第二章 研究方法
第一節 描述性統計分析
為了解在休克及復甦治療之後是否對於心肌細胞有型態上面的影 響,我們使用 H.E.染色法來觀察,我們分別對於對照組、休克組在第 0,4,8 小時取得的左心室心肌檢體作分析。
從對照組可見清晰的細胞核及緊密的心肌細胞排列;而在休克組中隨 著時間的增加,雖然沒有明顯全面細胞核的縮小,但是可見到些許心肌細 胞的細胞質染色上面漸漸淡化,而心肌細胞的排列也漸漸鬆散(Fig.1);
在復甦組中的心肌細胞相對於休克組,隨著時間的增加也出現有些許鬆散 情形,但是相對於休克組鬆散程度、細胞核質變化都相對休克組輕微(Fig.
2)。
3.1.2 NFκB
在休克或休克加上復甦治療後我們偵測 NFκB 及磷酸化 NFκB(p- NF κB)的蛋白量
。
NFκB 和α actin 的比值在前 8 小時之內有上升的趨勢,特別在休克後八小時的休克組對於同時間的對照組有 23%的顯著上升 (p<0.05),另外,同時間的復甦組相對於對照組組有 35%的顯著下降
(p<0.05) (Fig.3)。
3.1.3 TNF-α
在設定的三個時間點裡相對休克組和對照組 TNF-α和 β-actin 的比 值都沒有統計學上的差異。復甦組在 0 小時的量相對於休克組有 50%的顯 著下降(p<0.05)(Fig.4)。
3.1.4 Fas/fasL 和 FADD
相對於對照組,休克組中所有時間點的 fasL 和 β-actin 的比值都顯 著的上升,尤其在第 4 小時的時間點上,約有 5 倍的上升( p<0.01)。另 外,休克組中 FADD 和 β-actin 的比值在第四小時相對於對照組有兩倍的 顯著上升(p<0.01)。復甦組的 FasL 和 β-actin 的比值在 4 小時及 8 小時 相對於對照組皆有 50%的顯著下降(p<0.01,p<0.05)。復甦組 FADD 和 β-actin 的比值在復甦治療後第八小時的時間點相對於休克組有 50%的顯 著下降( p<0.01) (Fig.5)。
3.1.5 p-Bad/Bax 和 Bid/truncated Bid (tBid)
休克組中 Bax 和 tBid 對於β-actin 的比值隨著時間有上升的趨勢。
在第 8 小時的時候,休克組的 Bax 和βactin 比值以及 tBid 和βactin 比 值個別有 1.5 倍及 4 倍的顯著上升(p<0.05)。復甦組的 Bax 和 tBid 對於
βactin 的比值相對於休克組於第 4 與第 8 小時個別有 50%顯著的下降 (p<0.05)(Fig.6,7)。
3.1.6 IGF1R 和 磷酸化 Akt
復甦組 IGF1R 和磷酸化 Akt 的比值相對於休克組在第 8 小時間點時有 顯著的下降(Fig.8,9)。
3.1.7 TUNEL stain
在休克及休克加上復甦治療後,我們於不同的時間點取得的心肌細 胞,用 DAPI 染色法以及 TUNEL 染色法去偵測心肌細胞是否產生了凋亡的 現象。可以明顯見到心肌細胞在創傷並未併發休克時,就有出現約 17.83 % 的細胞產生凋亡現象,然而休克組將引起相對於對照組的心肌細胞約三倍 左右(58.39%)數目的心肌細胞凋亡(Fig.10),而在經過復甦治療組可以部 分抑制凋亡產生的細胞數目(23.4%)。在休克後第四及第八小時的心肌細 胞,休克組皆有約五成左右的心肌細胞凋亡,在接受復甦治療的組別均有 部分抑制的效果(Fig.11,12)。