大黃酚對人類肝癌細胞株 Hep3B 及肺癌細胞株 A549 在轉移

細胞轉移的過程，包含很多複雜的步驟，其中牽涉到細胞移動，

穿透基底膜，適應新環境等步驟。

在移動試驗的實驗結果顯示，Hep3 與 A549 若無藥物作用下（控 制組），本身原就擁有轉移的能力，控制組的細胞聚集的邊緣線隨著 時間增加而逐漸不規則，邊緣的細胞逐漸呈現不規則形態，原本沒有 細胞生長的區域，逐漸有細胞貼附，經過藥物處理的細胞，細胞邊緣 線較整齊，顯示細胞被大黃酚影響其移動能力（圖5-10-A～E；圖 5-10-K～O）。

（一）以細胞移動試驗分析大黃酚對人類肝癌細胞株Hep3B 之移動 現象之影響

A.

圖5-10-A 以50μM 濃度的大黃酚在 0 小時的時間點對 Hep3B 細胞 移動現象之影響（200 X）。

control 10μM 25μM

100μM 50μM 75μM

B.

圖5-10-B 以 50μM 濃度大黃酚在 6 小時的時間點對 Hep3B 細胞移 動現象之影響（200 X）。

C.

圖5-10-C 以50μM 濃度大黃酚在 12 小時的時間點對 Hep3B 細胞移 動現象之影響（200 X）

100μM 50μM 75μM

control 10μM 25μM

control

100μM 10μM 25μM

50μM 75μM

D.

圖5-10-D 50μM 濃度大黃酚在 24 小時的時間點對 Hep3B 細胞移 動現象之影響（200 X）

E.

圖5-10-E 50μM 濃度大黃酚在 36 小時的時間點對 Hep3B 細胞移 動現象之影響（200 X）。

control 10μM 25μM

100μM 50μM 75μM

control ^10μM 25μM

50μM 75μM 100μM

（二）以細胞穿透試驗分析大黃酚對人類肝癌細胞株 Hep3B 的細胞 穿透現象之影響

由穿透試驗的結果顯示，在顯微鏡的視野下，這Hep3B 細胞的 控制組從Transwell 的內底部移動到另一面的數目最多，而 IC50的藥 物濃度（50μM）下，細胞穿越到另一面的數目最少，加藥組 25μM 的數量比較多些（圖5-10-F），A549 細胞的控制組在顯微鏡的視野 下，也明顯多於加藥組（圖5-10-P），顯示大黃酚的抑制穿透能力隨 著藥物濃度而增加。

圖5-10-F 50μM 濃度大黃酚在 24 小時的時間點對 Hep3B 細胞穿透 現象之影響（200 X）。

control

25μM 50μM

（三）利用西方點墨法探討大黃酚對人類肝癌細胞株Hep3B 細胞 轉移相關調控蛋白表現量的差異

西方墨點法的結果顯示，大黃酚對於 Hep3B 細胞轉移相關的上 游調控PI3K 與 ERK 蛋白有降低表現的現象（圖 5-10-G），而對於下 游調控蛋白COX-2 及 MMPs 系列中的 MMP-1、MMP-2、MMP-7 蛋 白，其加藥組表現量，比控制組的表現量低（圖 5-10-H～I），另外對 於會促進微血管增生的刺激因子如VEGF 與 EPO 的生合成都有降低 的作用（圖5-10-J）。

（A）

（B）

圖5-10-G 以西方墨點法分析人類肝癌細胞株Hep3B 經相同濃度大 黃酚（50μM）作用不同時間（control、6、12、24、48、

72h）後，細胞中的蛋白相對表現量及量化統計圖；A 圖 左為 PI3K 蛋白的表現量，A 圖右為量化統計圖；B 圖左 為ERK 蛋白的相對表現量，B 圖右為量化統計圖。

（A）

（B）

圖5-10-H 以西方墨點法分析人類肝癌細胞株 Hep3B 經相同濃度大 黃酚（50μM）作用不同時間（control、6、12、24、48、

72h）後，細胞中的蛋白相對表現量及量化統計圖；A 圖 左為 MMP-1 蛋白的表現量，圖右為量化統計圖；B 圖左 為MMP-2 蛋白的相對表現量，圖右為量化統計圖。

（A）

（B）

圖 5-10-I 以西方墨點法分析人類肝癌細胞株 Hep3B 經相同濃度大 黃酚（50μM）作用不同時間（control、6、12、24、48、

72h）後，細胞中的蛋白相對表現量及量化統計圖；A 圖 左為 MMP-7 蛋白的表現量，A 圖右為量化統計圖；B 圖 左為 COX-2 蛋白的相對表現量，B 圖右為量化統計圖。

（A）

（B）

圖5-10-J 以西方墨點法分析人類肝癌細胞株Hep3B 經相同濃度大黃 酚（50μM）作用不同時間（control、6、12、24、48、72h）

後，細胞中的蛋白相對表現量及量化統計圖；A 圖左為 VEGF 蛋白的表現量，A 圖右為量化統計圖；B 圖左為 EPO 蛋白的相對表現量，B 圖右為量化統計圖。

（四）以細胞移動試驗分析大黃酚對人類肺癌細胞株A549 的細胞 移動現象之影響

圖5-10-K 以50μM 濃度大黃酚在 0 小時的時間點對 A549 細胞移動 現象之影響（200 X）。

圖5-10-L 以 50μM 濃度大黃酚在 6 小時的時間點對 A549 細胞移動 現象之影響（200 X）。

control 10μM 25μM

50μM 75μM 100μM

control 10μM 25μM

50μM 75μM 100μM

圖5-10-M 以50μM 濃度大黃酚在 12 小時的時間點對 A549 細胞移 動現象之影響（200 X）。

圖5-10-N 以50μM 濃度大黃酚在 24 小時的時間點對 A549 細胞移 動現象之影響（200 X）。

control 10μM

25μM

50μM 75μM

control 10μM 25μM

50μM 75μM 100μM 100μM

圖5-10-O 以50μM 濃度大黃酚在 48 小時的時間點對 A549 細胞移 動現象之影響（200 X）。

control 10μM 25μM

50μM 75μM 100μM

（五）以細胞穿透試驗分析大黃酚對人類肺癌細胞株A549 之細胞 穿透現象之影響

圖5-10-P 以 50μM 濃度大黃酚在 36 小時的時間點對 A549 細胞穿 透現象之影響（200 X）

control

50μM

（六）利用西方點墨法探討大黃酚對A549 細胞轉移相關調控蛋白之

ERK　expression (ratio of control) ERK

圖5-10-Q 以西方墨點法分析人類肝癌細胞株 A549 經相同濃度大黃

（A）

JNK　expression (ratio of control) JNK

MMP-1　expression (ratio of control)

MMP-1

（A）

（B）

（C）

0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2

c 6 12 24 48 72

time (hr)

NFκB　expression (ratio of control)

NFκB

圖5-10-S 以西方墨點法分析人類肝癌細胞株 A549 經相同濃度大黃 酚（50μM）作用不同時間（control、6、12、24、48、 72 hr）後，細胞中的蛋白相對表現量及量化統計圖；A 圖左 為 MMP-7 蛋白的表現量，A 圖右為量化統計圖；B 圖左 為 MMP-9 蛋白的相對表現量，B 圖右為量化統計圖，C 圖左為 NF-κB 蛋白的相對表現量，C 圖右為量化統計圖。

（A）

（B）

圖5-10-T 以西方墨點法分析人類肝癌細胞株 A549 經相同濃度大黃 酚（50μM）作用不同時間（control、6、12、24、48、72 hr）後，細胞中的蛋白相對表現量及量化統計圖；A 圖左 為 VEGF 蛋白的表現量，A 圖右為量化統計圖；B 圖左為 EPO 蛋白的相對表現量，B 圖右為量化統計圖。