相同的訊息傳遞路徑圖

即使相同的蛋白質樣品，每次所得的二維電泳圖譜不盡相同，

為了減少誤差，我們使用各 3 片(對照組 3 片、實驗組 3 片)二維電 泳圖譜進行PDQuest 軟體分析，找到的蛋白質差異點(1.7 倍)，更以 統計軟體來進行統計，決定其是否有統計學上的意義，再進行膠體 內水解。

且在本實驗中，為了減少挖錯點或者是樣品遭受污染，導致質

譜分析及MASCOT 資料庫(NCBI database)比對判讀錯誤，經由反覆 數次的挖取不同片膠體的相對位置，以確認蛋白質的正確身份。

然而在 HSC-3 細胞株中卻發現，HNRNPH1( heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1)，PDQuest 分析表現量並非一致增加或

下降，推測松杉靈芝萃取物對此蛋白質並沒有專一性，導致其表現 量不穩定。

第二節、相同的訊息傳遞路徑圖

為了探討松杉靈芝萃取物抑制口腔癌細胞生長的作用機轉，本 實驗室選用口腔癌細胞株HSC-3 及 SCC-4 進行進一步的研究，此兩

株細胞皆為口腔麟狀上皮細胞癌，投予松杉靈芝萃取物後，找到的 蛋白質差異點，經過Genego 分析，畫出相同的訊息傳遞路徑圖，這 條訊息傳遞路徑可能可做為松杉靈芝萃取物抑制口腔麟狀上皮細胞 癌的作用機轉，下面一一介紹這些蛋白質。

壓力調節相關蛋白質 STIP1(減少)(stress-induced-phosphoprotein 1 (Hsp70/Hsp90-organizing protein))，扮演 co-chaperones 角色，將 Hsp70 及 Hsp90 組織結合在一起。Chaperones 的功能主要在於幫助 蛋白質的摺疊、或維持蛋白質的構造及功能，STIP1 在處理松杉靈

芝後表現量下降，因此推測松杉靈芝可能會影響蛋白質的摺疊、構 造及功能，而導致細胞生長受到抑制。

和 蛋 白 質 摺 疊 修 飾 運 輸 相 關 的 蛋 白 質 PDIA3(減少)(protein disulfide isomerase)、NSFL1C(減少)(p47)。近來有很多研究專注於再 PDIA3 的功能，Oliver et al. (1997)指出，在醣蛋白合成的過程當中，

PDIA3 可 以 和 calnexin 及 calreticulin 結 合 ， 扮 演 著 molecular chaperone 的角色。Kondo et al. (1997)指出，在 NSFL1(p97)所主導的 膜融合過程當中，p47 扮演著輔因子的角色。故推測這些和蛋白質 摺疊修飾運輸相關的蛋白質，在處理松杉靈芝萃取後物表現量下 降，而導致細胞的生長受到抑制。

鈣結合蛋白質 CALR(增加)(calreticulin precursor)，為一多功能 的蛋白質，主要功能是在內質網扮演著儲存鈣離子的角色。Burns et al. (1994)發現 CALR 也存在於核中，故推測其和基因轉錄的調控相 關。Obeid et al. (2007)指出，anthracyclins 所誘導的細胞死亡，是藉 由快速的將CALR 移到細胞表面，因此 Obeid et al.推測 CALR 在抗 癌免疫反應中也扮演重要的角色。故推測松杉靈芝萃取物處理癌細 胞後，細胞進行計畫性死亡，CALR 表現量上升，而這些 CALR 便

做為被吞噬細胞所辨視的訊號，促使死亡細胞被正常地吞噬。Chen et al. (2009)指出，CALR 過表現可增加 PIGF 和 VEGF 表現，增加血管 新生的能力，促進細胞的增生和移動；免疫組織染色結果顯示，微 血管密度、淋巴轉移、低存活率都和CALR 呈現正相關關係。另外 Silvia et al. (2002)年指出，當 thrombospodin 和 CALR 結合在一起 時，會促進細胞的focal adehesion diassambly，進而增加細胞的移動 能力。然而本研究顯示出，經由松杉靈芝處理過後的口腔癌細胞移 動能力被抑制，且CALR 表現量上升，為何會有不同的結果，能待 我們做進一步的研究。

另外Obeid (2008), Panaretakis et al. (2008)指出，PDIA3 在 CALR 扮演抗癌反應中角色時，也佔有一席之地。Obeid (2008)指出，PDIA3

為重要蛋白質，藉著控制CALR 移到細胞表面，因而達到控制抗癌 免疫反應的效果，因此PDIA3 在抗癌免疫反應中可以當作一個新的 指標。

核苷酸修補蛋白質 RAD23B(增加)(UV excision repair protein RAD23 homolog B)，DNA 修復是細胞將基因上的損壞移除的重要機 制，而核苷酸切除修復主要修復經紫外線照射或致癌化學藥品造成 的大形 DNA 構形改變，RAD23 是一出芽酵母菌的核苷酸切除修復 因子，已知和蛋白質的降解也有關，在人類則有兩個同源基因：分 別是hHR23A 和 hHR23B。Sugasawa et al. (1998)指出，在核苷酸切 除修復的過程當中，RAD23B 是最早被發現的修復因子，他會引進 其他修復因子，完成修復的工程。松杉靈芝萃取物處理癌細胞後，

發現RAD23B 的表現量上升，可能原因為松杉靈芝嚴重損壞癌細胞 的DNA，因此癌細胞才會大量表現 RAD23B。

代謝相關 FH(減少)(fumarate hydratase precursor)、ENO1(減 少)(Chain A, Crystal Structure Of Human Enolase 1)。FH 是 TCA cycle 裡的酵素，主要功能是將 fumarate 轉換成 malate；ENO1 為醣解酵 素，兩者同時下降，代表細胞的產能減少，因而可能減少癌細胞的 生長。