白脂解酶（LPL）把三酸甘油酯分解為甘油，其後，

甘油會被氧化為dihydroxy acetone phosphate 和 H₂O₂。H₂O₂再和 4-aminophenazone，4-chlorophenol 反應，在過氧化酶的催化作用下，

最後有一紅色的複合物形成，其吸光度與三酸甘油脂的濃度成正相

關。簡單的反應式如下：

Triglycerides + 3 H₂O glycerol + 3 RCOOH

Glycerol + ATP ^GK_Mg2+ glycerol-3-phosphate + ADP

Glycerol-3-phosphate + O2 GPO dihydroxyacetone phosphate + H2O2

H2O2 + 4-aminophenazone + 4-chlorophenol Peroxides

4-(p-benzoquinone-monoimino)-phenazone + 2 H2O + HCl

*** GK：Glycerokinase GPO：Glycerol phosphate oxidase。

試劑：

PIPES buffer*： 50 mmol/ L，pH 6.8，

Mg²⁺ ： 40 mmol/ L，

sodiumcholate： 0.20 mmol/ L，ATP D 1.4 mmol/ L，

4-aminophenazoneD 0.13 mmol/ L，4-chlorophenol： 4.7 mmol/ L，

potassium hexacyanoferrate(II)： 1 μmol/L，

fatty alcohol polyglycol ether： 0.65%;

lipoprotein lipase (pseudomonas spec.) D 5.0 U/mL，

Glycerokinase(Bacillus stearothermophilus) D 0.19 U/mL，

Glycerol phosphate oxidase (E. coli) D 2.5 U/mL，

Lipoprotein Lipase

PEG-cholesterol oxidses

peroxidase (horseradish) D 0.10 U/mL;preservative

*PIPES = piperazine-N,N'-bis(2-ethanesulfonic acid)

HDL-C：

檢驗方法：Enzymatic colorimetry assay

原理：檢體加R1 試劑（緩衝液）：magnesium sulfate 存在之下， dextran sulfate 選擇性地和 LDL、VLDL 以及乳糜微粒形成水溶性的化合物，

此種化合物會排斥PEG-modified 酵素。加入 R2(PEG-modified enzymes/4-amino-antipyrine/緩衝液)，然後反應開始：使用 PEG 結合的膽固醇解酯酶和氧化酶(約 40 %)測得 HDL-cholesterol 中膽固醇的濃度。膽固醇酯被脂解酶分解成游離的膽固醇和脂肪酸。

HDL-cholesterol esters +H2O PEG-cholesterolesterase HDL-cholesterol +RCOOH

HDL-cholesterol + O₂ ∆⁴ – cholestenone + H₂O₂

在氧的存在之下，膽固醇氧化酶將膽固醇氧化成Δ⁴-膽脂烯酮 (Δ⁴-cholestenone)以及過氧化氫。

2 H₂O₂ + 4-amino-antipyrine + HSDA* + H⁺ + H₂O purple-blue pigment + 5 H2O

*HSDA = sodium N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyanifine 在過氧化酶的催化作用下，過氧化氫和4-amino-antipyrine 、

peroxidase

HSDA 反應形成藍紫色的複合物。顏色的深淺和膽固醇的濃度成正比。

試劑：

R1： MOPS buffer**： 19.1 mmol/L，pH 7.0;

dextran sulfate： 0.5 g/L;

magnesium sulfate heptahydrate： 8.11 mmol/L;

HSDA： 0.96 mmol/L;

ascorbate oxidase (Eupenicillium sp.,recombinant) ≥ 3 kU/L;

peroxidase (horseradish) 10 kU/L;保存劑。

R2 ：PIPESbuffer***： 9.9mmol/L，pH7.0;

PEG-cholesterolesterase(Pseudomonas spec.) ≥ 0.2 kU/L；

PEG-cholesterol oxidase(Streptomyces sp.recombinant) ≥ 7.6 kU/L；

peroxidase (horse-radish) ≥ 20 kU/L；

4-amino-antipyrine： 2.46 mmol/L；保存劑。

**MOPS = 3-morpholinopropanesulfonic acid

***PIPES = piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid)

LDL-C：

檢驗方法：Homogeneous enzymatic colorimetry assay

原理：

膽固醇酯被解酯脢分解成游離的膽固醇和脂肪酸，在氧的存在之下，膽固醇氧化酶將膽固醇氧化成Δ⁴-膽脂烯酮(Δ⁴-cholestenone)以及過氧化氫。

在過氧化酶的催化作用下，過氧化氫和 4-amino-antipyrine 、 HSDA 反應形成藍紫色的複合物。

試劑：

R1 MOPS (3-morpholinopropane sulfonic acid buffer)：20.1 mmol/L，pH 6.5；

HSDA：0.96 mmol/L；

ascorbate oxidase (Eupenicillium spec. , recombinant) ： ≥ 3 kU/L；

peroxidase (horseradish) ： ≥ 10 kU/L;保存劑

R2 MOPS (3-morpholinopropane sulfonic acid buffer) ：20.1 mmol/L，

pH 6.8；

MgSO₄ .7H₂O：8.11 mmol/L；

4-aminoantipyrine：2.46 mmol/L；

cholesterol esterase (Pseudomonas spec.) ≥ 3.0 kU/L；

cholesteroloxidase(Brevibacterium spec.,recombinant) ≥ 2.0 kU/L；

peroxidase (horseradish) ≥ 20 kU/L；清潔劑;保存劑。

Non-HDL-C：以檢測出的 TC 與 HDL-C 代入公式 = TC（mg/dL）

LDL-cholesterol esters Detergent Cholesterol + free fatty acids (selective micellary solubilization) + H2O

Cholesterol esterase

- HDL-C（mg/dL）計算之（Havel and Rapaport, 1995）。TC/HDL-C, TG/HDL-C 及 LDL-C/HDL-C 則分別以檢測出的 TC、TG、HDL-C 及 LDL-C 計算之。

四、飲食資料

於實驗開始（附錄6）及 6 個月後（附錄 7）詢問受試者一天 24 小時飲食回憶法，詢問過程使用輔助工具：台灣常見食品營養圖鑑（附錄8）（行政院衛生署，1998）及標準容量器具（附錄 9），由同一位營養師作一對一的詢問，完成後把食物攝取量轉化為克重（g），以行

政院衛生署「台灣地區食品營養成分資料庫」為基礎（行政院衛生署，

1997），使用營養素分析軟體（御廚皇，台中）分析飲食資料，利用分析後的資料作呈現。

於實驗開始至第1 個月期間，邀請受試者填寫 3 天飲食記錄，作為24 小時飲食回憶法的效度評估之用。使用的 3 天飲食記錄本（附錄10），記錄本中附有填寫範本（附錄 11），要求受試者以杯、碗、

盤、湯匙及茶匙作記錄單位，並以郵寄方式寄回，研究人員在收到 3 天飲食記錄後以電訪形式作數據的再以電話確定及追問是否有漏填項目，完成後把食物攝取量轉化為克重（g），以行政院衛生署「台灣地區食品營養成分資料庫」為基礎，使用營養素分析軟體（御廚皇，

台中）分析飲食資料。

五、AHEI 及 AHEI-T 的計算資料

利用營養素分析軟體資料，計算水果類、蔬菜類、堅果類和大豆蛋白、白肉紅肉比、全穀類佔穀類百分比及多元不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸比等各項分數。利用開放式問卷取得綜合維生素的使用及酒精資料，詢問受試者使用綜合維生素的品牌及時間，使用含酒精飲料的品牌、頻率及每次飲用量，並參考台灣菸酒股份有限公司公佈的標準份量換算為酒精份量（serving）後進行計算（附錄 12）（台灣菸酒股份有限公司，2004）。

反式脂肪酸方面，因台灣本地並沒有建立完整的資料庫，故參考由吳等調查的巿售製品其反式脂肪酸含量資料（吳，2007）及包裝食物的營養成份標示（Nutrition labeling），並參考美國農業局（United States Department of Agriculture, USDA）公佈的 USDA National Nutrient Database for Standard Reference, Release 22（USDA, 2009）為反式脂肪酸含量的評估。

六、其他資料

利用病歷回顧取得患者的疾病資料等。

第四節統計分析

數值以Mean ± SD, number (n) or percentage (%) 表示，使用 SAS9.1 統計軟體進行描述性統計。數據於統計比較前先使用

Shapiro-Wilk test 作常態性的分析。符合常態性的變項使用 Student’s t test 比較性別及計算分數的差異，不符合常態性的變項則使用

Wilcoxon rank sum test 此無母數分析方法作比較。使用 Spearman rank correlation 分析 AHEI-T 分數與變項的相關性，並分別使用邏輯氏迴歸（Logistic regression）及簡單線性迴歸（Simple linear regression）

作為AHEI-T 分數與人體測量值、血壓、血糖及血脂的迴歸分析。分析多因子調整的勝算比（Odds ratio, OR）。使用雙因子重複量數變異數分析（Two-way repeated measures analysis of variance, 2-way

RMANOVA）作分數組別與時間的分析比較，並分析其是否存在交互影響關係。因數據多不乎合球型條件（Sphericity tests, p < 0.05），故選用取代的單變項Ｆ統計考驗法（Alternative univariate F test）中的 Greenhouse-Geisser epsilon 作分析，並以 Scheffe’s test 作事後檢定，

當 p＜0.05 時具有統計差異。

第五章結果

第一節資料收集一、數據的常態性

受試者資料常態分佈分析的結果（附錄13）。

第二節 24 小時飲食回憶法的效度分析

一、24 小時飲食回憶法與 3 天飲食記錄的相關性

基準期，共收案196 位 24 小時飲食回憶法資料，其中 76 位（38.8%）

受試者願意填寫 3 天飲食記錄，將 24 小時飲食回憶法與 3 天飲食記錄得到的飲食攝取量作 Spearman rank correlation 分析。得到以下結果：營養素方面，熱量攝取量（r = 0.57, p < 0.0001）、蛋白質攝取量

（r = 0.59, p < 0.0001）、脂質攝取量（r = 0.54, p < 0.0001）、碳水化合物攝取量（r = 0.49, p < 0.0001）；食物方面，五穀根莖類（r = 0.56, p <

0.0001）、奶類和乳製品（r = 0.64, p < 0.0001）、肉魚豆蛋類（r = 0.44,

p = 0.0001）

、蔬菜類（r = 0.50, p < 0.0001）、油脂類（r = 0.46, p <

0.0001）及反式脂肪酸（r = 0.29, p = 0.0105）之間均具有顯著正相關；

在水果類及膳食纖維則無顯著相關性（p > 0.05）（表 4）。

表4. 24 小時飲食回憶法與 3 天飲食記錄其熱量、巨量營養素、食物類別、膳食纖維、反式脂肪酸的斯皮爾曼等級相關分析

Table 4. Spearman rank correlation of energy, macronutrients, food groups,

dietary fiber, and trans fat between 24h dietary recall and average of 3-d dietary record among 76 participants

Items 24h dietary recall^a 3d dietary record^a r^b

p

^c Energy (kcal) 1385 ± 465 1501 ± 382 0.57*** <.0001

b. r = Correlation coefficient, ex = exchange.

c. Statistical significance analyzed by using spearman rank correlation at p < 0.05

***p < 0.0001, *p < 0.05

二、24 小時飲食回憶法與 3 天飲食記錄的一致性

關於兩種飲食調查法的一致性，Garrow 提出除了相關性之外，

Percentage of agreement 亦可以作兩種飲食評估方法一致性的分析

（Garrow, 1995）。使用Percentage of agreement 比較 24 小時飲食回憶法與3 天飲食記錄其飲食資料一致性，探討相同三分位（Same tertile：

表示數據經三分位後，同一受試者被分配在同一分位中。）、相鄰三分位（Adjacent tertile：表示數據經三分位後，於第一種調查法被分配為第一分位而另一種調查法被分配為第二分位或於第一種調查法

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