杭菊萎凋病分離菌株病原性檢定

(一) 杭菊健康苗之繁殖

自屏東江夏有機農場提供小朵黃花品系之杭菊、苗栗農友曾逸弘先生提供黃 花品系之杭菊、以及苗栗改良場作物改良課提供白花品系之杭菊，以此些杭菊植 株作為扦插穗母株來源，用以扦插繁殖，結果可以發根育出健康菊苗。(圖 12)

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圖 12、臺大中非大樓頂樓簡易溫室中扦插成功之健康杭菊苗。

Figure 12. The healthy chrysanthemum seedlings grown in NTU green house.

(二) 杭菊病株分離所得鐮胞菌分離株之病原性測試

自苗栗杭菊發病之病株分離所得之鐮胞菌株共 4 菌株，經由剪根浸泡菌液 接種法接種健康杭菊盆苗結果如表 10。接種一個月後，發現所有實驗組及對照 組皆未出現萎凋病徵。

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表 10、自苗栗萎凋病杭菊分離所得四株鐮胞菌分離株對健康菊苗剪根浸泡接種 之結果

Table 10. The pathogenicity test results from Fusarium isolates through a root prunting method on healthy chrysanthemum seedlings.

鐮胞菌株 F412 F421 F522 F322 水對照組 萎凋病發病率 0/3(0％) 0/3(0％) 0/3(0％) 0/3(0％) 0/3(0％)

*為接種一個月後觀察所得。

(三) 杭菊病株分離所得細菌分離株之病原性測試 1. 細菌分離株對葉片注射之病原性測試

細菌分離株係以壓力注射法接種杭菊葉片，注射後無反應者維持原樣 (圖 13)。

有反應者會在原注射部位產生水浸狀之區域呈現壞疽 (圖 14)。本項之測試結果 如表 11。發現供測菌株中，分離株 HG02 有最明顯的壞疽產生，故後續試驗皆 以 HG02 作為主要接種分離株。另一分離株 HG01 亦有反應但較不明顯，故後 續盆栽試驗也會以此分離株進行比較測試。

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表 11、杭菊病株分離所得細菌分離株以壓力注射法對離體葉片接種結果 Table 11. The inoculation results of bacteria isolates derived from diseased chrysanthemum by syringe infiltrtion method on detached leaf.

菊花品種 離體葉片注射不同菌株菌液之發病率

HG01 HG02 HG05 None(CK) 小黃菊 1/3(33％)** 3/3(100％)* 0/3(0％) 0/3(0％) 大黃菊 1/3(33％)** 3/3(100％) 0/3(0％) 0/3(0％) 大白菊 0/3(0％) 3/3(100％)* 0/3(0％) 0/3(0％)

*有部分葉片病斑會擴散。

**沒有明顯壞疽但產生顏色變化。

圖 13、杭菊葉片以壓力注射接種無病原性細菌分離株 HG05 之結果

Figure 13. The chrysanthemum leaf after infiltration with nonpathogenic bacterium isolate HG05.

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圖 14、杭菊葉片以壓力注射接種 HG02 菌液後產生過敏反應壞疽。

Figure 14. Necrosis on a chrysanthemum leaf caused by syringe infiltrating with the suspect pathogen HG02.

2. 菌液對杭菊苗灌根接種之病原性測試

本病原性測試係將製備好之 HG02 細菌懸浮液，直接定量灌入受試菊苗基 部 (植株未斷根處理) 以進行接種，試驗結果如表 12。本實驗結果發現在 6 株 處理中，在接種三週後只有一株發生萎凋。

表 12、杭菊病株分離所得似青枯病菌 HG02 以菌液灌根接種之結果。

Table 12. The inoculation results of the bacterial isolate HG02 derived from diseased chrysanthemum on healthy seedlings by a soil drenching method.

菊花品系 杭菊盆苗灌根接種之發病率*

HG02 None (CK)

白花 1/6(17％) 0/6(0％)

＊發病率係處理 3 週後觀察而得，一株為一重複，共 6 重複。

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3. 菊苗以菌液浸根接種之病原性測試

本試驗係以細菌分離株 HG01 及 HG02 進行對黃花、白花、小朵黃花三種 品系杭菊之病原性測試，方法為取剪去三分之一長度根處理之裸根盆苗浸泡於 150 mL 菌液中各 30 分鐘。結果呈現如表 13 及表 14。表 13 中比較兩細菌分 離株致病力之差異，結果顯示細菌分離株 HG01 和無菌水對照組沒有顯著差異。

表 14 比較三種杭菊品系對分離株 HG02 之感受性差異，結果顯示小朵黃花接 種後完全沒有發病，在三個品系中最不感病；黃花品系介於兩者之間，而白花品 系在三者之中最為感病。罹病之病株多由下位葉開始萎凋，將生病植株全株拔起 可見根部部分褐化、完全褐化或根部殘缺不完整 (圖 15)。

另有關本病以發病之植株莖段插入水中以觀察菌流之現象並不易觀察，只有 少數有被觀察到 (圖 16)。

圖 15、接種後發病之植株根部。A，部分根部褐化；B，根部完全褐化；C，根 部殘缺不全。

Figure 15. The diseased chrysanthemum plants and their roots. A, The diseased plant with partial browning roots; B, All the roots of the plant were browing; C, The diseased plant with incomplete roots.

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表 13、二種可能具病原性之細菌分離株進行剪根浸根接種病原性測試之結果 Table 13、The inoculation results of the suspect chrysanthemum wilt isolates by a cut root dipping method.

處理 不同品系菊花浸根接種之發

病率*

不同品系菊花浸根接種之發 病嚴重度(％)**

黃花 白花 黃花 白花

對照組 0/6(0％) 0/6(0％) 0 0

HG01 0/6(0％) 1/6(17％) 0 11

HG02 4/6(66％) 5/6(83％) 28 50

*發病率係處理 2 週後觀察而得。

**發病嚴重度為 6 重複之平均值，每處理 6 株，一株為一重複。

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表 14、病原性細菌分離株 HG02 對三種品系杭菊進行剪根浸根接種病原性測試 之結果

Table 14. The inoculation results of pathogenic bacterium isolate HG02 on 3 different chrysanthemum varieties by cut root dipping method.

杭菊品系 不同菊花浸根接種之發病率* 不同菊花浸根接種之發病嚴重

度(％) **

HG02 對照組 HG02 對照組

小黃花 0/6(0％) 0/6(0％) 0 0

白花 5/6(83％) 0/6(0％) 50 0

黃花 4/6(66％) 0/6(0％) 28 0

*發病率係處理 2 週後觀察而得

**發病嚴重度為 6 重複之平均值，每處理 6 株，一株為一重複。

4. 病原性測試後以稀釋分離法進行病原菌再分離之結果

將上述浸根接種發病之萎凋病株取 6 株以稀釋分離法進行再分離，再分離的 結果為所有病株樣本都可分離到與 HG02 形態相似之菌落 (如圖 17)，但尚需 要進一步以生化或分子生物方法進行鑑定確認。

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圖 16、接種後發病之白花品種杭菊植株，莖段插入水中可呈現菌流現象 Figure 16. The bacterial stream emerged from the stem section of inoculated white-flower chrysanthemum in the water.

圖 17、病原性測試後以稀釋分離法對 6 發病杭菊進行病原菌再分離所得之菌落 型態。

Figure 17. The colony morphology of bacteria reisolated from diseased plant, which was inoculated by isolate HG02.

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