小型肝細胞於 PMMA 微流道培養結果

4.9.1 於不同濃度膠原蛋白修飾的微流道之培養結果比較

利用成熟肝細胞找出較適合之 PMMA 微流道製程條件後 (圖 4-11) ，我們接 著嘗試在 PMMA 微流道上培養小型肝細胞。而為了找出於較適合小型肝細胞生 長的條件，我們比較一般用於修飾在 2D dish 培養 (0.1 mg/mL) 、及實驗室前人 用於 PDMS 微流道中 (0.3 mg/mL) 的不同膠原蛋白濃度來進行探討。由顯微鏡下 之觀察結果得知在 0.1 mg/mL 的膠原蛋白修飾之 PMMA 微流道上培養 1 天後 的細胞大多成一聚集而非貼附之型態 (圖 4-13 A) ，而經 ReadyProbes^® Cell Viability Imaging Kit 染色觀察後，綠色螢光之表現較多，表示其聚集的細胞大多 為死細胞 (圖 4-13 C) ； 而以 0.3 mg/mL 膠原蛋白修飾之 PMMA 微流道上，細 胞較多呈貼附生長的形態 (圖 4-13 B) ，且在染色結果也發現細胞生存率較 0.1 mg/mL 濃度下修飾 PMMA 微流道上培養結果高 (圖 4-13 D) 。這些結果表示經 0.3 mg/mL 膠原蛋白修飾的 PMMA 微流道較適合小型肝細胞生長。

doi:10.6342/NTU201803374 58

圖 4-13 為小型肝細胞在修飾不同濃度的膠原蛋白濃度 PMMA 流道下培養 1 天，分別以相位差顯微鏡以及螢光顯微鏡所觀察之結果； (A) 為修飾 0.1 mg/mL 的膠原蛋白的 PMMA 微流道上培養 1 天的小型肝細胞在相位差顯微鏡下之觀 察結果， (B) 為修飾 0.3 mg/mL 的膠原蛋白的 PMMA 微流道上培養 1 天的小 型肝細胞在相位差顯微鏡下之觀察結果， (C) 為修飾 0.1 mg/mL 的膠原蛋白的 PMMA 微流道上培養 1 天的小型肝細胞在螢光顯微鏡下之觀察結果， (D) 為修 飾 0.3 mg/mL 的膠原蛋白的 PMMA 微流道上培養 1 天的小型肝細胞在螢光顯 微鏡下之觀察結果。藍色：DAPI，綠色：NucGreen^® Dead reagent。 (Scale bar = 200 μm) 。

doi:10.6342/NTU201803374 59

4.9.2 以膠原蛋白修飾的培養皿與微流道之培養結果比較

最後我們比較小型肝細胞在 Dish 及 PMMA 流道上培養一天後的細胞生長 情況。Dish 上的小型肝細胞雖有貼附 (圖 4-14 A) ，但在染色後發現細胞死亡率 為 49.5 % (圖 4-14 C) ，而 PMMA 流道上之細胞經一天培養後生存率為 76.4 % (圖 4-14 D) ，相較 Dish 之結果高了約 27 %，表示在 PMMA 流道上培養的小 型細胞有較好的生長情況，但細胞機能仍需進一步的確認。

圖 4-14 為小型肝細胞在 Dish 及 PMMA 流道下培養 1 天，分別以相位差顯微 鏡以及螢光顯微鏡所觀察之結果， (A) 為 Dish 上培養 1 天的小型肝細胞在相位 差顯微鏡下之觀察結果， (B) 為 PMMA 流道上培養 1 天的小型肝細胞在相位差 顯微鏡下之觀察結果， (C) 為 Dish 上培養 1 天的小型肝細胞在螢光顯微鏡下之 觀察結果， (D) 為 PMMA 流道上培養 1 天的小型肝細胞在螢光顯微鏡下之觀察 結果。藍色：DAPI，綠色：NucGreen^® Dead reagent。 (Scale bar = 100 μm) 。

doi:10.6342/NTU201803374