研究背景及目的

第一章緒論

第一節研究背景及目的

根據行政院衛生署的統計，台灣每年約有五千人左右因慢性肝病及肝硬化而死亡，肝病在十大死因中佔第七位，相較於其他國家，台灣肝病的盛行率偏高，在台灣肝病甚至有國病之稱，因此肝病的防治在台灣是重要的課題。

不論是病毒或酒精等任何因素引所引起的的慢性肝炎，都有可能演變成肝纖維化甚至轉成肝硬化 (Friedman, 2003)。目前對於肝硬

化，只能對引起的併發症，如門脈高壓、腹水、血管瘤、肝昏迷等採取對症療法，沒有可以根本治療的藥物 (Gill & Kircbain, 1997)。對於

病毒性肝炎雖有抑制病毒的藥物，但由於抗藥性等問題，還是沒有完全克服 (Safrin, 2007)。因此開發能減輕肝臟發炎，延緩肝硬化進展的保健食品在保肝防禦上佔有一席之地。

由中草藥研發保肝產品素來受到國內外的重視，諸如Silymarin、

小柴胡湯、人參、靈芝、五味子。台灣特有的樟芝、蜆精也已有產品上市。本研究室ㄧ直從事中草藥的保肝研究，尤其是對台灣金線連的保肝作用已有近十年的歷史。台灣金線連其保肝成果已技轉給廠商，

承接的廠商正積極朝產品開發上市。

民國九十六年十大死亡原因

台灣金線連在台灣民間是受到相當重視的保健植物，何時開始被用來治病已無法考察。台灣最早的藥用植物書籍，1924 年日本人佐佐木舜一所著「綱藥台灣民間藥用植物誌」的第一張圖即為台灣金線連可見其所受到的重視。因具有多重的保健功效，在民間台灣金線連被稱為「藥王」或「藥虎」。依據中醫師蔡吉雄 (2003) 的經驗，慢性肝炎、肝硬化是台灣金線連主要臨床用途之一。

本實驗室早期使用台灣金線連水粗萃取物，發現其可以減輕四氯化碳及 Dimethylnitrosamine 所引起的大鼠肝纖維化 (Shih et al., 2005; Shih et al., 2004)。因此引起廠商的興趣參與產學合作，共同開

發台灣金線連保肝產品，在開發過程中找到了保肝的有效成分金線連糖苷 (kinsenoside)，以此建立了規格化生產台灣金線連保肝原料。台

灣金線連保肝原料的研究，細胞的實驗顯示其對肝細胞有保護作用 (Wu et al., 2007)，對 thioacetamide 誘發肝炎的實驗研究，顯示其抑制發炎作用與 kupffer 細胞的活性有關 (Wu et al., 2008)。

金線連糖苷是台灣金線連的主要成分，金線連糖苷作用的解明有助於對台灣金線連保肝作用的瞭解。因此，本研究之主要目的為探討金線連糖苷保肝作用之機轉。先以四氯化碳誘發小鼠肝損傷的模式，

確認金線連糖苷抑制肝臟發炎的效果後，進一步以巨噬細胞 Raw

264.7 來探討金線連糖苷在細胞內的作用途徑。

第二節金線連糖苷與金線連的文獻考察

一、金線連糖苷

金線連糖苷 (kinsenoside)

3-(R )-3-β-D-glucopyranosyloxybutanolide

金線連糖苷最早是日本人由高雄金線連 (A. koshunensis) 分離出 (Ito et al., 1993)。後來 Du et al. (2001) 指出台灣金線連含有高含量的金線連糖苷。金線連糖苷有降血糖及降血脂作用 (Takeshita et al., 1995)。最近的研究指出金線連糖苷能修複胰島 β-細胞的損傷 (Zhang et al., 2007)。金線連糖苷具減肥作用，研究顯示對高脂飼料誘發的肥

胖大鼠，及 aurothioglucose 誘發的肥胖小鼠有抗脂肪組織過多症 (anti-hyperliposis) (Du et al., 2008)。金線連糖苷的異構物，由 Goodyear

屬植物分離出的 3-(S)-3-β-D-glucopyranosyloxybutanolide (goodyceroside) 不具有抗脂肪組織過多作用，但對四氯化碳引起的肝細胞損傷有保護作用 (Du et al., 2008)。我們進行台灣金線連抗肝纖維化的研究，以四氯化碳誘發小鼠肝損傷的模式，確認金線連糖苷具保

肝作用 (Wu et al., 2007)。金線連糖苷的化學合成方法已被建立 (Zhang et al., 2005)

二、金線連的分布與型態

台灣金線連是珍貴的蘭科草本植物，學名是 Anoectochilus formosanus Hayata，英文名稱為 Taiwan jewel orchid (台灣寶石蘭) (蕭

等， 2007)；台灣金線連曾廣泛分布在海拔五百到一千七百公尺的冷

涼原始林蔭處；竹林下堆積深厚且排水良好的腐葉土層，也常見較大面積族群散生其間，其生育適溫約在攝氏 20 ~ 24 度，在北部的北插天山、宜蘭縣棲蘭山、南投縣水社大山、嘉義縣奮起湖及南部的南仁山等地，均見其蹤跡。採自原始林區的新鮮全草在市場零售價格，每台斤高達七、八千元以上，因相傳效用廣泛能治療許多疾病，故有「藥王」、「藥虎」之稱。又因山林珍禽喜食，所以另稱「娃雞草」或「雉雞草」。養鴿人家常在參加比賽時，讓賽鴿食用大量金線連，據說有增強飛行耐力的效果，故祕稱其為「鳥參」或「鳥人蔘」。此外，民間也傳說只要有台灣金線連生長的地方，就有兇猛的百步蛇守護左右，如用客觀角度分析，因為此種珍貴藥草生育環境分布在陰涼潮濕的林蔭下，蛇類常出沒其間也就不足為奇了。世界上和台灣金線連有親緣關係的植物種類可能超過 35 種，台灣主要有兩種台灣金線連和

一般以葉片紋路或莖節匍匐性強弱作為判斷依據；較明確的辨別方法是以花朵中間部位是否具梳子狀的構造加以區別，具有這種特性的是台灣金線連，呈片狀的則是高雄金線連。金線連一般在夏末秋初由植株頂端開始抽出花莖，野生植株開花數目約為 2 ~ 7 朵，但經人工溫室培育者則可達 22 ~ 24 朵。其葉片長約五公分，寬約三公分，呈圓

卵形；葉面暗綠色有絨毛般的觸感，葉背則為淺紫紅色﹔葉片表面分布有耀眼且呈網狀相連的黃白色葉脈線條，故稱「金線連」，民間常有人寫成「金線蓮」，其實它與「蓮花」並沒有相近的親緣關係。

值得一提的是，金線連在陽光反射下可見葉脈發出點點有如星鑽般燦爛的光芒，甚具觀賞價值，稱它為「超炫寶石蘭」一點也不為過 (蕭等，2003)。

三、民間入藥用法

早期日本人佐佐木舜一 (1924) 的調查指出，為滋養強狀劑，治

肺病、廢勞，對其他補血、遺漏、遺精有效，或用於解熱、肝、脾等臟器之疾病，也用於毒蛇咬傷。甘偉松 (1979) 指出主治肺病、高血壓、蛇傷、腎虧、小兒發育不良。蔡吉雄 (2003) 對台灣金線連應用的心得，主要用於肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎、青春痘及黑斑、大便出血、小便出血、咳嗽痰中帶血、高血壓、糖尿病等。

四、金線連成份

台灣金線連成分相關的研究整理如下：

1. 4-[β-Dglucopyranosyloxy)benzyl alcohol)即gastrodin (天麻素) (Ito et al., 1993)

2. Glucoside (Du et al., 2000)

1) 3-(R )-3-β-D-glucopyranosyloxybutanolide

2) 3-(R )-3-β-D-glucopyranosyloxy-4-hydroxybutanoic acid 3) 1-O-isopropyl-β-D-glucopyranoside

4) (R)-(+)-3,4-dihydroxybutanoic acid γ-lactone 5) 4-(β-D-glucopyranosyloxy) benzyl alcohol

6) (6R,9S)-9-hydroxy-megastigma-4,7-dien-3-one-9-one-O-β- D-glucopyranoside

7) corchoionoside

3. Flavonoid (Wang et al., 2002) 1) isorhamnetin

2) quercetin

4. Kinsenone (Wang et al., 2002)

大陸種的金線連，花葉開唇蘭[A. roxburghii (Wall.) Lindl.]，最近 的研究得知有下列成分

1.oleanolic acid、ursolic acid (Huang et al., 2007) 2. triterpenoid: sorghumol 3-O-Z-p-coumarate

Sorghumol 3-O-E-p-coumarate (Han et al., 2008) 3. alkaloid: anoectochine (Han et al., 2008)

五、台灣金線連藥理活性損傷 (Du et al., 2003)。對四氯化碳或 Dimethylnitrosamine 誘發大鼠慢性肝炎，所引起的肝臟萎縮、脾臟腫大、低白蛋白血症、凝血時間延長、及肝臟膠原蛋白增加等，台灣金線連水粗萃液都有改善作用 (Shih et al., 2004; Shih et al., 2005)；對大鼠以 Dimethylnitrosamine 造成肝損傷及部分切肝的實驗條件下，有促進肝臟再生的作用 (Shih et al., 2004)。我們進以四氯化碳誘發小鼠肝損傷的模式，確認金線連糖苷具保肝作用 (Wu et al., 2007)。在四氯化碳誘發小鼠肝纖維化的模式，台灣金線連水萃液可以提升肝組織的 methionine

adenosyltransferase 1A mRNA 表現，及降低 transforning growth

factor-β1 mRNA 的表現，顯示其具有保護肝細胞及減弱星狀細胞活化

的作用 (Fang et al., 2007)。最近以 thioacetamide 誘發小鼠肝纖維化的研究，發現台灣金線連水萃液減輕肝臟發炎，與抑制肝臟吞噬細胞 (Kupffer cell) 的活性有密切關系 (Wu et al., 2008)。

4. 降血糖

金線連能抑制腎上腺素對糖元分解的促進作用，且對於四氧嘧啶引起小鼠血糖升高具有防治的效果 (陳 & 黃，2000)。台灣金線連對於 streptozotocin 誘發高血糖大鼠，有驟降血糖的作用，可降低血清糖化蛋白，且使抗氧化酵素有顯著性的回升 (Shih et al., 2002)。最近的文獻也指出金線連糖苷對 streptozotocin 引起大鼠胰島β-細胞損傷有修補作用 (Zhang et al., 2007)。

5. 調節免疫

金線連含有多醣的成分，具有重要的免疫調節功能 (Chen et al., 2004)。本研究室證實口服給予鼷鼠台灣金線連多醣分劃二週後，其腹腔的巨噬細胞作用明顯上升，體外試驗也顯示該多醣能活化 RAW264.7 巨噬細胞的吞噬作用以及釋出 NO、IL-2 及 γ-干擾素 (徐，2004)。其機制推測為金線連多醣會與巨噬細胞表面的接受器結合，造成內在訊息傳導並導致 NO 的生成增加，進而影響細胞骨架蛋白質的變化，使得吞噬細胞伸出偽足、增加吞噬活性 (廖，2005)。

將 CT-26 癌化細胞利用皮下移植到 BABL/c 小鼠體內時發現，金線

2006)。另外，藉由卵蛋白誘導氣喘小鼠的模式，亦證實金線連水萃取物可能透過 CD25+/CD4+T 細胞的作用，而達到免疫調節的效果 (蕭，2004)。

6. 抗癌

金線連萃取物可以加速 MCF-7 乳癌細胞的凋亡，並阻斷癌細胞的結構分子途徑，以抑制癌細胞增生 (Shyur et al., 2004; Yang et al., 2004)。亦有研究利用皮下移植方式將 CT-26 colon cancer cell 移植到 BALB/c 小鼠體內誘導癌症發生，發現金線連水萃物可以抑制腫瘤的生長 (Tseng et al., 2006)。

7. 抗疲勞

過去學者發現，餵食金線連萃取物的小鼠，可以增加游泳的運動強度以及延長游泳時間，同時可以減少脂肪堆積，推測金線連萃取物可以提高小鼠對脂質的利用率 (Ikeuchi et al., 2005)。

8. 改善骨質疏鬆

本實驗室曾利用金線連水粗萃物餵食去卵巢大鼠，結果發現可以降低血中鹼性磷酸酶、有效抑制去卵巢大鼠體重增加以及改善第四腰椎骨的骨密度以及骨鈣含量 (Shih et al., 2001)。最近日本人的研究也發現台灣金線連可抑制去卵巢大鼠破骨細胞的活而減少骨質流失

(Masuda et al., 2008)。

第三節肝臟損傷的相關因素

一、肝臟的結構

肝臟是人體最大的器官，位於腹腔上方右側，成人肝臟約重 1300

克，表面平滑呈暗紅色，肝臟可以接受來自胰臟、脾臟及腸所輸送而來的靜脈血液，這些血液中包含了養分、毒素及廢棄的代謝物 (Williams, 1995)。

肝臟的細胞主要可以分為兩大類，ㄧ類為實質細胞 (parenchymal cells)，另一類為非實質細胞 (non-parenchymal cells)，實質細胞主要由肝細胞所構成，大約佔肝臟細胞 80 % 左右，外觀上為不規則多面

在文檔中金線連糖苷對四氯化碳誘導之小鼠肝損傷的保護作用:經由抑制庫氏細胞的活化; Protective effect of kinsenoside on liver injury induced by CCl4 in mice：Possible involvement of the Kupffer cell inactivation (頁 12-0)

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第一節 研究背景及目的

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