根據文獻報導指出，臨床上斑蝥外用於治療神經性皮炎、顏面神 經麻痺、斑禿、傳染性疣、頭痛、過敏性鼻炎，內服可治療肝炎、肝 癌等 (楊素娟, 1992)。斑蝥素為斑蝥之有效成分，由實驗結果知道，
斑蝥素具有抗腫瘤的作用，還會引起白血球升高及出血等症狀 (Yi et al., 1991)。以斑蝥素治療小鼠腹水型網狀細胞肝癌和腹水型肝癌，有 明顯抑制肝癌細胞的現象 (Wang, 1989)。學者研究一系列斑蝥素類化 合物，經臨床研究發現去甲基斑蝥素在抗肝癌療效上，優於斑蝥酸 鈉、斑蝥素 (趙景和, 1992)。曾有學者研究以脂溶性斑蝥素治療急性 新城疫雞瘟病，有顯著的治癒率 (戴新民, 1986)，可知其具有抗病毒 的作用。另外，以斑蝥素治療病毒性肝炎，臨床上初步發現，班蝥素 療效快，療程短，值得進一步探索 (王日衛, 1980)。去甲基斑蝥素在 臨床治療上，對於慢性活動性肝炎及肝硬化第一期患者症狀得以改善 (崔振宇, 1984; 王廣生, 1986)。由此可知斑蝥具有抗腫瘤和抑制病毒 的作用，但其藥物作用機轉仍不甚清楚，而確實的實驗數據也尚缺 乏。因此，本實驗想進一步探討斑蝥類化合物對於人類肝癌細胞毒殺 性、型態及細胞週期的影響，並且篩選斑蝥類化合物是否會干擾 B 型肝炎病毒顆粒的釋放，進而抑制病毒複製。
在臨床使用藥物治療相關疾病時，以對宿主細胞不具有相關毒殺
性為優先 (Chang et al., 1992; Zhu et al., 1998)。因此，篩選毒 性小而且具療效的藥物濃度是首先步驟。學者在體外實驗中，證實斑 蝥酸鈉對 HeLa、CaEs-17、BEL-7402，以及 EAC 等，均有顯著抑制 和殺傷能力 (王廣生, 1980)。而去甲基斑蝥素在體外實驗中，會抑制 部分腫瘤細胞的增生，如：HeLa、CaEs-17、BEL-7402、SMMC-7721、
CHO 、Hep-2 (Wang, 1989)，對正常細胞亦具有些微毒性 (Yi et al., 1988)，會刺激正常及放射損傷老鼠體外顆粒球細胞的增生 (Yi et al., 1989)。去甲基斑蝥素對小鼠急性 LD50 為 12.4mg/kg (i.p.) (Wang, 1989)，在致癌的裸鼠身上，會抑制肝腫瘤細胞增生，並延長老鼠生 存壽命 (Yang et al., 1997)。去氫去甲基斑蝥素已被證實能抑制老鼠腹 水癌細胞，具有抗腫瘤的作用 (Shimi et al., 1982) 。在 Swiss albino mice 體內實驗中發現，去氫去甲基斑蝥素對於癌細胞有直接的細胞 毒殺性 (Zhou et al., 1987) 。在四種斑蝥類化合物中，其 CC50 值 (影 響 50%細胞數目的藥物濃度)在斑蝥酸鈉、去氫去甲基斑蝥酸鈉、去 甲基斑蝥素、去氫去甲基斑蝥素依序分別為 3.69µM、大於 50µM、
14.12µM、16.61µM，藥物對於 2.2.15 細胞毒殺性由高至低依序為斑 蝥酸鈉、去甲基斑蝥素、去氫去甲基斑蝥素、去氫去甲基斑蝥酸鈉。
其中以斑蝥酸鈉影響最為顯著，在 12.5µM 斑蝥酸鈉作用到第三天 時，對細胞增殖抑制百分比已高達 90%以上；其次是去甲基斑蝥素、
去氫去甲基斑蝥素兩種化合物，在濃度 12.5µM 影響下，觀察第 6、9 天的細胞數，也都有超過 50%以上的細胞毒殺性。由以上結果，本實 驗選用的實驗濃度為 12.5-0.78µM。
學者在體外實驗發現，斑蝥類化合物對於不同的癌細胞均有顯著 抑制和殺傷能力 (王廣生, 1986)。在本實驗中加藥培養 12 天的 2.2.15 細胞，經 Wright-Giemsa stain 染色後觀察，發現細胞型態變異、細胞 質空泡化，有別於控制組細胞。四種斑蝥類化合物在高濃度作用下，
對於 2.2.15 細胞的型態都具有不同程度的影響，其中以 12.5µM 斑蝥 酸鈉對於癌細胞有直接的細胞毒殺性，會造成細胞質空泡化及破裂，
隨後伴隨不規則的核分裂及染色體潰散。此結果和文獻報導，使用[3H]
斑蝥酸鈉腹腔注射肝癌小鼠及艾氏腹水癌小鼠，在電子顯微鏡下可見 斑蝥酸鈉進入癌細胞核中，出現癌細胞變形、空泡化 (Wang, 1989) 有相似之處。
在 藥 物 作 用 於 2.2.15 細 胞 ， 對 於 染 色 質 去 氧 核 糖 核 酸 (chromosome DNA)的影響，根據 DNA 電泳圖顯示，隨著藥物濃度上 升，移動的 DNA fragment 增加，而 DNA damage 損傷情形加深。我 們實驗發現斑蝥類化合物在高濃度作用下，對細胞進行毒殺、破壞細 胞型態，並且造成 DNA 損傷，具有劑量依賴性。學者發現斑蝥類化 合物在體外實驗，對於癌細胞的 DNA 合成具有抑制性，斑蝥酸鈉主
要作用在癌細胞的粒腺體和細胞核，抑制其 DNA 和蛋白質的合成 (王廣生, 1980)。而去甲基斑蝥素在體外實驗中，會抑制部分腫瘤細胞 的增生，可能是藉由中斷 DNA 的合成及阻止細胞週期的進行 (Wang, 1989)，去甲基斑蝥素在體外對人類白血球細胞株 HL-60 的 DNA 和蛋 白質合成有抑制作用；在正常人骨髓細胞 DNA 合成反而出現促進作 用 (郭建芬, 1994)。在給予老鼠 2mg/kg (i.p.)劑量的去氫去甲基斑蝥 素，可觀察到對於骨髓細胞的 DNA 合成，具有顯著的促進性 (Zhou et al., 1987) 。
觀察斑蝥類化合物對於細胞週期的影響，在加藥培養第 3、6、9 天，發現斑蝥酸鈉、去甲基斑蝥素、去氫去甲基斑蝥素三種化合物對 於 2.2.15 細胞皆有不同程度的 S 期抑制。觀察高濃度的斑蝥酸鈉作用 在培養第 1 天會對 S 期有 72.5%的抑制，第 3 天對 S 期有 39.4%的抑 制；在 12.5µM 去甲基斑蝥素在加藥後第 3 天對 S 期有 64.8%的抑制；
而去氫去甲基斑蝥素會隨濃度升高出現 G0-G1期上升、S 期下降的情 形，在去氫去甲基斑蝥素高濃度 12.5µM 作用下第 6 天對 G0-G1期有 14.7%的促進，以及對 S 期有 42.8%的抑制。至於去氫去甲基斑蝥酸 鈉的藥物作用，在 2.2.15 細胞中細胞週期的影響並不顯著。我們推測 斑蝥類化合物抑制體外細胞增生，可能是藉由抑制 S 期來中斷 DNA 合成以及阻擾細胞週期的進行。而有學者研究，去甲基斑蝥素會因阻
斷細胞週期中 G2/M phase，而抑制 K562 細胞株 (human myeloid leukemia) (Yi et al., 1991)，因此，斑蝥對細胞週期影響可能會因細胞 種類差異而出現不同抑制作用，此結果有待進一步的證明。
在中國傳統藥物及中草藥成分用於篩選抗病毒藥物上，已有學者 研究 Rubia cordiforlia 及其三種主要成分 (furomollugin、mollugin、
rubilactone)，發現對於 B 型肝炎表面抗原具有一定的抑制效果，其 IC50=2.0µg/ml (Ho et al., 1996)。在治療 B 型肝炎表面抗原帶原者的療 效觀察上，去甲基斑蝥素對 B 型肝炎病毒複製有一定抑制作用 (譚知 顯, 1988)，因此斑蝥在臨床上也有效用於肝炎病毒的治療。我們應用 EIA 原理，以 B 型肝炎表面抗原試劑初步篩選有效抗病毒的斑蝥類化 合物，在本實驗中，我們比較細胞減少的數目，以及 B 型肝炎表面抗 原濃度的改變量，藉以探討藥物對於病毒治療的有效性。實驗結果發 現到斑蝥類化合物其 SI 值 (CC50/ IC50)由高至低分別為去甲基斑蝥 素、去氫去甲基斑蝥酸鈉、去氫去甲基斑蝥素、斑蝥酸鈉，在初步實 驗中，發現去甲基斑蝥素對於 PLC/PRF/5 細胞所釋放出的 HBsAg 濃 度較具有抑制性，且對細胞毒殺性較小。
在目前一些有效抑制 HBV 的核甘酸衍生物中，會有低程度的抑制 培養細胞生長，同時也出現治療藥物逐漸發展出抗藥性的缺點，因此 中國傳統用藥也逐漸受到重視，用於臨床治療已有特定療效者，將進
一步被學者研究分析。在本篇研究中，我們討論斑蝥類化合物對於肝 癌細胞株及抗病毒作用的影響，由本實驗的初步數據，這些化合物將 可被考慮用來發展為抗肝癌及抗 B 型肝炎病毒的藥物。
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