19. Glycine 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
20. HCl 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
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21. Hematoxylin 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
22. H2SO4購自Merck Co.(Darmstadat, Germany)
23. Kodak Bio-Max film 購自 Kodak Co. (New York, USA) 24. Methyl Alcohol 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
25. NaCl 購自 Sigma Chemical Co. (St. Louis,
MO,
USA) 26. NaF 購自 Sigma Chemical Co. (St. Louis,MO,
USA) 27. NaOH 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)28. Na3VO4 購自 Sigma Chemical Co. (St. Louis,
MO,
USA)29. Nitro blue tetrazolium (NBT) 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
30. Polymer of HRP (horseradish peroxidase) ; Poly-HRP購自 Sigma Chemical Co.
(St. Louis,
MO,
USA)31. Poly-L-lysine 購自 Sigma Chemical Co. (St. Louis,
MO,
USA)32. Prestained SDS-PAGE Standards, Broad Range 購自 Bio-RAD Co. (California, USA)
33. Prestained SDS-PAGE Standards, High Range 購自 Bio-RAD Co. (California, USA)
34. Prestained SDS-PAGE Standards, Low Range 購自 Bio-RAD Co. (California, USA)
35. PVDF membrane 購自Amersham Biosciences Ltd
.
(Taiwan Branch)36. Sodium dodecyl sulfate (SDS) 購自
Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)
37. Tetramethylethylenediamine (TEMED) 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
38. 1,1,3,3-tetramethoxypropane (TMP) 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
39. Thiobarbituric acid (TBA) 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
40. Trichloroacetic acid 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
41. Trifluoroacetic acid 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
42. Tris 購自 Bio-RAD Co. (California, USA)
43. Triton X-100 購自 Schwarz/Mann Biotech Co. (Cleveland, USA) 44.Trypan blue solution 購自 Sigma Chemical Co. (St. Louis,
MO,
USA)45. Trypsin-EDTA, (1X), liquid 購自 Gibco BRL Co.(Grand Island, NY, USA)
46. Tween 20 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
47. Xylene 購自 Merck Co.(Darmstadat, Germany)
(二) 細胞培養基
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1. Fecal Bovine Serum 購自 Gibco BRL Co.(Grand Island, NY, USA)
2. Goat serum 購自 Gibco BRL Co.(Grand Island, NY, USA)
3. Horse serum 購自 Gibco BRL Co.(Grand Island, NY, USA)
4. RPMI 1640 細胞培養基購自 Gibco BRL Co.(Grand Island, NY, USA)
(三) 抗體
1. Monoclonal sAPPα (6E10) antibody 購自 Sigma Chemical Co. (St. Louis,
MO,
USA)2. Monoclonal sAPPβ antibody 購自 Cell Signaling Technology Co. (Massachusetts, USA)
3. Monoclonal Aβ40 antibody 購自 Novus Co. (Littleton, CO, USA) 4. Monoclonal Tau protein antibody 購自 Cell Signaling Technology Co.
(Massachusetts, USA)
5. Monoclonal ApoE antibody 購自 Chemicon Inc. (Temecula, CA, USA)
二、實驗儀器:
1. 純水製造機:Water storage Tank RO-1070, REVER SE OSMOSIS, Taiwan。
2. 真空減壓濃縮機:EYELA Rotary Vacuum Evaporator N-1000V, USA。
3. 磁石攪拌器:JS-M4, JIITSANN, Taiwan。
4. 滅菌釜:Autoclave Model SS-320, Tomy, Japan。
5. 粉碎機:Osterizer, Mexico。
6. 振盪器:S-100, TAIYO, Japan。
7. 均質機:Model PRO 200, PRO Scientific Inc., USA。
8. 抽氣過濾器:ASPIRATOR A-3S, EYELA, Japan。
9. 恒溫水浴槽:B206-T2, FIRSTEK, Taiwan。
10. 恒溫震盪培養箱:Orbital incubator shaker Model 717, Hotech, Taiwan。
11. 二氧化碳之濕式培養箱:Model RCO3000TABB, Revco Techologie, USA。
12. 酸鹼測定器:MP220, METTLER TOLEDO, UK。
13. 高速冷凍離心機:HIMAC CR22E, HITACHI, Japan。
14. 熱風烘箱:DK63, Yamato, Japan。
15. 酵素免疫分析儀:Sunrise, TECAN, USA。
16. 倒立式顯微鏡:BI-500, MOTICAN, USA。
17. 數位相機:Motic 1000 1.3M PTX01 USB 2.0, Motic, Hong Kong。
18. 動物腦部立體定位儀:Stereotaxic instrument, Stoelting, USA。
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第二節 實驗方法
一、樟芝來源與萃取方法
(一) 子實體水萃取液與乙醇萃取液之製備
樟芝 (Antrodia camphorata) 子實體:由輔英科技大學保健營養系王志傑教 授提供。取子實體以二次水清洗放入 40℃ 烘箱 3 天進行烘乾後磨粉。子實體 水萃取液製備方式如下,9 g 乾燥子實體粉末經重覆 3 次以 90 mL 水溶液於 37℃、120 rpm 振盪萃取 6 小時,離心 (0.6 ×g) 30 分鐘取上清液,利用真空乾 燥濃縮成8 mL 再以冷凍乾燥後以水回溶於適當濃度。子實體水萃的殘渣部分經 重覆 3 次以 10 倍重量的 95% 酒精於 37℃、120 rpm 振盪萃取 6 小時,離 心 (2,500 rpm) 30 分鐘取上清液,利用真空減壓濃縮成 45 mL 再以冷凍乾燥後 以乙醇回溶於適當濃度。
(二) 樟芝菌絲體粉末來源
本實驗所採用的菌絲體粉末購自金穎生物科技股份有限公司,其成分分析表 如表一所示。
(三) 菌絲體水萃取液與乙醇萃取液之製備
取菌絲體放入 40℃ 烘箱 3 天進行烘乾後磨粉。菌絲體水萃取液製備方式 如下,50 g 乾燥菌絲體粉末經重覆 3 次以 500 mL 水溶液於 37℃、120 rpm 振 盪萃取 6 小時,離心 (0.6 ×g, 30 min) 後取上清液,利用真空乾燥濃縮成 120 mL 再以冷凍乾燥後以水回溶於適當濃度。菌絲體水萃物的殘渣部分經重覆 3 次以 10 倍重量的 95% 酒精於 37℃、120 rpm 振盪萃取 6 小時,離心 (0.6 ×g, 30 min) 後取上清液,利用真空減壓濃縮成290 mL,再以冷凍乾燥後以乙醇回溶於適當 濃度。
二、成分分析
(一) 總黃酮含量之分析
參考 Wu 等人(2006)的方法,將不同濃度之標準品 Rutin 並溶於 DMSO 中以樣品同樣方法測吸光值得到標準曲線。取0.5 mL 濃度分別為 0.01 g/mL、0.1 g/mL 之樟芝子實體與菌絲體 DMSO 萃取液,加入 2 mL 的 DDW,再置入 0.15
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表一、樟芝菌絲體粉末成分分析表 Table 1. Mycelia powder ingredient analysis table.