20 40 60 80 100
CG43S3 ΔrcsA
圖二：rcsA基因缺損對克雷白氏肺炎桿菌的抗酸能力沒有影響
細菌在 LB 培養液隔夜培養後，20 倍稀釋至新鮮的 LB 培養液 中，再培養 3 個小時至 OD600約為 0.6~0.8，之後將菌體移至 pH 4.4 的 LB 培養液中，適應 1 小時後，再移至 pH 3.0 的 M9 培養 液中，培養 1 小時後，取適當菌液稀釋塗盤後，計算菌數；存 活率是根據在 1 小時後，每毫升存活的菌數和初始菌數的比 值。
(A)
the putative promoter
the putative promoter
β-galactosidase activity (Miller Units)
0
圖四：可能由RcsB所調控的抗酸基因啟動子區示意圖 ydeP (KPN_01825) (2.3kb)
1 23 4
hdeD (0.5kb) 1
1 2 3
yhiO (0.3kb)
Cfa: cyclopropane fatty acid synthetase YdeP: putative oxidoreductase
YfdX: hypothetical protein
HdeD: acid-resistance membrane protein HdeB2: acid-resistance protein
YhiO: universal stress protein UspB
-35 -10 ydeP (KPN_01825) (2.3kb)
1 23 4
hdeD (0.5kb) 1
1 2 3
yhiO (0.3kb)
Cfa: cyclopropane fatty acid synthetase YdeP: putative oxidoreductase
YfdX: hypothetical protein
HdeD: acid-resistance membrane protein HdeB2: acid-resistance protein
YhiO: universal stress protein UspB
-35 -10
β-galactosidase activity (Miller Units)
0 20 40 60 80 100 120 140 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800
Z01 Z01ΔrcsB
Pcfa PyfdX PhdeB2 PhdeD-hdeB1 PydeP PyhiO
圖五：rcsB基因缺損降低cfa及yfdX啟動子的活性
細菌在 LB 培養液隔夜培養後，20 倍稀釋至新鮮的 LB 培養液 中，再培養3 個小時至 OD600約為0.6~0.8，之後將菌體移至 pH 4.4 的 LB 培養液中，適應 1 小時後，再測定其啟動子活性。
(A)
ydhC cfa (999 bp) ribC
500 bp
ydhC cfa (999 bp) ribC
500 bp
bp wild-type
form
mutant form M: marker 1: CG43S3
bp wild-type
form mutant form
(A)
500bp dhaB3 orfZ glpF
hdeB1 hdeD
yfdX
(663 bp) kvhS kvhA hdeB2
CH024
CH027
2654 bp
2014 bp
500bp dhaB3 orfZ glpF
hdeB1 hdeD
yfdX
(663 bp) kvhS kvhA hdeB2
CH024
time (h)
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
log OD 600
0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 2
0.1 1
CG43S3 Δcfa ΔyfdX
圖八：cfa或yfdX基因缺損對細菌的生長沒有影響
細菌在 LB 培養液隔夜培養後，稀釋至新鮮的 LB 培養液中，使 其 OD600約為 0.15，置於 37℃培養，並在不同的時間點測量其 吸光值 (OD600)。
su rviva l rate (%)
10 20 30 40 50 60 70 80
ΔrcsB
CG43S3 Δcfa ΔyfdX
圖九：cfa或yfdX基因缺損對克雷白氏肺炎桿菌的抗酸能力沒有明顯 影響
細菌在 LB 培養液隔夜培養後，20 倍稀釋至新鮮的 LB 培養液 中，再培養 3 個小時至 OD600約為 0.6~0.8，之後將菌體移至 pH 4.4 的 LB 培養液中，適應 1 小時後，再移至 pH 3.0 的 M9 培養 液中，培養 1 小時後，取適當菌液稀釋塗盤後，計算菌數；存 活率是根據在 1 小時後，每毫升存活的菌數和初始菌數的比 值。
(A)
1kb
slp dctR yhiD
hdeB hdeA
hdeD gadE
mdtE mdtF gadW
gadY gadX gadA
1kb
slp dctR yhiD
hdeB hdeA
hdeD gadE
mdtE mdtF gadW
gadY gadX gadA
(B)
500bp hdeB1 hdeD yfdX kvhS kvhA hdeB2
500bp hdeB1 hdeD yfdX kvhS kvhA hdeB2
圖十：酸適應島嶼
(A) 大腸桿菌中的酸適應島嶼 (46)。(B) 本研究預測在克雷白 氏肺炎桿菌CG43 中相對酸適應島嶼的基因組。
β-galactosidase activity (Miller Units)
0 20 40 60 400 600 800 1000
Z01 Z01ΔrcsB Z01ΔkvhA
PyfdX
PhdeB2 PhdeD-hdeB1
圖十一：rcsB或kvhA基因缺損降低hdeB2, hdeD-hdeB1 及yfdX在靜置 培養下啟動子的活性
細菌在LB 靜置培養 20 小時後，再分別測定其啟動子活性。
(A)
pKvhAcPP 為 kvhA 互補質體。
survival rate (%)
5
survival rate (%)
10
survival rate (%)
0 10 20 30 40
CG43S3 ΔrcsB ΔkvhA ΔyfdX
(A)
EvgA binding box
-35 box -10 box
EvgA binding box
-35 box -10 box
β-galactosidase activity (Miller Units)
0
(A)
(B)
β-galactosidase activity (Miller Units)
0
PkvhA-1 PkvhA-2 pA15 pF15 pE15
圖十四：不同長度的kvhA啟動子在rcsB基因缺損株下的活性
(A) (B)
332 412 332
491 412
167 167167
215
215 215215
332
332 412412 332332
412
821 821821
圖十五：克雷白氏肺炎桿菌在中性環境下的蛋白質表現圖譜
細菌隔夜培養後，20 倍稀釋至新鮮的 LB 培養液 (pH 7.5)中，再培養至對數中期 (mid-log phase, OD600＝ 0.6~0.7)，再收其可溶性蛋白質進行二維電泳實驗。(A)CG43S3 (B)CG43S3ΔrcsB。紅圈框出的點為表現量有 差異的點，其數字為其Match ID；圖為三次實驗具代表性的一次結果。
(A) (B) 150120120 100 培養液適應1 小時，再收其可溶性蛋白質進行二維電泳實驗。(A)CG43S3 (B)CG43S3ΔrcsB。紅圈框出的點 為表現量有差異的點，其數字為其Match ID；圖為三次實驗具代表性的一次結果。