第四章 結果
第一節 皿培式牛樟芝成分分析
HPLC 分析牛樟芝乙醇萃物中三萜類成分的含量，以確定皿培式牛樟芝子實體中的 組成分。首先將皿培式牛樟芝子實體粉末由乙醇萃取 24 小時共 2 次後，過濾經減壓濃 縮得 ACE 粗萃物，其萃取率為 8.7%。
圖 4-1 為 ACE 經由 HPLC 分析後跟標準品之比對圖，分析的標準品包含十一種三萜 類，於波長 270 nm 下，十一種三萜類分別出現於 24.994 min 的 antcin K、34.134 min 的 4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole、49.387 min 的 methyl-antcin K、59.463 min 的 antcin C、63.107 min 的 zhankuic acid C、82.121 min 的 dehydrosulphurenic acid、83.007 min 的 zhankuic acid B、91.687min 的 zhankuic acid A、127.653 min 的
15-α-acetyl-dehydrosulphurenic acid、139.453 min 的 dehydroeburicoic acid 及 140.774 的 eburicoic acid。
實驗結果發現皿培式牛樟芝經乙醇萃後，可偵測到十種三萜類包含: antcin K、
4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole、antcin C、zhankuic acid C、dehydrosulphurenic acid、zhankuic acid A、zhankuic acid B、15-α-acetyl-dehydrosulphurenic acid、
dehydroeburicoic acid、eburicoic acid (圖 4-1)。其中，因 zhankuic acid B 和
dehydrosulphurenic acid 的滯留時間相近，經與標準品定量比對後發現 zhankuic acid B 含 量非常低，因此於圖 4-1 中僅標示 dehydrosulphurenic acid，另 eburicoic acid 和
dehydroeburicoic acid 也有相同情形，因此 HPLC 圖中僅標示含量明顯較高的 dehydroeburicoic acid。
經標準品對數與其滯留時間建立出標準曲線後，由積分所得之波峰面積與標準品校 正曲線之關係推估得出 ACE 中各三萜類的組成含量，如表 4-1。各三萜類之結構如附錄 所示。本實驗由衛生福利部中國醫藥研究所盧美光老師協助完成。
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0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
Respone (mV)
0 200 400 600 800 1000 1200
Time (min)
ACE
standard 1
2 3
5
4 6
7 8
圖 4- 1 牛樟芝三萜類標準品及乙醇萃物 HPLC 分析圖譜
Figure 4.1 The HPLC profiles of standard chemicals and ethanolic extract of Antrodia
cinnamomea. Peaks: 1, antcin K; 2, 4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole; 3, antcin C; 4, zhankuic acid C; 5, dehydrosulphurenic acid; 6, zhankuic acid A; 7,
15-α-acetyl-dehydrosulphurenic acid; 8, dehydroeburicoic acid.
本實驗結果由衛生福利部中國醫藥研究所盧美光老師協助分析
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表 4- 1 牛樟芝乙醇萃物中各三萜類含量
Table 4.1 The triterpenoids composition of ethanolic extract from Antrodia cinnamomea Amount(g/mg ACE)
ACE Dehyrosulphurenic acid 32.691 ± 0.459 15--acetyl-dehydrosulphurenic acid 16.105 ± 0.167 Dehydroeburicoic acid 49.465 ± 1.303
Antcin K 27.608 ± 0.067
methyl-antcin K −
Antcin C 4.945 ± 0.109
4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole 3.132 ± 0.011
Eburicoic acid 27.606 ± 4.277
Zhankuic acid C 23.640 ± 0.242
Zhankuic acid B 2.599 ± 0.103
Zhankuic acid A 11.224 ± 0.110 本實驗結果由衛生福利部中國醫藥研究所盧美光老師協助分析
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貳、 牛樟芝水萃物組成分析 一、
牛樟芝水萃物萃取率將皿培式牛樟芝粉末經由熱水萃取後，粗萃暨其區分物之萃取率計算公式為:萃取液經 減壓濃縮或凍乾後所得之萃物乾重量 ÷使用之皿培式牛樟芝粉末重量×100%。
經計算後，ACW 萃取率為 54.3%；PS 萃取率為 14.34%；NPS 萃取率為 27.48%
二、多醣體組成分析
將牛樟芝水萃物萃取而得之多醣體粗萃物以 milli-Q water 配成 1 mg/mL 之水溶液經過 濾後，藉由分子篩滲透儀(size-exclusion chromatography , SEC)分析多醣體的分子量分 布。
分子篩滲透儀(size-exclusion chromatography , SEC)可將多醣體聚合物依分子量大小分 離，並藉由偵測訊號的強弱，分析訊號強度之峰值後可得多醣類之平均分子量(Mn)、最 高點分子量(Mw)及其所占的比例(% area) (圖 4-2)。
結果顯示，PS 主要分布為五個區塊。
第一區塊(peak 1) 平均分子量為 12560 kDa，第二區塊(peak 2) 平均分子量為 3012 kDa，
第三區塊(peak 3) 平均分子量為 1320 kDa，第四區塊(peak 4) 平均分子量為值 256.5 kDa，
第五區塊(peak 5) 平均分子量為 13.6 4kDa。
觀察各區塊分布結果可發現 peak 5 所占比例最高，約佔 65.89%，其次為 peak 3 和 peak 2，所佔比例分別為 16.38%及 13.52%，peak 1 佔 2.79%，而 peak 4 所佔的比例則最小，
為 1.42%。因此可發現 PS 的組成中主要是以分子量小於 14 kDa 的醣類為主。
本實驗由衛生福利部中國醫藥研究所盧美光老師協助完成協助完成。
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圖 4- 2 牛樟芝多醣體粗萃物之分子篩色層分析圖譜
Figure 4.2 Elution of crude polysaccharide fraction from Antrodia cinnamomea by size-exclusion chromatography.
本實驗結果由衛生福利部中國醫藥研究所盧美光老師協助分析
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三、 牛樟芝多醣粗萃物之單醣組成分析
將 PS 以 4.95 N trifluoroacetic acid (TFA)進行酸水解 24 小時(80ºC 熱水浴加熱)。經酸 水解之樣品經由高效陰離子交換層析(high-performance anion-exchange chromatography, HPAEC)進行分析。
以標準品比對分析出樣品中單醣的含量。單醣標準品包含: myoinositol (99%)、
sorbitol (98%)、fucose (99%)、galactose (99%)、glucose (99.5%)及 mannose (99%)。
實驗結果如表 4-2，於結果發現牛樟芝多醣粗萃物中，單醣含量以 galactose 最多，約 含 327.68 ± 0.64 μmol/g polysaccharide；其次為 fucose，約含 46.24 ± 0.81 μmol/g
polysaccharide，除上述外，還可測得 glucose、sorbitol、myo-inositol、mannose、fructose、
galactosamine、glucosamine 等醣類，但含量均較低。
本實驗由中國醫藥研究所盧美光老師協助完成。
表 4- 2 牛樟芝多醣粗萃物經 TFA 水解後其單醣組成分析
Table 2. Sugar composition of polysaccharide after TFA completely hydrolysis
Neutral sugars (μmol/g polysaccharide) PS
myo-inositol 1.13 ± 0.09
sorbitol 3.16 ± 0.17
fucose 46.24 ± 0.81
galactosamine 0.94 ± 0.05 glucosamine 0.60 ± 0.02
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