實驗材料

1. Acetic acid, glacial J.T. Baker, Inc. (Phillipsburg, NJ, U.S.A.) 2. Acetonitrile (LC Grade) J.T. Baker, Inc. (Phillipsburg, NJ, U.S.A.) 3. L (+)-Ascorbic acid Riedel-deHaën AG (Seelze, Germany) 4. Carbamazepine Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis,

MO, U.S.A.)

5. Caffeic acid Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, U.S.A.)

6. 5, 7-Dimethoxycoumarin Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI, U.S.A.)

7. Dimethylsulfoxide (DMSO)

Merck-Schuchardt (Hohenbrunn, Germany)

8. Genipin Challenae Bioproducts Co. Ltd (San Jose, CA, USA)

9. Geniposide Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

(Osaka, Japan)

10. Ethyl acetate (LC Grade) J.T. Baker, Inc. (Phillipsburg, NJ, U.S.A.) 11. Ethyl alcohol 台灣菸酒公賣局 (Taiwan)

12. Ethyl ether Shimakyu’sPureChemicals(Osaka, Japan)

13. Heparin Novo Nordisk (Bagsvaerd, Denmark) 14. Hydrochloric acid Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

(Osaka, Japan)

15. Methotrexate (25 mg/mL) Wyeth Pharma Gmbh (Wolfratshausen, Germany)

16. Methyl alcohol (LC Grade) J.T. Baker, Inc. (Phillipsburg, NJ, U.S.A.) 17. Methyl paraben Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis,

MO, U.S.A.) 18. Mili-Qplus water

(Milli-Q® )

Millipore corporation (Billerica, MA, U.S.A.)

19. Ortho-phosphoric acid

(85%) Riedel-deHaën AG (Seelze, Germany) 20. Phenytoin Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO,

U.S.A.) 21. Polyethylenglycol 400

(PEG 400)

Merck-Schuchardt (Hohenbrunn, Germany)

22. Sesamol Sigma Chemical Co. (Saint Louis, MO, U.S.A.)

23. Sodium acetate, anhydrous Sigma Chemical Co. (Saint Louis, MO, U.S.A.)

24. Sodium hydroxide Merck-KgaA (Darmstadt, Germany) 25. Sulfatase (type H-1, from

Helix pomatia)

Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, U.S.A.)

26. TDx^®TDxFLx^®

Methotrexate monoclonal whole blood reagent pack

Abbott Laboratories (Abbott Park, Il, U.S.A.)

二、器材及儀器設備

1. 酸鹼測定儀

Microprocessor pH-mV meter

Wissenschaftlich-Technische Werkstätten GmbH & Co. KG (Weilheim, Germany)

Branson Ultrasonics Co. (Taiwan) 5. 控溫往復式振盪水槽

BT-350

Yih Der Instruments Co., Ltd.

(Taiwan)

Pipette 2-20 L, 10-100 L, 20-200L, 100-1000 L

Gilson S.A.S. (Entrepreneurs, Villiers Le Bel, France)

9. 水壓抽氣機

Eyela Aspirator A-2S

Tokyo Rikakikai Co. Ltd. (Tokyo, Japan)

10. 電熱板 HP-20

11. 高效液相層析儀－紫外光檢出器 (High Performance Liquid

Shin Kwang Machinery Industry (Taiwan)

Chromatography－UV)包括:

幫浦

LC-10ATVP Shimadzu (Kyoto, Japan) 層析管

Cosmosil 5C18-AR-Ⅱ (150×4.6 mm i.d, 5 m) Apollo C18 5(250×4.6 mm)

Nacalai Tesque (Kyoto, Japan) Alltech P.J. Cobert Associates, Inc.

管柱前濾膜

Xpertec^® 0.5m (UPCH A-102X) P.J. Cobert Associates, Inc. (St.

Louis, Missouri, USA) 紫外光偵測器

UV-VIS detector SPD-10AVP Shimadzu (Kyoto, Japan) 自動進樣器

SIL-10AF Shimadzu (Kyoto, Japan) 除氣裝置

ERC-3415α Shimadzu (Kyoto, Japan) 樣品冷卻槽 Shimadzu (Kyoto, Japan)

12. 螢光偏極免疫分析儀 TDxFLx Analyzer

Abbott Laboratories (Abbott Park, Illinois, U.S.A.)

13. 拋棄式注射針及針筒

1.0 mL syringe (0.45×13 mm) 3.0 mL syringe (0.55×25 mm) 5.0 mL syringe (0.65×32 mm)

Terumo Medical Corporation

Axygen Scientific, Inc. (Union City, CA, U. S. A.)

16. 微量離心管

Microtubes (1.7 mL)

Axygen Scientific, Inc. (Union City, CA, U. S. A.)

17. 濾膜

Millipore carrigtwohill, Co.

Millex^® (0.45 m, 13 mm; 0.22

m, 13 mm)

(Cork, Ireland)

18. 玻璃試管 (12×75 mm)

Kimble glass Inc. (U.S.A.)

19. 血清塞 弘光企業有限公司 (Taiwan)

20. 混合氣體 吉源行有限公司 (Taiwan)

三、藥材

梔子購自台中市欣隆藥行。

四、動物

Sprague-Dawley (SD) 大鼠，購自國家實驗動物中心，購入後飼養於 中國醫藥大學動物中心，環境溫度控制在攝氏 221℃，12 小時光照與 黑暗循環之環境中，相對溼度維持 5010%。動物試驗遵循中華民國實 驗動物學會 2002 年所編纂之「實驗動物飼養與使用操作手冊」 (A guide book for the care and use of laboratory animals)。

五、溶液製備

(一) Geniposide 及 genipin 標準溶液

精確稱取 geniposide 及 genipin 各 1.0 mg，分別加入甲醇定容至 1.0 mL，即得 1.0 mg/mL 之儲備溶液，再以甲醇稀釋成各種所需濃度 之標準溶液；genipin 需於使用前新鮮配製。

(二) 內標準溶液

1. 精確稱取 sesamol 5.0 mg，加入甲醇定容至 5.0 mL，即得 1.0 mg/mL 之儲備溶液，再以甲醇稀釋成各種所需濃度之內標準溶液。

2. 精確稱取 caffeic acid (CA) 5.0 mg，加入甲醇定容至 5.0 mL，即得 1.0 mg/mL 之儲備溶液，再以甲醇稀釋成各種所需濃度之內標準溶液。

3. 精確稱取 methylparaben (MP) 10.0 mg，加入乙酸乙酯定容至 10.0 mL，即得 1.0 mg/mL 之儲備溶液，再以乙酸乙酯稀釋成各種所需濃 度之內標準溶液。

4. 精確稱取 MP 10.0 mg，加入甲醇定容至 10.0 mL，即得 1.0 mg/mL 之 儲備溶液，再以甲醇稀釋成各種所需濃度之內標準溶液。

5. 精確稱取 5, 7-dimethylcoumarin (5,7-DMC) 10.0 mg，加入乙酸乙酯定 容至 10.0 mL，即得 1.0 mg/mL 之儲備溶液，再以乙酸乙酯稀釋成各 種所需濃度之內標準溶液。

6. 精確稱取 5,7-DMC 10.0 mg，加入甲醇定容至 10.0 mL，即得 1.0 mg/mL 之儲備溶液，再以甲醇稀釋成各種所需濃度之內標準溶液。

(三) 人工腸液之製備

取磷酸二氫鉀 (KH2PO4) 6.8 g 溶於水 250 mL 中，再加入 0.2 N 氫氧化鈉溶液 190 mL 及水 400 mL ，以 0.2 N 氫氧化鈉溶液調節 pH 至 7.50.1 後，加水至 1 L。

(四) 緩衝液 (pH 5.0)

稱取無水醋酸鈉 0.82 g，加水溶解後，稀釋至 100 mL 即為 0.1 N 醋酸鈉溶液。量取醋酸 (d = 1.049) 0.6 mL，加水稀釋至 100 mL 即為 0.1 N 醋酸溶液。取 0.1 N 醋酸鈉溶液 (sodium acetate) 68.0 mL，加 入 0.1 N 醋酸溶液至 100 mL，再加 1.0 N 氫氧化鈉將 pH 值調至

5.00.1。

(五) 0.1 N 氫氧化鈉溶液

取氫氧化鈉 (sodium hydroxide) 0.4 g，加水溶解後，稀釋至 1 00 mL。

(六) 1.2 N 鹽酸溶液之製備

取濃鹽酸 11.4 mL，加水稀釋至 100 mL。

(七) Sulfatase 溶液

取 Sulfatase (15300 units/g, type H-1) 3.3 g，以 pH 5.0 緩衝溶液 溶解使成 50 mL，儲備於 -20℃ 備用。

(八) 抗壞血酸溶液

稱取抗壞血酸 100 mg，加水至 1 mL 即得 100 mg/mL 之抗壞血 酸溶液，使用前新鮮製備。

(九) Methotrexate (MTX) 溶液

精確量取 MTX 2.0 mL (25 mg/mL)，加水定容至 20.0 mL，即得 2.5 mg/mL 之 MTX 溶液，使用前新鮮製備。

(十) Phenytoin (PHT) 溶液

精確稱取 PHT 400.0 mg，加少量水混合均勻，加 0.1N NaOH 120

L，再加水定容至 10.0 mL 即得 40.0 mg/mL 之 PHT 溶液，使用前 新鮮製備。

(十一) Carbamazepine (CBZ) 溶液

精確稱取 CBZ 400.0 mg，加 DMSO 1 mL，PEG 400 5 mL，混合 均勻，再加熱水定容至 10.0 mL，即得 40.0 mg/mL 之 CBZ 溶液，

使用前新鮮配製。