中草藥的水萃出物對於細胞增生的影響也許與細胞凋亡的機制有關，從中草藥分離 所得到的有效抗癌成份，抗癌與抗腫瘤的機制主要為細胞毒活性（直接殺傷癌細胞或抑 制癌細胞生長，而達到抗癌的功效） [Hong et al., 2001; Yoo et al., 2002] 與免疫機制 反應（提高身體的免疫反應，而達到抗癌作用）[Yi et al., 2001]。中藥可以直接殺傷癌 細胞，調節身體免疫反應，抑制肝癌細胞增生，誘導肝癌細胞進行凋亡作用，抑制肝癌 所產生的癌前病變等作用機制，達到防治肝癌的目的 [Kao et al., 2001]。因中草藥藥性 溫和較無毒性的特質，本研究主要應用是將具有抗癌效果的中草藥水萃出物處理肝癌細 胞株HepG2 細胞後，經過 cDNA 微陣列分析後，找出與抗癌機制相關的基因表現結果，
再經過細胞凋亡螢光染色的試驗後，看不同中草藥對於細胞凋亡途徑的影響。細胞毒性 的測試結果表明中草藥水萃出物確有殺傷肝癌細胞的作用；並抑制HepG2 細胞生長，
紫蘇、霍香、防風、刺五加葉及石蓮花水萃出物在濃度為100g/mL，抑制肝癌細胞生 長的百分比可以達到30％以上，在濃度為 400g/mL，抑制生長的效果更可以達到 50
％以上，此結果表明此五種中藥水萃出物具有抑制肝癌細胞生長的作用。
肝細胞癌變的演化過程中涉及大量的癌基因突變、缺失、擴增及抑癌基因失活等異 常表達資訊，利用cDNA 微陣列高效、快速的檢測方法闡明肝癌的發病機制及其早期診 治具有重要價值，使用含有7,680 個基因及 EST 序列的基因晶片來作經中草藥水萃出 物處理72 小時後 cDNA 微陣列分析，經過系統叢集分析方法可以組織基因並產生樹狀 圖，來表示具有相似的基因表現樣式 [Chu et al, 1998]。經過基因表現樣式的正規化與 標準常態分佈後的結果，霍香、防風及刺五加葉的處理，具有相近的常態分佈，但紫蘇 與石蓮花處理後，偏態係數與峰值係數皆小於1，基因表現的狀況更貼近常態分佈，
[Durbin and Rocke, 2003]。系統叢集分析可以將紫蘇、霍香、防風、刺五加葉及石蓮 花水萃出物處理後，基因的表現情況作一個具組織性整合，畫出可以代表所有基因之間
關連性的樹狀圖，結果可以看出霍香、刺五加葉及紫蘇處理具有相似的基因表現趨勢，
而在常態分佈分析結果中，經過刺五加葉及霍香處理後的基因表現樣式族群分佈相近
（偏態係數：刺五加葉3.81 與霍香 4.79；峰值係數：刺五加葉 48.39 與霍香 59.15），
另檢測不同中草藥處理後的基因表現樣式差異性，Tukey 公正顯著差異法分群結果將紫 蘇與刺五加葉處理後的基因表現樣式歸類為一群，刺五加葉與霍香處理後產生的基因表 現樣式分類為一群，鄧氏新多變域測驗法指出刺五加葉與霍香歸一群，最小顯著差異值 分析法也將刺五加葉與霍香為一群；在防風的處理下，基因的表現與其他四種中草藥水 萃出物處理相較下，具有較高表現量，在常態分佈的分析結果中，偏態係數（7.67）與 峰值係數（123.93）為五種中草藥中最高的。以常態分佈分析、單因子變異數分析與系 統叢集分析法的結果，皆可以檢測出不同中草藥處理的基因表現趨勢是否具有相似性。
逐步叢集分析法為依照給定的群數作獨立變數間的叢集分類，而自組圖分析可以將相似 的基因表現樣式依基因間的相關性被分為同一類 [Tamayo et al, 1999]。在此研究中，
逐步叢集分析被用來組織經過中草藥水萃出物處理72 小時後每一個基因表現樣式所產 生的龐大資料，並比較不同基因間的表現量，逐步叢集分析之後，將基因分為20 個叢 集，在具有相似平均基因表現的叢集3、5、6、7 及 16 中，刺五加葉與防風處理的平 均基因表現較高。另外叢集11、14 及 20 的基因表現也具有相似趨勢，五種中草藥處理 中，以防風具有較高平均基因表現樣式，此與系統叢集分析方法所畫出的樹狀圖分佈 中，基因表現樣式的趨勢具有相同的結果。在自組圖分析中，所分類的20 個叢集具有 中度以上（>0.3）的正相關，叢集 11、12 及 13 具有相似的平均基因表現，刺五加葉處 理後的平均基因表現較高，叢集14 與 15 中，石蓮花處理的平均基因表現樣式較高。基 因的表現樣式主要探討細胞凋亡、細胞增生及Cytochrome P450 superfamily 相關的基 因，經過逐步叢集分析後，大多的基因座落於叢集2、8、10 及 12；但經自組圖分析後，
細胞凋亡途徑相關的基因大部分被分於叢集6 與 7 中。不同的中草藥水萃出物，所含有 的有效抗癌物質不同，所引發的基因表現趨勢也不同，但是在抗癌目的，除了殺死癌細 胞，或抑制癌細胞生長外，主要的還是希望對人體所造成的負面影響能夠降至最低，溫 和且危害性低的自然生理途徑為細胞凋亡作用，在生物體生長與死亡的發展中，調節細
胞族群的細胞數目來維持平衡，為細胞群在體內平衡的重要機制，也是除去因為感染或 是潛在的腫瘤細胞的一個重要的過程，細胞凋亡為細胞死亡的其中一種途徑，藉由本質 上或非本質上的刺激來激發一個內生性的細胞自殺的過程。所以在本研究中，最後透過 Annexin V-FITC 與 PI 作螢光染色，探討中草藥水萃出物對於誘發 HepG2 細胞的凋亡 作用，結果指出經過72 小時後的處理後，在 PI-AnnexinV+（R2）結果中，防風及刺五 加葉在誘發細胞凋亡的產生上，可達control 組的三倍以上，尤其是防風的處理，可以 達到control 組的四倍以上，在細胞群落的變化討論上，在同樣的 gating 條件下，所做 相對數值的探討，經統計後以防風以及刺五加葉處理的結果較偏向致使HepG2 細胞走 向細胞凋亡的途徑，此結果再對照論文中表
3-4 的結果，可支持 cDNA 微陣列分析的結
果。綜合上面的結果我們可以推測紫蘇、霍香、防風、刺五加葉及石蓮花水萃出物，對 於HepG2 細胞具有抑制其生長的作用，經由 cDNA 微陣列分析後，與細胞凋亡、細胞 增生及Cytochrome P450 superfamily 相關的基因上，表現量高的基因 FASTK、GRN 及CYP1A1。低表現量的基因 PSMA6、RELA、DLG5 及 CYP2C9。這些經由中草藥 處理HepG2 細胞所造成的基因表現樣式變化都值得我們去探討，不同中草藥水萃出物 所引發的細胞生理途徑，因為含有的成分不同，所走的途徑或許相似，但是最終的目的 皆為抗癌。這些基因在中草藥水萃出物對抗癌的效應中，佔有重要的地位，值得我們再 進一步的探討與研究。