• 沒有找到結果。

我們利用光學顯微鏡及掃描式電子顯微鏡,觀察波葉山螞蝗和排錢草植物 的外部形態,包括根、莖、葉、果實、種子以及花粉的形態,已確立形態鑑定 的基礎。

在本研究中我們觀察到波葉山螞蝗與排錢樹植物的高度相差不大,新生的植

株兩者都很相近只差在其葉子波葉山螞蝗是波浪狀,但成熟後則可以較明顯的由 葉片來區分。排錢樹種子較波葉山螞蝗大,波葉山螞蝗種子外皮上有明顯鉤毛。

花粉排錢樹較接近圓形,波葉山螞蝗則有點近似三角形。

生藥鑑定的方法有許多種,例如:組織切片,色層分析法(GC,HPLC,…

等)、光譜法(UV,IR,…等)與 X 射線繞射法,對植物所含成分進行分析等,

而其中組織切片法是最經濟實惠且信賴度高的一種方法。花費不多即能鑑別植 物特徵。

經過觀察,我們可以發現波葉山螞蝗導管具有螺旋紋及網狀紋,排錢樹則是 以網狀紋為主。另外也可以看到排錢樹上有單晶。在波葉山螞蝗和排錢樹葉脈上 也可以看到非腺毛。

我們對於rutin 提取方法之選擇,發現到 rutin 可以利用 10 ml MEOH 提取 三次的方法,完全提取。而rutin 之定量中本研究所採集之波葉山螞蝗全草的 rutin 含量約在0.004 % 之間,排錢樹全草的 rutin 含量則約在 0.026 %間,兩者有顯著 差異。

對於 HPLC 波峰的分析結果如圖 22~23,我們發現到波葉山螞蝗和排錢樹在 peak 1、4 、5 的差異並不大,但在 peak 2、3 則有比較明顯的差別,波葉山螞蝗 peak 2 較高,排錢樹則是 peak 3 較高。

本研究中,臺灣產波葉山螞蝗和排錢樹之ITS1、5.8S rDNA 基因及 ITS2 之 長度與G+C 百分比和其他高等植物類似,兩者間序列相似的程度是 69.6 %。波 葉山螞蝗植物之5.8S rDNA 基因長度為 164 bp,G+C 百分比為 51.2 %。ITS1 之 G+C 百分比為 56.4 %,ITS2 區域之 G+C 百分比為 56.3 %;而排錢樹植物之 5.8S

rDNA 基因長度為 164 bp,G+C 百分比為 54.2 %。ITS1 之 G+C 百分比為 61.4 %,

ITS2 區域之 G+C 百分比為 58.9 %。

雖然 ITS1、ITS2 區域序列變異較快,但是在高等植物中,ITS1 區域中,還 是可以發現序列保留區,GGCRY-(4to7n)- GYGYC AAGGAA (Y 表 C 或 T,R 表G 或 A)。因此推測此保留區在 rDNA 初轉錄形成一個轉錄單位時,扮演著 將之修飾形成成熟的rRNA(mature RNA)的重要角色。在本研究中,波葉山螞 蝗與排錢樹植物的序列保留區分別為 GGCGC【TTTGT】GCGCCAAGGAA 和

GGCGC【TTAGT】GCGCCAAGGAA。此結果可用於植物品種的鑑定及與其

外觀相似品種的鑑定。

參考文獻

1. Chang-Fu Hsieh, Tseng-Chieng Huang, Zhen-Yu Li. Flora of Taiwan. second edition ed. taipei: the editorial committee of flora of taiwan; 1993.

2. 中國科學院中國植物志編輯委員會. 中國植物志

.

41. 北京: 科學出版社;

1995.

3. 中國科學院中國植物志編輯委員會. 中國植物志

.

39. 北京: 科學出版社;

1988.

4. Ohashi Hiroyoshi, Ginkgoana. No.1. Tokyo : Academia Scientific Book, 1973.

5. 江蘇新醫學院. 中藥大辭典

(

). 上海: 上海人民出版社; 1977.

6. 台灣原住民藥用植物彙編

. 台北: 行政院衛生署中醫藥委員會; 2002.

7. 甘偉松. 台灣藥用植物誌

. 台北: 國立中國醫藥研究所;1967.

8. 邱年永, 張光雄. 原色台灣藥用植物圖鑑

1. 台北: 南天書局有限公司; 民國

72 年.

9. 林宜信等. 台灣藥用植物資源名錄

. 台北: 行政院衛生署中醫藥委員會; 2003.

10. 全國中草藥匯編編寫組. 全國中草藥匯編

. 1st ed. 北京: 人民衛生出版社;

1975.

11. 高木村. 台灣藥用植物手冊

. 第一版 ed. 台北: 南天書局; 1981.

12. 劉和義, 楊遠波, 施炳霖, 呂勝由. 臺灣維管束植物簡誌

. 台北: 行政院農業

委員會; 民國 89 年.

13. 周麗娜, 戴斌, 鍾鳴. 壯族民間常用草藥排錢草的生藥鑒定. 中國民族民間 醫藥雜誌. 2003;(64):301-302.

14. Zeba Siddiqui, Asif Zaman. Chemical constituents of Desmodium sequax. Indian

journal of chemistry. 1998;37B:1081-1082.

15. Chien-Chang Shen, Shr-Ting Wang, Show-Yinn Tsai, Hui-Chuan Yang, Bor-Jinn Shieh, Chien-Chih Chen. Cinnamylphenols from Phyllodium pulchellum. J Nat Prod.

2005;68:791-793.

16. Ghosal S, Mukherjee B. Alkaloids of Desmodium pulchellum Benth. ex Baker.

Chemistry and Industry. 1964;1800.

17. Ghosal S, Mukherjee B. Occurrence of 5-Methoxy-N,N-dimethyltryptamine Oxide and Other Tryptamines in Desmodium pulchellum Benth ex Baker. Chemistry

and Industry. 1965;793-794.

18. Ghosal S, Mukherjee B. Indole-3-alkylamine Bases Of Desmodium Pulchellum.

Journal of Organic Chemistry. 1966;(31):2284-2288.

19. Ghosal S., Banerjee SK., Bhattacharya SK., Sanyal AK. Chemical and pharmacological evaluation of Desmodium pulchellum. Planta Medica.

1972;21(4):398-409.

20. Joshi KCea. Indian journal of chemistry. 1975;13:869-870.

21. Ghosal et al. Planta Medica. 1972;21:398-401.

22. 鍾鳴, 餘勝民, 楊增豔. 排錢草總生物鹼對免疫性肝纖維化大鼠 Ⅰ、 Ⅲ、 Ⅳ 型膠原及 T GFβ1 表達的影響. 中西醫結合肝病雜誌. 2005;15(1):38-40.

23. 鍾鳴, 餘勝民, 黃琳芸, 楊增豔. 排錢草總生物鹼對實驗性肝纖維化動物相 關指標的作用. Chinese Hepatology. 2001;6(3):168-170.

24. 鍾鳴, 楊增豔, 黃琳芸, 餘勝民, 雷晟, 楊伯甯. 排錢草總生物鹼對化學損傷 性肝纖維化大鼠肝臟病理及超微結構變化的影響. 胃 腸 病 學 和 肝 病 學 雜 志. 2001;10(3):230-232-251.

25. 余勝民, 鍾鳴, 黃琳芸, 張青青, 楊增豔. 排 錢 草對實驗性肝纖維化大鼠肝 臟膠原蛋白含量的影響. 湖南中醫藥導報. 1999;5(8):36-37.

26. 韋英群, 鍾鳴, 張樹球, 蒙金秋, 李朝敢. 排錢草及其複方三草膠囊對 O· 的影響. 現代中西醫結合雜誌. 2003;12(8):795-796.

27. G. Erdtman: Pollen Morphology And Plant Taxonomy-Angiosperm(An Introduction To Paltnology. I.). New York, Hanfer Publishing Company, 1966.

28. USP 28

. ; 2005.

29. Dellaporta S.L., Wood J., hicks J.B. A plant DNA minipreparation: version II.

Plant Molecular Biology Reporter. 1983;1(4):19-21.

30. Tseng-Chieng Huang. Pollen Flora of Taiwan. Published by National Taiwan University Botany Department Press; 1972.

31. Pushpesh Kumar Mishra, Nasib Singh, Ghufran Ahmad, Anuradha Dube, Rakesh Maurya. Glycolipids and other constituents from Desmodium gangeticum with

antileishmanial and immunomodulatory activities. Bioorganic & Medicinal Chemistry

Letters. 2005;15:4543-4546.

32. Khalid H. Janbaz, Sheikh A. Saeed, Anwar H. Gilani. Protective effect of rutin on paracetamol- and CCl4-induced hepatotoxicity in rodents. Fitoterapia.

2002;73:557-563.

33. Yuangang Zu, Chunying Li, Yujie Fu, Chunjian Zhao. Simultaneous determination of catechin, rutin, quercetin kaempferol and isorhamnetin in the extract of sea

buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) leaves by RP-HPLC with DAD. Journal of

Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2006;41:714-719.

34. Fang Fang, Jing-Ming Li, Qiu-Hong Pan, Wei-Dong Huang. Analytical、

Nutritional and Clinical Methods Determination of red wine flavonoids by HPLC and effect of aging. Food chemistry. 2007;101:428-433.

35. Wenkui Li, John F. Fitzloff. High performance liquid chromatographic analysis of St. John’s Wort with photodiode array detection. Journal of Chromatography B.

2001;765:99–105.

36. Mingfu Wang, Yaakov Tadmor, Qing-Li Wu, Cheek-Kok Chin, Stephen A.

Garrison, James E. Simon. Quantification of Protodioscin and Rutin in Asparagus Shoots by LC/MS and HPLC Methods. journal of agricultural and food chemistry.

2003;51:6132-6136.

37. Takuya Katsube, Naoto Imawaka, Yasuhiro Kawano, Yoshimitsu Yamazaki, Kuninori Shiwaku, Yosuke Yamane. Antioxidant flavonol glycosides in mulberry (Morus alba L.) leaves isolated based on LDL antioxidant activity. Food chemistry.

2006;97:25-31.

38. Anna Wach, Krystyna Pyrzyn´ska, Magdalena Biesaga. Quercetin content in some food and herbal samples. Food chemisrty. 2007;100:699-704.

39. 鄔建敏, 贾之慎, 唐雲湖. 竹類黄酮化合物總量及蘆丁含量的測定. 浙江農 業大學學報. 1998;24(4):339-343.

40. L iang Jieyi. Determination of Rutin in Xueyaping Tablets by HPLC. 廣東藥學院 院學報. 1998;14(4):259-261.

41. 曾經澤, 黃仁玉. 藥物分析方法的質量控制. 中國藥學雜誌. 1996;31(12):707-710.

42. 林文煜. 利用核醣體內轉錄區間序列之種間特異性寡核苷酸探針快速檢測方 法鑑定三種柴胡. 碩士論文 ,清華大學,新竹,93 年 7 月:26-42.

43. 陳婉玲. 以大豆葉綠體atpB-rbcL 非轉錄區域及rDNA ITS1 區域探討大豆品 系間親緣關係. 碩士論文 ,嘉義大學,嘉義,九十五年一月:23-35.

44. Renato D'Ovidio. Nucleotide sequence of a 5.8S rDNA gene and of the internal transcribed spacers from Populus deltoides. Plant Molecular Biology.

1992;19:1069-1072.

45. G.N. Fritz, J. Conn, A. Cockburn, J. Seawright. Sequence analysis of the ribosomal DNA internal transcribed spacer 2 from populations of Anopheles

nuneztovari (Diptera: Culicidae). molecular biology and evolution. 1994;11:406-416.

46. A.P. Vogler, R. DeSalle. Evolution and phylogenetic information content of the ITS-1 region in the tiger beetle Cicindela dorsalis. molecular biology and evolution.

1994;11:393-405.

47. Bruce G. Baldwin. Molecular Phylogenetics of Calycadenia (Compositae) Based on ITS Sequences of Nuclear Ribosomal DNA: Chromosomal and Morphological Evolution Reexamined. American Journal of Botany. 1993;80(2):222-238.

48. Takaiwa, F., S. Kikuchi, K. Oono, M. Sugiura. Nucleotide sequence of the 17-25S spacer region from rice rDNA. Plant Mol Biol. 1985.;4:355-364.

49. R.Z.Fu, J.Wang, Y.R.Sun, P.C.Shaw. Extraction of Genomic DNA Suitable for PCR Analysis from Dried Plant Rhizomes/Roots. Bio Techniques.

1998;25(5):796-801.

50. 李昭瑩. 台灣產油柑属(Phyllanthus)植物之生藥學研究. 博士論文 ,中國醫 藥大學,台中, 2005:153.

51. 蔡仁傑. 台灣產野甘草(Scoparia dulcis L.)之生藥學研究. 碩士論文 ,中國醫 藥大學,台中, 2006:1-132.

52. 蔡奇助, 蔡勝忠, 易美秀. 文心蘭'草莓'品種 5.8SrRNA 基因與內轉錄間隔區 之選殖. 台中區農業改良場研究彙報. 1999;62:31-40.

成果發表

一、 Identification of Desmodium pulchellum(L.)based on ITS sequence of nuclear ribosomal DNA in Taiwan

張肇元 李昭瑩 邱泰惠

94 年台灣藥學會年會暨學術研討會

嘉南藥理科技大學 臺南縣 仁德鄉 2005/12/17-2005/12/18 二、 台灣產大葉山螞蝗之形態學研究

張肇元 李昭瑩 邱泰惠 天然物研討會

中國醫藥大學 2006/11/18-2006/11/19 三、 波葉山螞蝗之生物活性評估 蔡仁傑 張肇元 黃太鴻 李昭瑩 邱泰惠 95 年台灣藥學會年會暨學術研討會 中國醫藥大學 2006/12/23

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