第四章 結果與討論
4.5 以離心分配層析儀分離桑葉成分的實驗結果
4.5.1 sample 1 分離結果
sample 1 中主要包含 Isoquercitrin 和 Astragalin 兩個成分，我們已
找出分離sample 1 的 CPC 最佳化條件(表 4-4)，選用 MTBE / Acetone / H2O 這組溶劑系統的原因，主要是因為溶劑極性所適合分離的樣品 範圍，包含目標物的成分，溶劑組成的體積比(MTBE / Acetone / H2O
= 6：4：10)是經由多次嘗試後，發現此組比例，目標物可以得到最佳 的分配係數值(表 4-5)。由表中可知 KD值都小於 1，表示樣品傾向分 佈在下層相，故最後選擇以descending mode 作為實驗條件。管柱總 體積220 mL，靜相滯留量大約 187 mL，表示靜相滯留率可高達 85%。
表4-4、CPC分離sample 1的實驗參數
溶劑系統 (MTBE / Acetone / H2O = 6：4：10) 流動模式 Descending mode (下層相當動相) 樣品進樣量 5 mL (75 mg 溶於 6 mL 的動相)
轉速 900 rpm
流速 1.0 mL/min
偵測波長 350 nm
表4-5 、 Isoquercitrin 和 Astragalin 兩 種 成 分 在 溶 劑 系 統 (MTBE / Acetone / H2O = 6：4：10)的分配係數值
Isoquercitrin Astragalin
分配係數(KD) 0.23 0.45
經由上述實驗參數進行CPC 分離 sample 1，所得到的結果(圖 4-14) 可明顯觀察出存在 I、II、III 三個波峰，使用分管收集器收集這三個
波峰，先將分管收集器設定在第 45 分鐘前的沖提溶液不作收集，之
後設定每3 分鐘收集一管，波峰 I 收集 51-69 min(3-8 管)；波峰 II 收 集75-99 min(11-18 管)；波峰 III 收集 114-141 min(24-32 管)，然後進 一步做HPLC 分析。由 HPLC 層析圖(圖 4-15)可得知，波峰 I 所含蓋 的都是屬於極性較大的化合物，分配係數值較小，所以最先被沖提出 管柱外；波峰II 主要是 Isoquercitrin 成分，且純度是 94.0%；波峰 III 則以Astragalin 成分為主，純度有 97.0%。經由 CPC 製備分離的兩個 成分，純度都可到達 90%以上，比起一般的 silica gel chromatography 方法[38]，樣品可以擁有更純化的結果。
圖4-14、CPC分離sample 1的層析圖
波峰I 收集 51-69 min(3-8 管)；波峰 II 收集 75-99 min(11-18 管)；波
4.5.2 sample 2 分離結果
sample 2 中 主 要 包 含 Chlorogenic acid 、 Quercetin 3-(6-malonylglucoside)和 Kaempferol 3-(6-malonylglucoside)三個成分，
已找出分離sample 2 的 CPC 最佳化條件(表 4-6)，溶劑系統(MTBE / Acetone / H2O = 6：4：10)加 0.6% (v/v)formic acid 的組成比例，使得 這三個目標物可以得到最佳的分配係數值(表 4-7)。靜相滯留量大約 185 mL，表示靜相滯留率也可高達 85%。
表4-6、CPC分離sample 2的實驗參數
溶劑系統 (MTBE / Acetone / H2O = 6：4：10) 加0.6% (v/v) formic acid 流動模式 Descending mode (下層相當動相) 樣品進樣量 5 mL (73 mg 溶於 6 mL 的動相)
轉速 900 rpm
流速 1.0 mL/min
偵測波長 350 nm
表 4-7 、 Chlorogenic acid 、 Quercetin 3-(6-malonylglucoside) 和 Kaempferol 3-(6-malonylglucoside) 三 種 成 分 在 溶 劑 系 統 (MTBE / Acetone / H2O = 6：4：10) 加0.6% (v/v) formic acid的分配係數值
Chlorogenic acid
Quercetin
3-(6-malonylglucoside)
Kaempferol 3-(6-malonylglucoside) 分配係
數(KD) 0.23 0.54 1.13
經由上述實驗參數進行CPC 分離 sample 2，所得到的結果(圖 4-16)
可明顯觀察出存在 A、B、C、D 四個波峰，同樣使用分管收集器收
集這四個波峰，先將分管收集器設定在第 45 分鐘前的沖提溶液不作
收集，之後設定每3 分鐘收集一管，波峰 A 收集 51-66 min(3-7 管)；
波峰B 收集 72-90 min(10-15 管)；波峰 C 收集 105-129 min(21-28 管) ； 波峰 D 收集 180-252 min(46-69 管)，然後進一步做 HPLC 分析。由 HPLC 層析圖(圖 4-17)可得知，波峰 A 所含蓋的都是屬於極性較大的 化合物，所以最容易被沖提出管柱外，其中包含了 Rutin 這個成分，
由於 Rutin 存在的量很少，所以並沒有額外分離出 Rutin 化合物；波 峰B 主要是 Chlorogenic acid 成分，且純度可達到 98.0%；波峰 C 則 以Quercetin 3-(6-malonylglucoside)成分為主，純度有 93.5%；波峰 D
則是Kaempferol 3-(6-malonylglucoside)成分，純度有 92.5%。經由 CPC
製備分離的三個成分，純度也都可到達 90%以上，因此樣品確實具有
被純化的效果。
圖4-16、CPC分離sample 2的層析圖
波峰A 收集 51-66 min(3-7 管)；波峰 B 收集 72-90 min(10-15 管)；波
(B)
(C)
圖4-17、HPLC分析波峰B、波峰C和波峰D的層析圖 (A) 波峰 B 主要包含 a (Chlorogenic acid)成分。
(B) 波峰 C 主要包含 h [Quercetin 3-(6-malonylglucoside)]成分。
(C) 波峰 D 主要包含 i [Kaempferol 3-(6-malonylglucoside)]成分。
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
0 50 100 150 200
a g
mAU
min
h
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0
20 40 60 80 100
g
mAU
min
i