中藥材料及其抽取與純化分離

研究材料係購買自高雄縣廣德藥行，白芍之根部 5.0 公斤及赤芍 之根部5.0 公斤。

將 5.0 公斤的白芍絞成粉末於室溫下以乙醇浸泡連續抽取 5 次，

所得之抽取液減壓濃縮至乾後(305.0 g)，用n-Hexane和 95% MeOH (5% H2O)進行分配萃取(1:1)，n-Hexane 萃取層經減壓濃縮得到 34.0 g。另外 95% MeOH 層經減壓濃縮後得 267.0 g，再用EtOAc 和H2O 進行分配萃取(1:1)，收集EtOAc層經減壓濃縮得到 30.0 g。其H2O層 再和n-BuOH進行分配萃取(1:1)，收集n-BuOH層經減壓濃縮得到 109.0 g。另外H2O層經減壓濃縮後得 126.0 g。將n-Hexane層、EtOAc 層、n-BuOH層和H2O層之濃縮物進行抑制酪氨酸酶及掃除DPPH自由 基之生物活性試驗，結果在EtOAc層有明顯之生物活性，抑制酪氨酸 酶之抑制率為(IC50= 0.74 mg/ml)及掃除DPPH自由基之掃除率為 (SC50= 0.06 mg/ml)。將EtOAc層以分子篩(Sephadex LH-20)管柱層析 法，使用沖提溶媒為MeOH，並以矽膠薄層色層析片(TLC)來判斷結 果，在此共粗分成4 個Fraction (Fr. 1~4)。將Fr. 1~4 進行生物活性之 試驗，結果在Fr. 2 和Fr. 3 具有明顯的生物活性之作用。Fr. 2 以低壓 製備式碳-8 逆相層析法進行純化，沖提液為MeOH-H2O (1:1)，並利用

碳-8 逆相薄層析用玻璃片(C-8 TLC)檢測純化程度，經確認C-8 TLC片 上只剩一或二點後，再以製備級高效液相色層分析法以製備式苯基型 管柱進行純化分離，流動相為MeOH-H2O (30:70)，如此反覆純化分離 直至記錄器上只有單一波峰為止，再將收集液濃縮至乾，得到Gallic acid (1，2.1 g)及Ethyl gallate (2，13.1 mg)。Fr. 3 以低壓製備式碳-8 逆 相層析法進行純化，沖提液為MeOH-H2O (1:1)，並利用碳-8 逆相薄層 析用玻璃片(C-8 TLC)檢測純化程度，再以製備級高效液相色層分析 法以製備式苯基型管柱進行純化分離，流動相為MeOH-H2O (10:90)，

反覆純化分離直至記錄器上只有單一波峰為止，再將收集液濃縮至 乾，得到Methyl gallate (3，181.9 mg)。

將 5.0 公斤的赤芍絞成粉末於室溫下以乙醇浸泡連續抽取 5 次，

所得之抽取液減壓濃縮至乾後(1.40 kg)，用n-Hexane和 95% MeOH (5% H2O)進行分配萃取(1:1)，取 95% MeOH層經減壓濃縮後(1.25 活性，抑制酪氨酸酶之抑制率為(IC50= 0.63 mg/ml)及掃除DPPH自由

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基之清除率為(SC50= 0.04 mg/ml)。將EtOAc層以分子篩(Sephadex LH-20)管柱層析法，使用沖提溶媒為MeOH，且以矽膠薄層色層析片 (TLC)來判斷，在此共粗分 5 個Fraction (Fr. 1~5)。將Fr. 1~5 進行生物 活性之試驗，結果在Fr. 2~Fr. 5 具有明顯的生物活性作用。Fr. 2 以製 備式低壓碳-8 逆相層析法進行純化，並利用碳-8 逆相薄層析用玻璃 片(C-8 TLC)檢測純化程度，經確認C-8 TLC片上只剩一或二點後，再 以製備級高效液相色層分析法以製備式苯基型管柱進行純化分離，流 動相為MeOH-H2O (30:70)，如此反覆純化分離直至記錄器上只有單一 波峰為止，再將收集液濃縮至乾，得到Paeoniflorin (8，2.1 g)。Fr. 3 以低壓製備式碳-8 逆相層析法進行純化，沖提液為MeOH-H2O (1:1)，

再以製備級高效液相色層分析法以製備式苯基型管柱進行純化分 離，流動相為MeOH-H2O (10:90)，得到化合物Ethyl gallate (2，30.3 mg)、Benzoic acid (4，230.7 mg)與p-Hydroxybenzoic acid (5，106.0 mg)。Fr. 4 以低壓製備式碳-8 逆相層析法進行純化，沖提液為 MeOH-H2O (1:1)，並以製備級高效液相色層分析法以製備式苯基型管 柱進行純化分離，流動相為MeOH-H2O (10:90)，再將收集液濃縮至 乾，得到Methyl gallate (4，4.2 mg)，而Gallic acid (1，1.6 g)以流動相 為MeOH-H2O (30:70)純化分離得到。Fr. 5 以低壓製備式碳-8 逆相層 析法進行純化，沖提溶媒為MeOH-H2O (1:1)，在此部分得到 2 個化合

物 分 別 為 3, 3'-Di-O-methylellagic acid (6 ， 9.3 mg) 和 4, 3'-Di-O-methylellagic acid (7，10.1 mg)。

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