測定澱粉酶催化澱粉分解反應之活性

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E31 誰是口水王！

領取專用器材：

 計時器(助理助教點發)

 2 mL刻度吸量管1支

 安全吸球1個

 玻璃滴管 2支

 塑膠滴管1支

 保利龍杯2個

 溫度計

 投影片及襯墊白紙 準備個人器材：

 試管（10支，洗淨烘乾冷卻備用）

 試管架

 燒杯 100 mL、玻璃棒

 量筒（10 mL）及漏斗

(2012/02/15 修訂)

實驗課前你吃早、午餐了沒？

這會影響你的唾液澱粉酶活性！

實驗目的及學習技能

實驗目的



學習碘試法（iodine test）



測定澱粉酶催化澱粉分解反應之活性



探討影響酵素活性之因素

實驗技能



量筒、吸量管、定量液體分注器



點滴試驗

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原理：唾液澱粉酶

唾液澱粉酶（amylase） ：

催化澱粉水解反應（hydrolysis）

澱粉酶之電腦模擬結構圖 唾液：

• 保持口腔濕潤、益口腔清潔

• 潤滑食物使易於吞嚥

• 幫助消化

原理：酵素

酵素（Enzyme）



又稱為酶，字源於希臘文，描述酵母菌中含有某種神奇 催化活力的物質



是生物體內許多生化反應中不可或缺的物質



酵素之特性：

a. 酵素具有高催化效率（efficiency）

b. 酵素催化反應具有特異性（specificity），一種酶

（催化劑）只會與特定的受質（substrate）作用 c. 通常酵素為具有特殊結構的蛋白質

d. 催化效率受環境影響，如酸鹼性、溫度….等。

5

原理：以碘試法測澱粉酶催化活性

澱粉 藍黑色

寡糖 紅棕色

麥芽糖 黃棕色

澱粉酶 水解

澱粉酶 水解

I^- + I₂

→ I

（碘試液）

I₃^{- 澱粉 藍黑色錯合物}

褐色

I₃^-

分解所需的時間越短表示酵素催化效率越高

步驟 I. 唾液澱粉酶活性預測定

洗烘10支試管

配製唾液澱粉酶液

• 1 mL口水(自產)

• 25 mL之0.5％ NaCl

• 玻棒攪拌混合均勻

• 測量溶液溫度

• 於試管中加入

• pH 7 緩衝液1 mL

• 2%澱粉液 1 mL

 配製反應試液

製作碘試液投影片

滴入5~10滴預備 以塑膠滴管吸取碘 試液滴在投影片上

7

步驟I. 唾液澱粉酶活性預測定

以2 mL吸量管吸取 2 mL唾液澱粉酶溶 液加入試管

澱粉/ pH 7 反應試液

迅速混合 開始計時

以玻璃滴管取反應試液和 投影片上1滴碘試液混合

觀察記錄直至藍黑色消失

每隔30秒

取一滴與碘試液反應 (反應慢者可間隔1分鐘)

注意：

 反應試液應懸空滴下

 避免滴管碰觸碘試液

 每次測試，需重新吸取試管 內反應液

步驟II. 酸鹼性對澱粉酶活性之影響

pH = 5、9 緩衝溶液 1 mL 及2％澱粉溶液1 mL

pH 5 pH 9 反應試液

碘試液測定：

加入2 mL唾液澱粉酶液混合均勻

定時取量滴入投影片上碘試液

注意：

更換不同反應條件，

玻璃滴管應沖洗乾淨 並潤洗

比較 pH = 5、7、9 緩 衝溶液中酵素的活性

9

步驟III. 溫度對澱粉酶活性之影響

2 mL唾液 澱粉酶溶液

澱粉/pH 7 反應試液

熱水浴 5分鐘

達溫度

平衡 碘試液

測定

溶液迅

速混合 開始 計時

測定 10分鐘

試管自水 浴取出

碘試液測定 再觀察5分鐘

重複以上步驟改為在

0℃、50℃水浴中進行 恢復室溫

 製作 80℃的熱水浴：取70 mL 水於100 mL燒杯中，

置於加熱板加熱(加熱鈕調控於約3)

 溫度對活性影響，測試：80、50、0 ^oC

(使用保利龍杯冰浴) 放回熱水浴

步驟IV. 酒精對澱粉酶活性之影響

 配製反應試液：

95 % 酒精 1 mL 2% 澱粉液 1 mL

 碘試液測定：

－加入2 mL唾液澱粉酶液

－混合均勻開始計時

－定時取量滴入投影片碘試液

－觀察記錄直至藍黑色消失

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實驗步驟總結

2%

澱粉液 +

唾液 澱粉酶 溶液

2 mL

0

C 50

C 80

C pH 7

95% 酒精 pH 9 pH 7

開始計時

碘試液測試

比較變色時間

2% RT 澱粉液 pH 5

記錄 1 mL 溫度

1 mL

與他組同學比較唾液澱粉酶之活性

誰是口水王？？？

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注意事項



投影片以清水沖洗

擦乾，與白紙一同交還講桌回收盒



值日生以茶壺在排氣櫃內加熱板上預煮熱水公用



熱水浴的溫度需要高於或等於80℃（小心燙傷）



澱粉酶溶液與反應試液需迅速混合均勻立即開始計時



吸取碘試液之塑膠滴管回收於講桌回收杯內，供下一 班級使用



計時器交給助理助教點收



實驗廢液可直接倒入水槽



實驗課前吃早、午餐