Genipin 於大鼠體內之代謝動力學

雄性 SD 大鼠 21 隻，體重介於 260～400 g，實驗前先禁食 12 小時。

(二) 靜脈快速注射給藥及採血

精確稱取 genipin 500.0 mg，以 PEG 400 10.0 mL 溶解，即得 50.0 mg/mL 之 genipin 溶液，使用前新鮮製備並經 0.2m 滅菌濾 膜 (cellulose acetate)，除去熱原。於麻醉狀況下，尾靜脈注射給予 50.0 mg/mL/kg genipin，給藥後 5、15、30、60、120、180、240 及 360 分鐘，以心臟穿刺方式採血 1 mL。將血液檢品置於含 heparin 之微量離心管，並以手輕輕轉動，使管內的血液與 heparin 混合均 勻，立即以 9860 × g 離心 15 分鐘，取上層血漿立即進行前處理，

俟後分析。

(三) 口服給藥及採血

分別精確稱取 genipin 100.0、200.0 mg，以 PEG 400 10.0 mL 溶解，即得 10.0、20.0 mg/mL 之 genipin 溶液，使用前新鮮製備。

經由胃管投予 100.0、200.0 mg/10 mL/kg 之 genipin，給藥後 5、

15、30、60、120、180、240、360、480、720、1440、2160 及 2880 分鐘，以心臟穿刺方式採血 0.5 mL。將血液檢品置於含 heparin 之

微量離心管，並以手輕輕轉動，使管內的血液與 heparin 混合均 勻，立即以 9860 × g 離心 15 分鐘，取上層血漿立即進行前處理，

俟後分析。

(四) 血漿檢品前處理

1. 血漿中自由態 genipin 之定量

取血漿檢品 200 L，置於冰溶上，加 pH 5.0 之緩衝溶液 100

L 及 100 mg/mL 抗壞血酸溶液 50 L，於渦旋振盪器上充分混 合。

2. 血漿中 genipin sulfate 之定量

取血漿檢品 200 L，置於冰溶上，加 1,000 unit/mL sulfatase 100L 及 100 mg/mL 抗壞血酸溶液 50 L，於渦旋振盪器上充分 混合後，於 37℃ 之往復式振盪水槽反應 30 分鐘。

前述 1、2 檢品，以含內標 (1.0 g/mL MP) 之乙酸乙酯 350 L 萃取之，於渦旋振盪器混合後，以 9860 × g 離心 15 分鐘，取出 乙酸乙酯層，以氮氣吹乾後，加甲醇 50 L 溶解，取 20 L 以 HPLC 分析。

(五) 血漿標準溶液之製備

精確稱取 genipin 1.0 mg，以甲醇 1 mL 溶解，加入空白血漿 定容，並次第稀釋，製備濃度為 0.1、0.2、0.3、0.6、1.3、2.5、5.0

及 10.0 g/mL 之血漿標準溶液。

(六) 檢量線之繪製

取血漿標準溶液 200 L，加 pH 5.0 緩衝液 100 L、100 mg/mL 抗壞血酸 50 L，混合均勻，再以含內標 (1.0 g/mL MP) 之 乙酸乙酯 350 L 萃取之，於渦旋振盪器混合後，以 9860 × g 離心 15 分鐘，取乙酸乙酯層，以氮氣吹乾後，加甲醇 50L 溶解，取 20

L 以 HPLC 分析，所得之 genipin 與內標之波峰面積比值，與濃 度進行線性迴歸，求得檢量線方程式。

(七) 高效液相層析 (HPLC) 分析條件

分析管柱：Apollo C18 5(250×4.6 mm)

移 動 相：0.1 % phosphoric acid：acetonitrile = 78：22 沖提時間：25 min

流 速：1.0 mL/min 檢測波長：240 nm

內 標：MP (1.0 g/mL) (八) 分析系統及方法之確效

1. 精密度

將各濃度之血漿標準溶液，分別於同日內早、午、晚及連續三 日之異日間各進行一次層析，並以獲得之檢量線方程式求得每次實

測濃度。以三次同日內及三次異日間實測濃度分別求其平均值、標 準偏差及變異係數。

2. 準確度

三次同日內及三次異日間實測濃度與真正濃度間之相對誤差表 示之。

3. 靈敏度

將 genipin 血漿標準溶液一再稀釋，直至其波峰與雜訊之比值 為 3 時之濃度為其偵測極限。

4. 回收率

將 3.1、12.5 及 50.0 g/mL 三種濃度之 genipin 標準溶液 (溶於甲醇) 100 L，分別加入空白血漿 900 L，製備 0.3、1.3 及 5.0 g/mL 三種濃度之標準溶液各三份，所測得之濃度除以理論濃 度，即回收率。

回收率 ＝ (genipin實測濃度) / (genipin理論濃度) (九) 數據處理

Sulfatase 水解後所測得 genipin 之濃度減去 genipin 自由態 之濃度，即為 genipin sulfate 之濃度。

(十) 數據分析

使用 WinNonlin (version 1.1；Pharsight Corp., U.S.A.) 之非室體

模式及 Excel (version 7.0, Microsoft) 等軟體計算動力學參數。

五、 梔子水煎劑中 geniposide 之定量分析