環 境 微 生 物 實 驗 報 告
實 驗 九
實驗名稱:菌種分離 實驗日期: 4 月 06 日 繳交日期: 4 月 13 日 實驗組別: 第四組
實驗人員姓名: 梁維 王靖雯 邱文綺 葉書甫
• 實驗原理
微生物生需要提供適當的營養物質與環境條件，微生物生長包括微生物細胞 增大或增重以及整個微生物族群的增加。學者為了瞭解為生物生長情形、生 理特性與培養特徵，必須進行微生物生長測定，其測定方法包括檢測為生物 的數量、重量以及特性，而測定為生物族群的生長曲線也為研究為生物生長 得重要步驟之一 。
測定微生物生長曲線的方法是將待研究之微生物接種於密閉環境下，供給一 定的營養物質(培養基) ，並給予最適溫度、pH 及需氧氣條件進行培養，培養 過程中不再添加任何營養物質，微生物則此條件下逐漸生長，其生長狀況可 利用微生物菌數的增加與時間之關係，匯出微生物生長曲線圖。
(一)遲滯期
微生物正適應新環境，細胞吸收養分，代謝加速，並進行生理化反應以合成新 細胞組織。此時微生物細胞增大，但未進行分裂，所以數目並沒有明顯變化。
(二)對數期
微生物以適應環境，在充分供營養與良好生理條件下，微生物呈幾何倍數增加 至最大數目，曲線呈上升之趨勢。此期之微生物在化學組織、代謝作用或型態上 都較其他時期更為一致，因此微生物學家通常以此期進行各項實驗。
(三)穩定期
由於對數期微生物大量繁殖的結果使的密閉環境中的微生物數量大增，產生的 毒性代謝產物增多，營養物質大量減少，微生物開始受到生存空間不足、營養物 質缺乏與代謝毒性產物增加威脅，其生長已達飽和，此其微生物繁殖速率與死亡 速率相等，因此微生物數目不再增加，維持最大數目，生長曲線成平行之趨勢。
(四)死滅期
由於生存空間不足、營養物質消耗殆盡與毒性代謝物產生持續增加，微生物進 行內呼吸代謝、自體分解以極快的速率死亡。此其微生物死亡速率遠大於繁殖速 率，生長曲線呈下降趨勢。
• 實驗步驟
1. 將分光光度計打開且熱機１０分鐘使光度計讀值穩定。
2. 將二段水注入光電比色管內，並以分光光度計量測吸光度值，並利用 此值作為量測菌液時之基線（baseline）。
3. 將酵母粉和葡萄糖與培養液混合，取原培養液和以混合之菌液分別放 入分光光度計裡量測吸光值。
4. 取１毫升之菌液，並以１０被稀釋法稀釋４次，將三角彎棒泡過酒精 後以酒精燈上將酒精燒除待涼後，取０.１毫升的菌液滴在培養基上，
並以三角彎棒和旋轉檯，以旋轉的方式塗滿整個培養基之後蓋上蓋子 放置一旁。
5. 剩餘的菌液放入恆溫振盪器裡放置２０分鐘後取出並照第４步驟延續 實驗，需要測量５次。
6. 將以塗碟法塗好的培養基全疊在一起並倒放過來，放入恆溫器裡放置 一天並在隔天觀看結果。
7. 隔天拿出培養基，屬培養基上的菌數並紀錄。
• 實驗數據
0 min
稀釋倍數 吸光值
原液 1.743
10-1 0.343
10-2 0.030
10-3 0.011
10-4 0.009
20 min
稀釋倍數 吸光值
原液 1.811
10-1 0.689
10-2 0.084
10-3 0.006
10-4 0.001
40 min
稀釋倍數 吸光值
原液 1.974
10-1 0.7
10-2 0.074
10-3 0.005
10-4 0.001
60 min
稀釋倍數 吸光值
原液 1.877
10-1 0.727
10-2 0.071
10-3 0.006
10-4 0.002
80 min
稀釋倍數 吸光值
原液 1.902
10-1 0.0721
10-2 0.008
10-3 0.007
10-4 0.003
100 min
稀釋倍數 吸光值
原液 1.914
10-1 0.818
10-2 0.112
10-3 0.008
10-4 0.001
最終結果
時間 吸光值 菌數
0 min 1.743 17
20 min 1.811 27
40 min 1.874 38
60 min 1.877 45
80 min 1.902 204
100 min 1.914 216
1.65 1.7 1.75 1.8 1.85 1.9 1.95
0 20 40 60 80 100
吸光值
時間(min)
時間與吸光值
500 100150 200250
1.743 1.811 1.874 1.877 1.902 1.914
菌數
吸光值
吸光值與菌數
• 心得寫作 梁 維
本次實驗由於本人身體不適住院了十天，所以我沒有做到本次的實驗。但是 我還是有盡到組員身分製作本次報告，也希望我的身體可以早早復原，也要 告訴大家，身體很重要，不要熬夜。
王靖雯
今天的實驗，早聽同學說需要花很多的時間，這禮拜又因有位組原因並無法 參與這次的實驗，使得我們都戰戰兢兢地，深怕一不小心會做錯或是做出來 的結果不如預期。不過，郝家再有事先問過前一組的同學了，所以做起來有 必較順手不至於忙手忙腳的。那天忽然發現，其實有些事情真的是需要分工 合作得來的，不論是實驗過程或是報告的撰寫我們都秉持著分工合作，才能 達到成功。
邱文綺
這次的實驗少了梁維感覺安靜了很多,在等待 20 分鐘的過程中 沒有太多有的沒的笑聲,我們三個人靜靜的做實驗,可能少了 梁維在旁邊耍白痴,所以少了許多笑聲,也沒有掌鏡的人了,整 個有點小空虛,不過我們還是很仔細的做實驗,54321 深怕多一 秒實驗數據會有誤差,每次開門都很小心很緊張,等了一個多小 時終於六個點都做完了,突然又想到沒有梁維幫我們做最後的 拍照結尾,整個有點小可憐,不過還是順利的做完了實驗,希望 數據是漂亮的!
0 50 100 150 200 250
17 27 38 45 204 216
時間
菌數
時間與菌數
葉書甫
這禮拜的實驗是要測稀光值，每 20 分鐘測一次總共要這樣來來回回測 5 次，
20 分鐘就要取一次原液，在下去 10 倍稀釋，在慢慢的一支一支測稀光值，還 好中間並沒有錯誤，只要發生錯誤那就要重來，就還要在花 100 分鐘的時 間，雖然說這禮拜的實驗少了梁維，不過我們 3 個人還是很順利的完成這測 的實驗。
