人體周邊血促進血管生成之類內皮前驅細胞的分離培養及 鑑定

人體周邊血促進血管生成之類內皮前驅細胞的分離培養及 鑑定

 內皮前驅細胞能夠修復受傷的血管，促進血管的再生，本實驗分離健康成人之週邊血單核細胞，利 用特殊的培養方法，促使貼附性單核細胞分化為類內皮前驅細胞，並鑑定其特徵及功能。自體外培 養七天後得到的類內皮前驅細胞，具有攝取 DiI-Ac LDL 以及結合 ULEX-1 的功能，此特徵與前 人所報導的內皮前驅細胞相像，並且藉著反轉錄聚合 ? 連鎖反應以及免疫螢光染色，此細胞也表現 內皮細胞之特有基因： VE-cadherin 、 vWF 、 eNOS ，以及內皮細胞之特有蛋白： vWF 。在細胞 的功能性分析方面，得知類內皮前驅細胞在體外的細胞間質萃取物 (Matrigel) 上可以促使類似血 管的生成；藉由流式細胞儀偵測培養天數不同的細胞表面分子表現：血源性細胞標的： CD105 會 隨著培養天數大幅降低，另外，早期內皮細胞的內皮血管生長因子接受器 1 & 2 (Flt-1 & KDR) 隨 著天數表現則逐漸升高，顯示血源性單核細胞轉分化 (trans-differentiation) 的趨勢。此外，在形成 類內皮前驅細胞的過程，可以偵測到代表早期細胞的標記基因： Oct-4 、 Rex-1 、 Sox-2 的表現逐 漸增高，並且細胞端粒 ? 活性也增強，顯示成人細胞在經由培養之後會表現早期細胞的特性。進一 步了解內皮前驅細胞分化過程中分泌了哪些激素，收集其第一天至第四天以及第四天至第七天，類 內皮前驅細胞形成過程的培養液，以人類細胞激素蛋白表達微陣列之比對分析，可以得知養成類內 皮前驅細胞第四天至第七天，細胞會大量表現： Hemangiogenic factors/Pro-angiogenic factors

(b-FGF 、 G-CSF and GM-CSF) ， Chemokines/Pro-inflammatory factors/Pro-angiogenic factors (GRO/

CXCL-2 、 IL-8/CXCL-8 、 I-309/CCL-1 、 I-TAC/CXCL-11 、 MCP-1/CCL-2 、 RANTES/CCL-5) 以及 Cytokine/Pro-inflammatory factors (IL-13) 這些細胞激素，可能經由 paracrine 或 autocrine 的機 制調控其本身的分化，促使血管的生成及持久性和穩定性，或者扮演其他生理性功能。

　　經由以上的實驗結果證明在體外 (in vitro) 的情況下可以使成人週邊血中的血源系細胞轉分化 或去分化成為類內皮前驅細胞，並且可能經由細胞激素的刺激促進血管的再生，進一步將利用動物 實驗證實。

Isolation and characterization of human peripheral blood derived endothelial progenitor-like cells for neo-

vasculogenesis



This study describes the generation and characterization of human adult peripheral blood mon onuclear-derived endothelial progenitor-like cells (EPLCs) as a resource may potentially usefu l for neo-vasculogenesis.

Peripheral blood mononuclear cell derived EPLCs are characterized by their phonotypical exp ression of CD34–, CD105+, CD14++, CD31++, CD45+++, and VEGF receptors positive (Flt- 1++ and KDR++). These cells up-taking AC-LDL, binding ULEX-1 functions and exhibit tub e formation in the Matrigel culture system in resemble to the CD34+, KDR++, AC133+ endot helial progenitor cells (EPCs). EPLCs express endothelial-specific genes such as VE-cadherin, vWF, and eNOS as functioning endothelial cells (ECs). During the course of EPLCs formation culture, increased early genes (Oct-4, Rex-1, and Sox-2) expression and enhanced telomerase activity were detected as their positive cell surface marker CD105 was switched off and at me an time turned on the angiogenic receptors Flt-1, and KDR. In contrast to the previously findin g of angiogenic factors G-CSF, VEGF, HGF secreted by the EPCs18, the current study reveals that EPLCs secrete additional hemangiogenic factors/pro-angiogenic factors (b-FGF 、 GM-C SF), chemokines/pro-inflammatory factors/pro-angiogenic factors (GRO/CXCL-2 、 IL-8/CX CL-8 、 I-309/CCL-1 、 I-TAC/CXCL-11 、 MCP-1/CCL-2 、 RANTES/CCL-5), and cyto kine/pro-inflammatory factors (IL-13).

Taken together, the present study demonstrates that EPLCs can be derived from transforming

human adult hematopoietic mononuclear cells into functioning endothelial progenitor like cell

s phenotype via the process of trans-dedifferentiation in vitro that may benefit for the vascular

wound healing and regeneration in vivo. Animal model studies of the EPLCs are undergoing.