抽出物之抑制細胞增殖活性

Samples Concentration

（μg/ml）

Cell dead Cell dead

巨峰葡萄肉 177 51.0 ± 3.8* 2.3 ± 0.4

從表三可以得知，在這七樣初篩蔬果中，以巨峰葡萄籽的抑制細 胞增殖活性很好，對於巨峰葡萄籽誘導分化方面，從 NBT 的百分比 例值來看，在濃度 0.1μg/ml下具有不錯的分化能力。但巨峰葡萄籽的 抑制細胞增殖活性優於誘導分化，因此其抑制細胞增殖活性成分，值 得進ㄧ步做分離研究。

（2）本實驗為巨峰葡萄籽不同有機溶媒之抽出物對 HL-60 cell 之抑制增殖活性

將葡萄籽甲醇抽出物溶於蒸餾水中，再以正己烷抽取數 次，經減壓濃縮後得到正己烷抽出物。剩餘水溶液再以氯仿抽取數 次，經減壓濃縮後得氯仿抽出物。剩餘水溶液再以乙酸乙酯抽取數 次，經減壓濃縮後得乙酸乙酯抽出物。最後剩餘水溶液經冷凍乾燥後 得水抽出物，分別稱取 2-3 毫克，用 DMSO 配製各濃度，進行藥理 試驗。其結果如表四：

表四、不同有機溶媒之抽出物對 HL-60cell 之抑制增殖活性比較

Fraction Concentration

（μg/ml）

HL-60 cells (2.0 × 10⁴cells/well) were treated for 72 h.

The data are presented as mean ± SD from three independent experiments.

* P ＜ 0.05 ；** P ＜ 0.01；*** P ＜ 0.001 compared with control.

ND：not determeined

由表四中，從 MTT assay (%)的數據看來，水抽出物與乙酸乙酯

（3）乙酸乙酯抽出物繼續分離所得 EA₂之抑制細胞增殖活性

Fraction Concentration

（μg/ml）

MTT assay (%) IC50

Control 100.0 ± 7.3

EA1 5 70.4 ± 2.4

HL-60 cells (2.0 × 10⁴cells/well) were treated for 72 h.

The data are presented as mean ± SD from three independent experiments

*** P ＜ 0.001 compared with control.

由於 EA₁的溶解度極差，所能配製的最高濃度為 5 μg/ml，因 此無法計算其 IC₅₀，而由表五得知，EA₂的 IC₅₀為 20.83 μg/ml，因此 將 EA₂繼續做分離的工作。

（4）本實驗測試由 EA₂，經過 Sephadex LH-20 column 後的分劃，

將收集液分成 Fr. A ~Fr. H，分別對 HL-60 血癌細胞之抑制增殖活性，

其結果如表六所示：

表六、EA2之 sephadex 分劃 Fr. A ~Fr. H，分別對 HL-60 cell 之抑制增殖活性 Fraction Concentration

（μg/ml）

MTT assay (%) IC₅₀

Control 100.0 ± 0.0

A 2.5

由表六得知，Fraction A 的藥理活性 IC₅₀低於7.6μg/ml；Fraction B 的最低濃度 5 μg/ml，數據上看來似乎有抑制細胞增殖的效果，但 在鏡檢下發現是由於細胞在 well 中長的過滿，導致細胞死亡。Fraction E 及 F 藥理活性 IC50介於 10-20 μg/ml；Fraction D 及 H 藥理活性 IC₅₀ 界於 30-40 μg/ml。因此實驗按照順序將 Fraction A-E 繼續做分離的工 作。

（5）由 Fr. A ~Fr. H 中所分離出來的化合物，分別對 HL-60 cell 之抑制增殖活性，其結果如表七所示：

表七、三個化合物分別對 HL-60 cell 之抑制增殖活性 Compound Concentration

（μg/ml）

MTT assay (%) IC₅₀

（μg/ml）

control 100.0 ± 0.0

I (gallic acid)

1

The data are presented as mean ± SD from three independent experiments.

** P ＜ 0.01；*** P ＜ 0.001 compared with control.

由表七得知，化合物 I 經結構鑑定為 gallic acid，其 IC₅₀ 為 3.1 μg/ml；而化合物 II 及 III，其 IC₅₀皆大於 100 μg/ml。

（6）3 個化合物對其他貼附性細胞株的篩選。

本實驗測試由所分離出三個化合物，分別對 B16-F₀ cell(黑色素瘤細胞) 、H226 (肺癌細胞)、 J5 (肝癌細胞)、MDA KB-231 (乳癌細胞)之抑制增殖活性進行篩選，其結果如表八、九、十、十一

表八、化合物與標準品分別對 B16-F₀cell 之抑制增殖活性

Compound Concentration

（μM）

MTT assay (%) IC₅₀

（μM）

control 100.0 ± 0.0

I (gallic acid)

1

B16-F0cell（1.0×10⁴cells/well） were treated for 72 h.

The data are presented as mean ± SD from three independent experiments.

*** P ＜ 0.001compared with control.

表九、化合物與標準品分別對 NCI-H226 cell 之抑制增殖活性

Compound Concentration

（μM）

MTT assay (%) IC50

（μM）

control 100.0 ± 0.0

I (gallic acid)

10

NCI-H226 cell（2.0×10⁴cells/well）were treated for 72 h.

The data are presented as mean ± SD from three independent experiments.

*P ＜ 0.05 ； *** P ＜ 0.001 compared with control.

表十、化合物與標準品分別對 J5 cell 之抑制增殖活性

Compound Concentration

（μM）

MTT assay (%) IC₅₀

（μM）

control 100.0 ± 0.0

I (gallic acid)

10

J5 cell（1.0×10⁴cells/well） were treated for 72 h.

The data are presented as mean ± SD from three independent experiments.

*P ＜ 0.05 ；** P ＜ 0.01；*** P ＜ 0.001 compared with control.

表十一、化合物與標準品分別對 MDA KB-231 cell 之抑制增殖活性

Compound Concentration

（μM）

MTT assay (%) IC50

（μM）

control 100.0 ± 0.0

I (gallic acid)

10

MDA KB-231 cell（4.0×10⁴cells/well） were treated for 72 h.

The data are presented as mean ± SD from three independent experiments.

*P ＜ 0.05 ；** P ＜ 0.01 compared with control.

由表八、九、十、十一得知，化合物 I 、II與III對所測試的四 株細胞株， IC50皆大於100 μM；而化合物I對B16-F0cell、J5 cell有不 錯的藥理活性。在此三個化合物中，化合物I的活性優於化合物 II 及 III。

在一連串針對 HL-60 血癌細胞，所做的藥理活性追蹤中顯示，

從甲醇粗抽物，一路選擇由乙酸乙酯抽出物繼續做分離的工作。乙酸 乙酯抽出物的藥理活性為 IC₅₀＝ 23.58 μg/ml；EA₂的藥理活性 IC₅₀

＝20.83 μg/ml；從 EA₂劃分出的 Fr. A，其藥理活性為 IC₅₀＝7.57 μg/

ml；最後所得的化合物 I，其藥理活性為 IC50＝3.1 μg/ml，經結構鑑 定為 gallic acid，而化合物 II 及 III 藥理活性 IC₅₀皆大於 100 μg/ml。

由上得知本研究所追蹤的活性成分，應為 gallic acid。