在實驗動物完成紀錄之後，施打過量之 urethane 進入心臟進行犧 牲，於犧牲後收取動物之膀胱檢體進行後續實驗觀察。取下的膀胱會 截切四分之一塊送交台北病理中心 (Taipei Institute of Pathology, Taipei, Taiwan) 進行石蠟包埋以供切片染色觀察之用，剩餘之四分之 三部分冰存入攝氏零下八十度以供後續作西方墨點法。
交回之臘塊會先以石臘切片機 (RM 2125 RTS, LEICA, German) 切 成 0.2 μm 之厚度並貼於透明玻片上風乾一日以利後續染色作業。
染色初步會先將玻片置於烘箱並設定攝氏六十度烘烤十五分鐘以 利溶臘；烘片完成後，再將玻片浸泡於二甲苯 (xylene) 中十分鐘共 兩次以進行完全脫蠟；脫蠟完成後，將玻片浸泡於酒精中以完成漸次 脫水，首先將玻片浸泡於濃度為 100 % 的酒精，接著再置換到濃度 為 95 % 的酒精，接著換成濃度為 75 % 的酒精，最後是濃度為 50 %
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的酒精，以上的浸泡時間皆各為兩分鐘。
脫水完成後，將玻片浸泡於二次水中三至五分鐘進行覆水，避免檢 體因脫水過度而皺縮。以上步驟完成後，再因不同染色法之需求進行 不同的步驟。本文中所用到的染色法有:
(1) 肥大細胞 (mast cell) 染色:覆水後滴入甲苯胺藍 (toluidine blue)，
再以流動的自來水洗淨。甲苯胺藍為鹼性染料，當遇到肥大細胞 中含量甚多的糖氨多糖時，會因為異染性 (metachromasia) 而呈現 出紫紅色，因此可藉此斷定組織的發炎情況。
(2) H&E 染色:覆水後使用蘇木素 (Hematoxylin) 染五分鐘，再以自 來水沖洗乾淨，而後以二次水浸潤數秒，於 PBS 溶液中使組織呈 現藍色即可，接著再浸泡於 95 %之酒精中。接著使用伊紅 (eosin) 染約三十秒即完成 H&E 染色，以待後續封片。蘇木素本身為鹼性，
主要使細胞核內的染色質以及細胞質中的核醣體呈現紫藍色；而 伊紅為酸性染料，主要可使細胞質以及胞外基質呈現出紅色。
(3) 免疫組織化學染色 (Immunohistochemistry stain) :覆水後使用抗原 恢復劑以攝氏 95 度加熱 10 分鐘，加熱完成後使用濃度 3 %的 H2O2
浸潤玻片 15 分鐘，再以 PBS 溶液清洗兩次，每次五分鐘。接著以 濃度為 2%的小牛血清蛋白(BSA) 在室溫下封鎖 (blocking) 三十 分鐘，完成後再使用 PBS 清洗兩次各五分鐘，清洗完成後即可使
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用一級抗體染特定蛋白至少一小時以上，一級抗體染完後再用 PBS 清洗兩次各五分鐘，接著以二級抗體染色置於攝氏 37 度三十 分鐘。二級抗體染好之後，再使用 PBS 清洗兩次各五分鐘將抗體 充分移除避免染色太久造成背景值髒亂。最後，使用 DAB 呈色法 將 DAB 滴加上玻片，有變橙色即可將液體移除蔭乾。蔭乾之後的 玻片先使用二次水沖洗再用蘇木素 (Hematoxylin) 染細胞核三至 五分鐘；接著再以 PBS 清洗，清洗完後的玻片將其浸泡於氨水中 直至蘇木素脫乾，最後即可以自來水沖洗乾淨等待封片。
(4) TUNEL stain (Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling): 脫臘完成後用 pH8.0 之 Tris/HCl 稀釋 100 倍的 proteinase K 至 20 μg/mL；再以稀釋好的 proteinase K 與組織 於室溫作用 20 分鐘，接著用 1X TBS 浸洗，完成組織穿透步驟。
利用 methanol 將 30％的 H2O2稀釋 10 倍，並加到組織上於室溫作 用 10 分鐘，再以 1X TBS 浸洗以抑制內生性酵素。將 5X TdT equilibration buffer 用二次水稀釋五倍，而後加到組織上於室溫作 用 10 分鐘；接著移除 equilibration buffer，隨後加入 TdT 酵素混和 液，於 37℃作用 1.5 個小時完成 TdT 酵素標定反應。標定反應完 成後以 1X TBS 浸洗，再加入 Stop solution 停止 TdT 酵素反應，
而後再以 1X TBS 浸洗。酵素反應完成後，加入 blocking buffer，
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室溫下反應 10 分鐘，接著移除 blocking buffer，再加上用 blocking buffer 稀釋 50 倍的 50X 的 Conjugate buffer，室溫下反應 30 分鐘。
反應完成後用 1X TBS 浸洗。接著將 DAB 溶液覆蓋於切片組織上，
5 分鐘後用 ddH2O 輕輕沖洗，便可加上 20 μL 之 Hematoxylin 染細 胞核。將 Hematoxylin 移除後，使用 Tap water 搖盪清洗 5 分鐘。
(5) 封片:先將染色完成的玻片依序置入濃度為 50 %、75 %、95 %、100
%的酒精中二至三分鐘等待玻片脫水，再浸泡入二甲苯 (xylene)，
接著將封片膠滴一滴於蓋玻片上再與浸泡過二甲苯的載玻片黏 合，即完成封片步驟。
十一、西方墨點法 (Western blot)