大黃酚對人類肝癌細胞株 Hep3B 及肺癌細胞株 A549 細胞內

圖5-7-A. 細胞內 ATP 濃度檢測原理

本實驗利用luciferin 與 ATP 作用後會形成的螢光的特性以檢測在 大黃酚的作用下，是否導致癌細胞內ATP 濃度的下降，以此推測細 胞是否走向細胞壞死的路徑。

實驗結果顯示，以大黃酚處理 6 小時之後的 Hep3B 細胞及 A549 細胞，經冷光螢光儀檢測細胞螢光的強度差異，顯示加藥組比控制組 的螢光強度弱，表示細胞內 ATP 濃度降低而 100μM 大黃酚暴露的 A549 細胞，其 ATP 濃度上升。（圖 5-7-B ~ C）。

（一）大黃酚對人類肝癌細胞株Hep3B 的細胞內 ATP 產生之影響測 定

0 20 40 60 80 100

0 25 50 75 100 120

Concentration of chrysophanol (μM)

Intracellular ATP production ( % )

圖5-7-B 大黃酚依不同濃度作用於人類肝癌細胞株 Hep3B 6 小時之 後，利用冷光螢光儀檢驗不同濃度的細胞內 ATP 相對表現 量之統計圖（n = 3；＊表示 p < 0.05；＊＊表示 p < 0.01）。

＊ ＊ ＊ ＊ ＊

（二）大黃酚對人類肺癌細胞株 A549 的細胞內 ATP 產生之影響測定

0 20 40 60 80 100 120

0 25 50 75 100

Concentration of chrysophanol (μM)

Intracellular ATP production ( % )

圖5-7-C 大黃酚依不同濃度作用於人類肺癌細胞株 A549，在 6 個小 時之後，利用冷光螢光儀檢驗在不同藥物濃度作用下，細 胞內 ATP 相對表現量之統計圖（n = 3；＊表示 p < 0.05；

＊＊表示 p < 0.01）。

＊ ＊ ＊

第八節 大黃酚對人類肝癌細胞株 Hep3B 及肺癌細胞株

A549 細胞內 DNA 產生之影響

A

.

DAPI 會與 DNA 的雙股螺旋小溝的 A、T 區結合，當 DAPI 與 DNA 結合後會發出較強的藍色螢光，Hep3B 與 A549 在加藥處理並 培養48 小時之後，以 DAPI 染劑作用並觀察顯示隨著藥物濃度增加，

細胞數目呈現減少的現象，而細胞內的螢光強度逐漸增強，細胞具明 顯亮點的比例越來越明多。

B. 彗星試驗

彗星試驗是利用電泳原理，將受損斷裂的 DNA 片段分離出細胞 外，經由PI 染劑以觀察細胞外 DNA 的片段多寡，所以又稱為單細胞 電泳實驗，若DNA 受損的程度越嚴重，DNA 斷裂的片段就越多，電 泳拖尾的現象就更明顯，可用以評估DNA 受損的程度。由於先前的 流式細胞儀檢測細胞存活率結果顯示，在大黃酚處理Hep3B 與 A549 後的24 小時候，兩株細胞的存活率就已明顯的降低，所以彗星試驗 僅僅在藥物處理24 小時之後，就收取細胞進行電泳以觀察結果。結 果顯示藥物在低濃度就已出現細胞拖尾的現象，而且隨著藥物濃度增 加，拖尾的現象更明顯。

（一）大黃酚對人類肝癌細胞株Hep3B 造成的 DNA 傷害的檢測 A. DAPI 染劑的測試

圖5-8-A ^{不同濃度大黃酚作用在}Hep3B 細胞 48 小時後的 DAPI 試 驗，用螢光光源的倒立式顯微鏡觀察細胞的螢光強度 （100 X）。

50μM

100μM 75μM

10μM control

25μM

B. 大黃酚對人類肝癌細胞 Hep3B 作用後進行彗星試驗

圖5-8-B 利用彗星試驗檢測不同濃度大黃酚作用在人類肝癌細胞 Hep3B，在 48 小時之後，以螢光光源的倒立式顯微鏡觀察 細胞的拖尾狀況（200 X）。

（二）大黃酚對人類肺癌細胞株A549 造成的 DNA 傷害的檢測 A. DAPI 染劑的測試

圖5-8-C 不同濃度大黃酚作用在 A549 細胞，在 48 小時之後，利用 螢光顯微鏡觀察細胞核的螢光狀況（200 X）。

control 10μM

25μM 50μM

75μM 100μM

B. 大黃酚對人類肺癌細胞 A549 作用後進行彗星試驗

圖5-8-D 利用彗星試驗檢測不同濃度大黃酚作用在人類肝癌細胞 A549，在 48 小時之後，在螢光光源的倒立式顯微鏡下觀 察細胞的拖尾狀況（200 X）。

第九節 西方墨點法檢測參與 Hep3B 與 A549 細胞壞死的調