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即時定量 PCR(real-time PCR)

即時定量PCR 是一種將傳統 PCR 加以改良的新型聚合酵素鍊鎖反應,其優點 是能夠在PCR 反應進行的同時,即時測量 DNA 的產量,進而將 PCR 的結果數值化。

由於PCR 反應是以 2 的倍數在放大原始的範本(template),因此在反應最初加入的 範本越多,進行相同次數的PCR 反應後,所得的產物也就越多。傳統的 PCR 方法 中,最後產物的濃度要靠跑膠後以螢光定量,但real-time PCR 則可以在反應的過程 中,就即時偵測每次反應後,產物的數量,不僅節省時間,也為整個實驗提供了更 真實可信的數據。

目前在real-time PCR 中,使用來偵測 PCR 產物的方法主要有 TaqMan probes 與SYBR green I dye 兩種方式。TaqMan probes 是在 PCR 的反應中,除了原本的 primer 之外,再加入針對PCR 產物有特異性(specificity)的探針(probe)。在此探針上的 兩端,分別接有會放出螢光的標定物(reporter)與會吸收標定物能量的抑制劑

(quencher)。當此兩種物質同時存在於探針上時,由於抑制劑會把標定物的能量吸 收,所以就偵測不到標定物所放出來的螢光;相反的,當PCR 反應進行時,此探針 會被破壞,使得標定物與抑制劑分開,此時標定物就能夠穩定的放出螢光,而此法 也就是藉著偵測標定物所發出的螢光強度,來為PCR 產物定量。

第二種方法是使用SYBR green I 這種會結合到雙股 DNA 上的螢光染劑,隨著 PCR 反應的進行,在每次延伸(extension)期的最後,就會有越來越多的雙股 DNA 存在,因此也就能偵測到較強的螢光強度。

TaqMan probe SYBR green I dye

酵素免疫分析法(ELISA)

早在1970 年代,除了顆粒性凝集反應(agglutination tests)和放射免疫分析法

(radioimmunoassay,RIA)之外,科學家就已發展出固相酵素結合試劑(solid phase enzyme-coupled reagent)的分析法,對抗原與抗體進行簡單又靈敏地偵測和定量。

其主要原理是將酵素以化學鍵連結至抗原或抗體後,再被用來測定免疫複合物 (immune complexes),而此複合物是在一固相(solid phase)中形成。

實驗中,將未結合到免疫複合物上的酵素連結物洗去,接著加入受質與酵素反

RNA 干擾(RNA interference,RNAi)

RNA 干擾是近年來在生物學研究上,時常被大家使用來抑制特定基因表現的一 種實驗方法。RNA 干擾現象,在 1998 年首度在線蟲中發現,將雙股 RNA(dsRNA)

送入細胞中後,dsRNA 會被一種名為 Dicer 的酵素切割成許多小片段,這些小片段 的RNA(short interfering RNA,siRNA)結合到與其序列互補的特定序列之 RNA 上後,會引發這些RNA 的降解,使得 mRNA 無法轉譯為蛋白質,進而抑制了特定

elegan—優雅的字根

若 見 過 Caenorhabditis elegans 曼 妙 的 身 段 及 渾 然 天 成 的 爬 行 弧 線 , 就 不 難 想 像 為 何 有 人 稱 Caenorhabditis elegans為秀麗線蟲。

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