2.15 細胞株

抗 HBV 治療法至今尚未被有效的開發出來，主要研究障礙來自 於寄主範圍實在太狹隘，因而限制實驗培養系統的門徑 (Tuttleman et al., 1986)。以 cloned HBV DNA 在非洲黑猩猩身上引發肝炎，可用來

當作實驗動物模式 (Will et al., 1982)，目前發現 HBV 只會在人類與 非洲黑猩猩體內進行複製 (Shin et al., 1989)，因此體外實驗系統不斷 地被開發。

以 DHBV 感染原發性鴨子肝細胞培養，可建立 DHBV 在體外複 製的實驗系統 (Tuttleman et al., 1986)，Yokota 等人曾以此模式來比較 數種 nucleoside analogs 抑制體外 DHBV 的作用 (Yokota et al., 1990)。

而人類 B 型肝炎病毒的體外複製，最早是以病毒感染細胞的方式來進 行，如：在 1988 年，以 HBV 感染成人肝細胞培養來進行病毒研究 (Gripon et al., 1988)；亦可使用原發性人類胎兒肝細胞接受 HBV 感染 (Ochiya et al., 1989)成為病毒的體外實驗模式，直到後來運用基因轉 染技術，才建立起體外病毒複製系統。

原發性肝細胞的培養是相當棘手的事，因此在 1987 年，Sells 等 人盡可能從一些分化良好的穩定細胞株著手，而這些細胞株是肝腫瘤 細胞經過 HBV DNA 轉移進入可釋放具感染病毒的細胞。在 HBV DNA polymerase 尚未純化出來前，利用導入穩定 HBV DNA 的細胞 株，可產生感染性病毒來測試化合物是否會影響病毒反轉錄及正股 DNA 合成，亦可利用此系統來測試是否會影響病毒 genome 的突變及 nucleocapsid、envelope 的組裝 (Sells et al., 1987)。

利用載體攜帶 cloned HBV DNA，轉染 (transfected)到 HepG2細

胞株 (hepatoblastoma cell line)中，可製造出大量的 HBsAg、HBeAg 及具感染性的完整病毒顆粒。在 HBV 基因組中，發現病毒 DNA 有 完整染色體序列、鬆弛環狀 (relaxed circular)、超螺旋構造、不完全 的基因組、、、等多種型態的 B 型肝炎病毒 DNA 被複製出來。在免 疫電子顯微鏡的觀察中，病毒顆粒型態可見到 22nm 球狀及絲狀的 HBsAg 病毒顆粒，還有類似 42nm Dane particles，因此證明此種細胞 株不僅會組裝及分泌數種 HBV DNA 複製的中間產物，還會有 Dane-like particles 的產生。這種由 HBV genome 經轉染到 HepG2細胞 株的新培養系統被命名為 2.2.15 細胞株，可考慮用來研究 HBV 複製 週期，是一個不錯的體外實驗系統 (Sells et al., 1987 and 1988)。

2.2.15 細胞株已經成功地被應用在數個會影響 HBV 複 製 的 nucleoside analogues 證明上，如：2’-deoxyguanosine 的 carbocyclic analogue 幾乎可完全中斷 HBV 病毒複製，而且在高達最低抑制濃度 的 200 倍時還不具有藥物毒性 (Price et al., 1988) 。將修飾後的 pyrimidine nucleosides 應 用 在 2.2.15 cell line，可見到 FddThd 、 ddeThd、FddMeCyt，如同 ClddMeCyt、AddMeCyt 具有幾乎完全阻斷 病毒顆粒的產生，在體外有效抑制 HBV (Matthes et al., 1990)。在 1991 年 ， Doong 等 人 測 試 一 系 列 2’,3’-dideoxy-3’-thiapyrimidine nucleosides，發現到病毒受藥物抑制而缺乏細胞內病毒 DNA，推測抑

制目標在於 HBV DNA 的合成 (Doong et al., 1991)。

目前，某些藥物對於 HBV 複製的作用機轉與效力，在體外培養 中已能成功地被研發，而這些培養系統已被頻繁地使用在篩選具有潛 力能影響肝病毒 DNA 生活史中任何階段的藥物裡。本研究計畫應用 2.2.15 細胞株為篩選系統，試著去發掘傳統中醫藥物和其半合成化合 物中，更多具有抑制 HBV 複製的藥物。