約最大攝氧量 75%來進行，每週四天，共進行 8 週，運動第一週時每次運動 30 分鐘，以後每週增加 15 分鐘，但由第五週開始則維持 90 分鐘的運動直到第八週 完成，運動過程很少用電刺激來驅使動物運動。兩組其詳細運動內容如下: 三、最大攝氧量的測量 第七週訓練完後，將動物放在一閉密式跑步機，所有的氣流利用幫蒲由外面 打入，以每分鐘 5.5 公升的空氣流量打入。最大攝氧量測量所採用的運動內容， 在一開始時跑步機斜坡 15%，成熟運動組 10 公尺/ 分，老年組 7.5 公尺/分，以 後每隔 3 分鐘，則成熟運動組增加 5 公尺/ 分，老年組增加 2.5 公尺/分，直到動 物可以完跑 21 分鐘。最大攝氧量是最在該運動中所得的最高值，以 Minato MG-360 動物氣體分析儀來進行測量，這儀器在使用前和使用後者會進行校對。 四、肌肉組織取樣 在測量最大攝氧量的 72 小時之後進行動物解剖，以每公斤 25 毫克的 pentobarbital sodium 進行麻醉，後肢的腓腹肌快速的被移出，稱重，再以液態氮 作快速凍結，最後保持於零下 80 度 C 直到分析。腓腸肌可以加以分類為紅肌 (GR)，混和肌(GM)，以及白肌(GW)等三種，將混和肌取出，由中段切開，分成 兩大部分，進行切片時由中間部分開始 (Smith et al., 1997) 。 五、染色法 組織化學化驗分析，在-20℃的冷凍切片機（恆冷機）上將腓腸肌作 10μm 厚的連續橫斷切片，從載玻片取下後在室溫中自然風乾，之後這些部分要交替地 去實驗肌纖維的肌蛋白的 ATP 活 性、SDH 活性 (Brooke & Kaiser, 1970).。連 續切片用 Myofibrillar ATPase 染色法和 SDH 染色法以用來辨別第Ⅰ型、Ⅱa 和 b 肌纖維(Ogilvie & Dehay, 1986)。
六、AP 染色法(Alkaline Phosphatase 染色法)
AP 染色法是使用 Burstone, M.S 的 AZO 色素法，主要是用來進行微血管的 染色。在室溫下，將乾燥的載玻片放在基質溶液中浸泡 30 分鐘，此基質溶液含 有奈 AS-MX 磷酸 5mg（NaphtholAS-MX phosphate），蒸餾水 35ml（Distilled water）， pH8.5 的鹼試劑緩衝劑 25ml（0.2M tris buffer），Fast Red TR salt 30mg， 然後放到蒸餾水中清洗 2 分鐘，重覆 2 次，接著用水溶性的封入劑將切片封入 (Burstone, 1962)。
七、肌纖維數目、微血管數目的測量
在連接的電腦螢幕上顯現，藉由 Jandel 視訊分析軟體將儲存和處理中的影像做轉 換，獲得的影像會被轉換入共具約有 256 層灰階的圖素，為了修正每個樣本背景 光度的不同，會將載玻片上的平均灰階數增加的中位數和完整光度傳送(cover slip)從纖維的平均灰階中去掉完整光度傳送的平均灰階為 142(範圍為 138-150)， 最後再將這些圖片印出。 根據 ATPase 染色法，ATPase 活性高的肌纖肌會被染成暗色，而活性低的肌 纖維則會被染成亮色，前者是 Fast-twitch 纖維，後者是 Slow- twitch 纖維(Ogilvie & Dehay, 1986)。而 SDH 染色法可將肌纖維分為三種，也就是說 SDH 活性高的 肌纖維會被染成暗色，活性低的肌纖維則亮色，但是在兩者中的肌纖維則會被染 成中間色。對照著連續兩張圖片的 ATPase 染色法和 SDH 染色法，將肌纖維分 為慢收肌肉 SO (Slow- twitch-oxidative, fiber I)，快收肌 FG (Fast-twitch glycolytic, fiber II a)，快收肌 FOG (Fast-twitch-oxidative-glycolytic, Fiber IIb)。
九、圍繞 TypeⅡb 微血管 由二因子變異數分析摘要表（參見表八）可知，交互作用（F=3.407，P＞.05） 未達顯著差異。主要效果考驗方面，年齡變數未達顯著差異（F= 1.111，P＞.05） 即圍繞 TypeⅡb 微血管不會隨著年齡增長而有所改變。組別變數亦未達顯著差異 （F=3.294，P＞.05），即圍繞 TypeⅡb 微血管不會因為持久性運動訓練而有所改 變。 表八 圍繞 TypeⅡb 微血管變異數分析摘要表 變異來源 自由度 離均差平方和 均方 F 值 年紀 1 0.813 0.813 1.111 組別 1 2.411 2.411 3.294 年紀×組別 1 2.493 2.493 3.407 誤差 40 29.269 29.269 全體 43 34.244 十、總微血管/總肌纖維（C/F） 由二因子變異數分析摘要表（參見表九）可知，交互作用（F=0.511，P＞.05） 未達顯著差異。主要效果考驗方面，年齡變數達顯著差異（F=5.709，P＜.05）， 年輕組的總微血管/總肌纖維（2.08 ± 0.51）顯著高於老年組的總微血管/總肌纖維 （1.76±0.48），即表示總微血管/總肌纖維會隨著年齡增長而有所改變。組別變 數未達顯著差異（F=2.033，P＞.05），即表示整體的總微血管/總肌纖維不會因為 訓練而有改變。 表九 總微血管/總肌纖維變異數分析摘要表（C/F） 變異來源 自由度 離均差平方和 均方 F 值 年紀 1 1.387 1.387 5.709* 組別 1 0.494 0.494 2.033 年紀×組別 1 0.124 0.124 0.511 誤差 40 9.714 9.714 全體 43 11.466 * p＜.05 討論 有許多調查年紀對於比目肌和伸趾長肌肌重的報告指出，肌重的高峰是在 10-27 月，這和鼠種、肌肉別有關(Alnaqeeb & Goldspink, 1987; Eddinger et al., 1985)。本研究雄 Fischer344 的腓腸肌肌重隨著年齡增加而減少的結果，和一些 研究人類(Degens & Always, 2003; Lexell et al., 1983 )和動物(Koavanen &
個月到 30 個月的雄 Fischer344 的腓腸肌肌重共減少 29%，這和(Mitchell et al., 1991)雌 Fischer344 的比目肌肌重由 18 個月到 24 個月減少 12.5%，到了 27 個月 時再額外減少 2.5%，這減少的比率不同，其原因之一可能是由於雄 Fischer 344 的平均壽命比雌的短，再者，可能是由於肌肉功能性需求的不同(Ripoll et al., 1979)，所以造成本文下降的比率較為快速。 有研究指出持久性運動增加年輕鼠的比目肌肌重(Brown et al., 1992; Mitchell et al., 1991 )，但對於老年鼠的比目肌肌重則沒有影響(Mitchell et al., 1991)，本研究持久性運動對於成熟鼠和老年鼠的伸趾長肌並沒有影響，這種結 果可能是由於本研究的鼠齡太大，再則是於肌肉部位不同所致。
本研究肌重/體重著年紀增加而減少，這和以雄 Fischer344 的研究結果相同 (Eddinger et al., 1985 )，同時也和雌 Fischer344 (Mitchell et al., 1991)、
Sprague-Dawely (Armstrong & Phelps, 1984)相同。再者，本研究運動會增加成熟 組和老年組的腓腸肌的肌重/體重，這和(Suzuki et al., 1997)運動後比目肌的肌重/ 體高增加的結果相同，但和雌 Fischer344 (Mitchell et al., 1991)的比目肌和伸趾長 肌的肌重/體重的訓練效果不同，主要是由於實驗所用的鼠齡不同，該文是比較 老年組(27.5 個月)和年輕組(7.5 個月)的肌重/體重，27.5 個月時的體重的顯著大 於 7.5 個月，但本研究則是比較 30 個月和 20 個月的肌重/體重，30 個月時的體 重的顯著低於 20 個月，由於本研究的體重快速下降，形成肌肉/體重的增加。
老化對人類 (Proctor et al., 1995; Proctor & Joyner, 1997)和老獵犬 (Haidet & Parsons, 1991)的研究指出，微血管/肌纖維隨著年年齡增加而減少，而老鼠在老 化過程中微血管/肌纖維不變 (Mitchell et al., 1991)，或是會減少(Degens et al., 1993)。本研究微血管/肌纖維隨著年齡增加則顯著的減少。微血管/肌纖維值的增 加或減少，是受到微血數目減少，或肌纖維數目增加這兩個因子所影響，然而至 今為止對於肌纖維是否會隨著老化而有所改變仍未有定論，有些研究支持著終生 有一定的肌纖維數目(Alnaqeeb & Goldspink, 1987; Eddinger et al., 1985)，但也有 支持隨著年紀增加，快收縮肌和慢收縮肌會減少(Lexell et al., 1983, Daw et al., 1988)，但也有支持快收縮肌是選擇性的減少 (Lexell et al., 1983,)。
綜合本研究隨著年齡增加微血管/肌纖維減少，但圍繞肌纖維微血管數目沒 有變化而言，可推知微血管/肌纖維隨著年齡增加而減少是由於肌纖維數目改變 所致。現今隨著年紀增加而肌纖維數目(population)改變的理論有三種(Koavanen & Suominen, 1987)，第 1，由一種肌纖維轉換成另一種肌纖維，第 2，特殊肌纖 維的萎縮，第 3，相對的一定的肌纖維分佈置。由於本研究並未測量肌纖維面積 所以無法判定肌纖維數目的改變是由何種原因造成。 在討論運動對於圍繞各種肌纖維微血管結果之前，了解運動處方對於老鼠的 肌纖維募集方式是很重要的。 肌纖維募集是因每次運動的運動強度和運動時間而定(Gute et al., 1996)，研 究指出中-低強度的肌肉活動是由高有氧能力的肌纖維(ST)，隨著肌肉盡力，或 運動強度的增加，接著會募集低有氧能力且高收縮的肌纖維(FG)。這高氧化的 FOG 肌纖維被認為在維持一段時間的中、適度身體活動時的最主要肌纖維(Saltin & Laughlin, 1994)。在持久性運動時，相同的募集模式也可發現，所以當運動成 為疲憊及力量不足時，肌肉最初的活動時所用的肌纖維的募集逐漸由深到淺且由 高有氧到低有氧肌纖維(Saltin & Laughlin, 1994)。
有許多的研究已証實持久性運動會增加人類(Shono et al., 2002; Rodriguez et al., 2002)和動物 (Suzuki et al., 2001; Suzuki et al., 1997)的微血管密度或微血管/ 肌纖維，本研究持久性運動對成熟組和老年組的腓腸肌的微血管/肌纖維沒有變 化，此結果和(Brown et al., 1992; Mitchell et al., 1991)的伸趾長肌相同。這些持久 性運動會增加微血管密度或微血管/肌纖維的研究都以年齡較小者為對象，而產 生這種結果的主要原因可歸納出持久性運動加速年輕者、年輕動物的微血管生 長，這和肌纖維的生長速度幾乎是相同的，但本研究是以成熟鼠和老年鼠為研究 對象，所以鼠齡不同應是產生這種研究結果不同的主要原因之一。
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