(農業試驗所特刊第184號) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊

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(1)農業試驗所 120 週年. 農試所特刊第 184 號 Special Publication of TARI no.184. 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊 Proceedings of the Symposium on Important New Emerging Crop Diseases in Taiwan and Their Controls. 中華民國一○四年九月十八日 September 18, 2015. 行政院農業委員會農業試驗所 Taiwan Agricultural Research Institute.

(2) 農試所特刊第 184 號 Special Publication of TARI no.184. 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊 Proceedings of the Symposium on Important New Emerging Crop Diseases in Taiwan and Their Controls 主編：鄧汀欽、陳金枝、蔡佳欣、蔡志濃、謝廷芳 Edited by Deng, T. C., Chen, C. C., Tsai, C. H., Tsai, J. N., and Hsieh, T. F. 主辦單位：行政院農業委員會農業試驗所 Held at Taiwan Agricultural Research Institute, COA, Wufeng, Taichung, Taiwan on September 18, 2015 行政院農業委員會農業試驗所編印 Published by Taiwan Agricultural Research Institute 中華民國一○四年九月十八日 September 18, 2015.

(3) 目錄序 ………………………………………………………………………… i 臺灣新發生重要作物病害之鑑定、通報及緊急防治顏辰鳳、曾獻嫺、張瑞璋 ……………………………………… 1 台灣莧菜疫病之研究與病害防治安寶貞、蔡志濃、王姻婷、黃晉興、林筑蘋、王三太、楊智凱 13 進口梨接穗花枯病之鑑定與防治蔡佳欣、安寶貞、鄧文玲 ……………………………………… 23 玉米褪綠斑駁病毒病害流行及傳播模式研究周建銘、林鳳琪、鄧汀欽、簡伊萱、陳君弢、陳怡如、蔡錦慧、黃秀雯 …………………………………………………………… 31 芒果畸形病吳雅芳、黃尹則、張錦興、鄭安秀、陳啟予 ………………… 43 臺灣新紀錄的果樹與花卉病害：梨枝枯病、李細菌性穿孔病、洋桔梗菌核病、長壽花葉斑病沈原民、黃冬青、趙佳鴻、劉興隆、王妃蟬、洪挺軒、楊雅淨、傅仰人 …………………………………………………………… 51 非洲鳳仙花露菌病在台灣發生黃晉興、李佩如 ………………………………………………… 61 紅龍果濕腐病之新紀錄病原菌 Gilbertella persicaria var. pitaya 及其防治林筑蘋、蔡志濃、安寶貞、陳品儒、張捷婷、徐子惠 ……… 75 甘藷基腐病之發生、病原鑑定及防治黃巧雯、楊宏仁、林靜宜、許淑麗、倪蕙芳 ………………… 87 百香果雙生病毒發生現況鄭櫻慧、陳金枝、鄧汀欽 ……………………………………… 99 臺灣紅龍果病毒性病害之研究與現況分析張雅君、郭庭禕、毛青樺、呂有其、李勇賜 ………………… 107 台灣的洋桔梗病毒病害陳煜焜 …………………………………………………………… 115 百合 Plantago asiatica mosaic virus 特性及其防治策略陳金枝 …………………………………………………………… 127 台灣地區紅龍果線蟲病害及防治策略陳殿義、顏志恒 ………………………………………………… 137 本世紀台灣新發生的植物病害紀錄-「台灣植物病害名彙」增補篇鄧汀欽、陳啟予、許秀惠、陳殿義 …………………………… 145.

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(5) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 臺灣新發生重要作物病害之鑑定、通報及緊急防治顏辰鳳1 曾獻嫺1 張瑞璋1, * 1. 行政院農業委員會動植物防疫檢疫局聯絡作者；電子郵件: [email protected]. *. 摘要由於國際自由貿易頻繁、國人出國旅遊及觀光客來臺風氣日盛，加上國際郵包業務的增長，外來植物疫病蟲害經由前述途徑入侵國內的機會逐年增加，因此，發展快速、正確的診斷鑑定技術，強化重大疫病蟲害的監測、預警和通報體系，落實緊急防疫及撲滅工作，成為植物防疫重要的施政措施。行政院農業委員會動植物防疫檢疫局(防檢局)自 89 年起即結合農業試驗所、農業藥物毒物試驗所、全國各區農業改良場、大專院校相關系所、縣市政府及法人團體等單位，共同建構植物疫情監測通報體系，規劃疫情通報流程，辦理疫情通報、偵察調查、主動監測、預警及診斷服務等工作，該體系依照任務及功能可區分為：管制中心、資訊中心、區域疫情監測中心、鑑定中心、診斷服務站及地方政府疫情中心等六部分；另建置植物疫情管理資訊網，彙整由區域疫情監測中心及診斷服務站所收集之田間疫病蟲害監測資料、診斷服務案件及疫情通報案件資料，藉由田間監測及農友送診案件資料，期儘早發現新發生有害生物之疫情，並經植物疫情管理資訊網即時通報防檢局，再依循新發生有害生物處理機制，辦理相關防疫行政工作。 103 年新發生植物病害共 8 種，包括 2 種真菌、3 種細菌、1 種病毒、1 種類病毒及 1 種植物菌質體所引起之病害，處理措施分別以官方防治及一般防治方式辦理。其中採行撲滅或緊急防治之官方防治措施計有:梨花枯病、玉米褪綠斑駁病毒及番椒小果類病毒共 3 種，其餘採一般防治方式處理為:胡麻曲莖及花葉病、萵苣細菌性葉斑病、莧菜疫病、芒果畸形病及番茄髓壞疽病等共 5 種，上述新發生病害經評估對作物產量品質不會造成重大影響，已宣導農友注意防範；又芒果畸形病及番茄髓壞疽病亦辦理防治藥劑延伸使用評估作業，俾提供農民防治技術及藥劑之需求。近年來我國新發生植物病害案件日益增加，為確實掌握國內疫情狀況以即時採取適當防檢疫措施，請各植物保護機關及學術研究人員，一旦發現新發生植物病害應立即通報防檢局，以利採取適當措施避免擴散蔓延，衍生重大植物疫災。關鍵詞：植物疫情監測通報體系、新發生有害生物、官方防治、一般防治 1.

(6) 作物病害之鑑定、通報及緊急防治. 前言近期我國積極加入跨太平洋夥伴協定(Trans-Pacific Partner-ship,TPP)諮商，且陸續與各國洽簽各種貿易協定，隨著國際市場的開放及貿易的往來，加上人民生活素質的提升，國人出國觀光旅遊以及觀光客來台旅遊風氣日盛，且對國外農產品及園藝產品需求持續增加，因此，我國對於預防有害生物入侵途徑之策略，除加強邊境的各種檢疫措施，更可利用國內建置之植物疫情通報體系，實施重大有害生物監測、預警及通報的工作，藉由早期發現新發生有害生物的疫情，透過通報系統即時通報行政院農業委員會動植物防疫檢疫局(防檢局)，再依循新發生有害生物處理機制，辦理相關防疫工作。茲就我植物疫情通報體系、新發生有害生物處理機制及近期新發生有害生物處理經過，概要說明。. 植物疫情監測通報體系 86年前臺灣省政府農林廳積極建立「植物疫情監測體系」，全面整合全省之疫情監測、通報與疫病蟲害鑑定工作，並透過電腦網路的連結，使我國的植物疫情監測開始邁入現代化。防檢局於90年承接此一資訊化工作，即積極升級並開發建置「植物疫情監測通報系統」，規劃透過網路通報疫情之功能，以強化疫情通報、偵察調查、主動監測、預警、診斷服務之效率。92年更引進地理資訊系統 (Geographic Information Systems)，以提升疫情管理效能。該體系係依照任務及功能區分為管制中心、資訊中心、區域疫情監測中心、鑑定中心、診斷服務站及地方政府疫情中心等6部分(15)，其組織架構及疫情蒐集流程如圖1。防檢局為管制中心，負責全國性植物疫情監測通報系統的管理及規劃；農委會農業藥物毒物試驗所為資訊中心，負責有害生物主動監測資料彙整及分析；農委會所屬各區農業改良場及茶業改良場為區域疫情監測中心，負責轄區內農作物重大有害生物監測調查；鑑定中心係由防檢局委託農業試驗改良場所、國立臺灣大學、中興大學、嘉義大學及屏東科技大學，協助有害生物的鑑定及標本保存；診斷服務站則設立於各試驗改良場所、相關大專院校及財團法人機構等 26處(表1)，提供農民作物疫病蟲害診斷諮詢服務，並將診斷服務案件彙整通報，作為瞭解各地農作物疫情之參考(5)；地方政府疫情中心則設立疫情管理員及疫情調查員，監測調查轄區內地方植物疫情，俾於緊急疫情發生時，協調聯繫當地農民及農民團體配合實施相關官方、緊急或共同防治工作。. 2.

(7) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 新發生重要作物病害之通報、監測及防治針對我國近年來新發生的植物有害生物，多數專家學者會致電通報防檢局或以「疫情通報表」將有害生物發生情形及相關資料登錄植物疫情管理資訊網(1)，防檢局管制中心收到「疫情通報表」後，則立即與專家學者研議須採行之相關處理措施，此些措施經防檢局確認後，則將該措施填入「處理措施回函」，請地方政府各植物防疫單位執行，同時知會相關地方政府及診斷服務站注意轄區疫情發生狀況並宣導農友加強防範。專家學者依「處理措施回函」進行防治方法的研擬及疫情調查等工作，並隨時將有害生物發生情況以「後續調查表」回報；遇有無法鑑定之有害生物，則填寫「後送鑑定表」，並將樣本送鑑定中心協助確認。倘對於重大疫情或新入侵有害生物案件有造成蔓延之虞，防檢局則立即召集相關專家學者及地方政府防疫人員，成立緊急應變小組並啟動官方防治措施。 103年我國新發生重要作物病害共8種，包括2種真菌、3種細菌、1種病毒、1 種類病毒及1種植物菌植體所引起之病害，相關資料登錄於防檢局首頁「新發生植物有害生物專欄」(圖2) (7)，其處理措施分別以官方防治及一般防治方式辦理，茲將重要案件介紹如下：. 一、梨花枯病 (一)疫情通報及病原菌鑑定防檢局 103 年 1 月及 104 年 1 月分別接獲宜蘭縣動植物防疫所及苗栗區農業改良場通報，三星鄉及三灣鄉農友使用進口日本梨接穗時發現疑似梨花枯病病斑，防檢局接獲通報後，隨即會同宜蘭縣動植物防疫所、苗栗縣政府、三星鄉農會、三灣鄉農會、苗栗區農業改良場及花蓮區農業改良場前往罹病梨園進行會勘。另針對與宜蘭縣三星鄉使用自日本進口同批高風險梨穗追查其流向，發現臺中市和平區亦使用此接穗園的接穗，防檢局爰會同相關單位前往會勘及採樣，惟該區並未發現該病害。梨穗樣本經農業試驗所(以下簡稱農試所)及中興大學鑑定確認為 Pseudomonas syringae pv. syringae(12)，該病原菌可感染梨屬、李屬、菜豆屬及丁香屬作物，經由風雨、昆蟲、罹病枝條及操作工具等進行傳播。該菌為嗜低溫菌，於低溫冷濕氣候下易造成危害，可感染花、葉、果實及枝條，主要為害花器部位，造成花器褐化壞疽，最後萎凋腐爛；亦引起梢枯、葉片壞疽斑、莖部凹陷病斑及果實潰瘍等病徵，嚴重時造成枝條枯萎甚至植株死亡(12)。 (二)監測、防治及宣導農試所針對該病害進行室內藥劑試驗篩選，並由防檢局公告 68.8%多保鏈黴素可濕性粉劑、12.5%鏈黴素溶液、16.5%鏈土黴素混合可濕性粉劑及 70%鹼性氯氧化銅可濕性粉劑為緊急防治藥劑(9)。防 3.

(8) 作物病害之鑑定、通報及緊急防治. 檢局另會同相關單位督導宜蘭縣三星鄉農友進行 6 次預防性施藥(圖 3)，於梨花枯病發生高風險期行文及發布電子看板，加強監測並宣導農友注意防範，而後各地均未發生疫情。防檢局 104 年亦將梨花枯病納入植物有害生物主動監測項目，預計 11 月至 105 年 4 月針對新竹、苗栗、臺中、宜蘭地區梨園，每 10 天監測 1 次，以利及早發現疫情，籲請農友加強防範。. 二、玉米退綠斑駁病毒 (一)疫情通報及病原菌鑑定防檢局接獲農業試驗所、臺南區及高雄區農業改良場通報，103 年 1-5 月間陸續接獲臺南市、雲林縣、嘉義縣、高雄市及屏東縣農友送鑑定或產地取得之樣本，經農試所鑑定為玉米褪綠斑駁病毒（Maize chloroticmottle virus, MCMV）(3,4,6)。該病毒主要感染甜玉米，飼料用硬質玉米較耐病但亦可被該病毒感染，玉米遭該病毒感染後造成植株矮化（圖 4），葉脈褪綠，葉片黃綠斑駁斑點，病斑癒合為褪綠條紋或大面積黃化，嚴重時導致葉片乾枯，玉米果穗抽穗不良、雄花花軸變短，果穗結實不稔，無果粒，嚴重感染時果穗乾枯，導致產量減少(3,4,6)。 (二)監測、防治及宣導防檢局接獲通報後於 103 年 6 月 4 日邀集相關單位研議相關配套措施，並請各地農業改良場協助調查全國食用玉米發病情形，由於該病毒當時發生已趨緩，因此未傳出重大疫情。另本病害藉種子傳播率為 0.04-0.07%，除已向農民宣導勿私自挾帶種子進口，玉米種子及飼料用玉米輸入時均應檢附輸出國植物檢疫證明書向防檢局申報檢疫，檢疫合格始得輸入，另亦監測進口玉米種子，目前均未檢出病毒。由於該病毒會藉由薊馬傳播，為即早掌握疫情並因應防治，農試所針對薊馬進行室內藥劑試驗篩選，並由防檢局公告 5.87%賜諾特水懸劑及 50%撲滅松乳劑 2 種藥劑為緊急防治藥劑(8)。另防檢局與農試所共同研擬「玉米褪綠斑駁病毒及其媒介玉米薊馬監測標準作業程序」，並由各區農業改良場調查全國食用玉米，確認病毒病害於秋冬發生較為嚴重，防檢局爰於 103 年 8 月起陸續於雲林縣、嘉義縣、臺南市及屏東縣辦理 5 場防治宣導講習會，自 9 月至 12 月於各地農業電子看板宣導防治方法，10 月起於雲林縣及臺南市監測玉米薊馬(圖 5)，並依據監測結果發布 2 則警報，提醒農友掌握時期進行防治，104 年未發生重大疫情。防檢局並已委請農試所於 104 年秋冬季進行該病毒驗證試驗確認防治成效，以利研擬該病毒綜合管理策略。 4.

(9) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 三、番椒小果類病毒 (一)疫情通報及病原菌鑑定防檢局接獲亞洲蔬菜中心輸澳洲番茄種子遭澳方檢出番茄類病毒之通知訊息，爰著手調查我國番茄罹染情形，並與農試所共同研擬「番茄種傳病毒與類病毒病害偵察調查手冊」，自 102 年迄今針對香瓜梨嵌紋病毒(Pepino mosaic virus, PepMV)、馬鈴薯紡錘型塊莖類病毒(Potato spindle tuber viroid, PSTVd)、番茄褪綠矮化類病毒 (Tomato chlorotc dwarf viroid,TCDVd)、鯨魚藤潛隱類病毒(Columnea latent viroid, CLVd) 、番茄小果類病毒 (Pepper chat fruit viriod, PCFVd)、番茄莖頂矮化類病毒(Tomato apical stunt viroid, TASVd)及番茄植株雄化類病毒(Tomato planta macho viroid,TPMVd)進行調查 (10,11). ，約採集 15 種番茄品種共 1,211 個樣本，請農試所以反轉錄聚合酶連鎖反應(RT-PCR)進行檢測，結果均未發現前揭 7 種病毒及類病毒。 (二)監測及防治農試所於 103 年 10 月進行調查時，其中於亞洲蔬菜中心所採集一株番茄樣本，經 RT-PCR 及定序(Genome Sequencing)確認罹染番椒小果類病毒(PCFVd)，該病毒造成番茄植株生長減緩、褪綠萎黃，該植株在確認檢測結果後已拔除銷毀，另，農試所於該植株附近採集其他番茄樣本皆未罹染該類病毒(11)。由於韓國聲稱曾於我國輸韓之酪梨種苗檢出馬鈴薯紡錘型塊莖類病毒(PSTVd)，並將我國列為疫區，惟研究類病毒之專家學者皆表示未曾於我國檢出該類病毒，我國執行偵察調查也未曾檢出，為提供非疫區之證明，防檢局仍持續於全國執行番茄病毒與類病毒偵察，目前除調查番茄外，更擴展調查馬鈴薯、青椒等其他茄科作物及酪梨，目前自臺南市大內區採樣酪梨葉片未檢出前述病毒及類病毒。. 四、其他病害 103 年通報處理的案件尚包括彰化縣埤頭鄉芝麻植株的胡麻曲莖及花、雲林縣萵苣細菌性葉斑病(6)、雲林縣西螺鎮莧菜疫病(12)、臺南市官田區芒果畸形病(13)、南投縣、宜蘭縣番茄髓壞疽病及新竹縣胡瓜苗白枯病，前揭新發生病害多為單點或零星發生，經評估對作物產量品質不會造成重大影響，爰以一般防治方式辦理，由防檢局行文相關單位及診斷服務. 葉病. (14). 站宣導農友注意防範(7)。另芒果畸形病及番茄髓壞疽病原預計辦理防治藥劑延伸使用評估作業，惟因藥效資料不足，需待資料補齊後，才能進行延伸使用評估，以利提供農民防治技術及藥劑之需求。. 5.

(10) 作物病害之鑑定、通報及緊急防治. 結論與展望依據植物防疫檢疫法第8條規定，中央主管機關得公告特定疫病蟲害之種類，清單所列特定疫病蟲害一經在我國發現，應立即實施官方防治，以制止其蔓延危害。植物防疫檢疫法部分條文增修案業已於103年6月18日通過，未來將由防檢局重新審視清單後進行公告，並訂定監測或調查計畫，由各縣市政府主管機關執行監測或調查；惟實施初期，防檢局仍將編列經費委請各區農業改良場所、大專院校及財團法人機構協助監測調查。另為利作物所有人及植物防疫人員掌握新發生植物有害生物、重大植物疫情或輿情的發生狀況，協助後續決策判斷及其他機關辦理依據，防檢局爰擬訂「植物有害生物現況處理情形表」(表2)做為現勘、採樣、防治或其他植物防疫處理之紀錄使用。鑑於國際農產品貿易增加及觀光旅遊盛行，加上氣候變遷影響生物族群消長 (2). ，導致近年陸續發現或確認之有害生物如玉米褪綠斑駁病毒等，往往在確認疫情時，其發生面積都相當廣泛。為掌握新發生植物有害生物之防疫時機，以利研擬相關防疫措施，避免疫情擴散蔓延，籲請各植物保護機關及學術研究人員於發現新有害生物或新鑑定已發生之新有害生物時，請以電話、簡訊或透過植物疫情管理資訊網立即通報防檢局，並提供相關資訊，防檢局未來亦將定期行文請相關單位進行新發生有害生物填報。此外，防檢局亦將成立計畫，由計畫執行單位蒐尋鄰近國家新發生之疫情，並分析國內發生之可能性及其防範措施，以利及早預防新浮現或新入侵之作物病害。. 謝辭感謝農業試驗所、農業藥物毒物試驗所及各區農業試驗改良場等單位、縣市政府及相關大專院校進行監測、試驗及舉辦相關訓練，方得以順利撰寫前揭資料；另繕寫期間，承蒙防檢局同仁提供相關資料，在此致上無限謝忱。. 引用文獻 1.方尚仁、高清文、張弘毅。2011。植物疫情監測與通報系統之現況與展望。農政與農情。109: 47-53。 2.石正人。2010。全球氣候變遷對植物防檢疫之影響。全球氣候變遷與台灣農業因應調適策略研究專刊(V1): 3-19~3-22。 3.周建銘、蔡錦慧、陳君弢、羅朝村、陳人瑋、林旻宏、鄧汀欽。2014。感染甜玉米的玉米褪綠斑駁病毒之鑑定。中華民國植物病理學會 102 年度年會論文宣讀。 6.

(11) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 4.周建銘、鄧汀欽、林鳳琪、曾獻嫺、顏辰鳳、張瑞璋。2015。玉米褪綠斑駁病毒疫情、傳播方式及管理策略。農政與農情 277：59-62。 5.陳泰元、顏辰鳳、張瑞璋、朱容君、黃莉欣、蘇文瀛。2014。植物病蟲害診斷鑑定暨諮詢服務案件分析。農政與農情 267：62-68。 6.葉詩琦、曾獻嫺、顏辰鳳、張瑞璋、吳雅芳、周建銘、鄧汀欽。2014。新發生病蟲害之防治與防疫資訊-萵苣細菌性葉斑病、玉米褪綠斑駁病毒病。農業世界 371:126-128。 7.新發生植物有害生物專欄。2015。防檢局網址 http://www.baphiq.gov.tw/news_ list.php?menu=1327&typeid=1378&typeid2=1951。 8.農藥資訊服務網。2014。公告「玉米玉米薊馬(玉米褪綠斑駁病毒之媒介昆蟲)」之緊急防治藥劑及其使用方法與範圍如附件。防檢局網址 http://pesticide.baphiq.gov.tw/web/NewsDetailViews.aspx?news_sn=1225。 9.農藥資訊服務網。2015。公告「梨花枯病」之緊急防治藥劑及其使用方法與範圍如附件。防檢局網址 http://pesticide.baphiq.gov.tw/web/NewsDetailViews.aspx?news_sn=1247。 10.鄭櫻慧。2014。番茄種傳病毒與類病毒病害偵察調查手冊，17 頁。 11.鄭櫻慧、賴宛瑜、曾獻嫺、顏辰鳳、張瑞璋。2014。番茄種傳病毒與類病毒病害之偵察調查現況。動植物防疫檢疫季刊 40：14-15。 12.盧增鑫、吳詩敏、顏辰鳳、張瑞璋、安寶貞、蔡佳欣。2014。新發生病蟲害之簡介與防治─莧菜疫病、梨接穗細菌性病害。農業世界 368 期:102-103。 13.盧增鑫、顏辰鳳、張瑞璋、吳雅芳、鄭安秀。2014。新發生病蟲害之簡介與防治-芒果畸形病。農業世界 370:117。 14.盧增鑫、顏辰鳳、張瑞璋、鄧文玲。2014。新發生病蟲害之簡介與防治─胡麻曲莖及花葉病。農業世界 373 期:106。 15.顏辰鳳、郭克忠。2009。植物疫情監測與展望。糧食作物暨植物保護研討會專刊：128-135。. 7.

(12) 作物病害之鑑定、通報及緊急防治. 診斷服務站作物病蟲害. 農民. 區域疫情監測中心. 鑑定中心. （農業試驗所等）區域性主動監測中心被動監測流程主動監測流程. 主動監測預警系統. 全國性主動監測中心. （各區農業改良場）. 圖 1、植物疫情主動及被動監測流程圖. 8. 管制中心. 資訊中心. 植物疫情. 地方政府疫情中心.

(13) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 圖 2、防檢局首頁「新發生植物有害生物專欄」 9.

(14) 作物病害之鑑定、通報及緊急防治. 圖 3、進行梨花枯病預防性施藥. 圖 4、玉米感染退綠斑駁病毒造成植株矮化. 圖 5、利用黃色黏紙監測玉米薊馬 10.

(15) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 表 1、防檢局委託之 26 處作物病蟲害診斷服務站診斷服務站名稱. 1. 農業試驗所應用動物組. 高OO、陳OO 04-23317601. 2. 農業試驗所植物病理組. 蔡OO. 3. 農業試驗所嘉義分所. 倪OO、黃OO 05-2771341. 4. 農業試驗所鳳山分所. 許OO. 5. 農業藥物毒物試驗所. 蔣OO、黃OO 04-23304511. [email protected]. 6. 桃園區農業改良場. 施OO、莊OO 03-4760852. [email protected]. 7. 苗栗區農業改良場. 黃OO、林OO 037-236619. [email protected]. 8. 臺中區農業改良場. 白OO、劉OO 04-8523101-321. [email protected]. 9. 臺南區農業改良場. 鄭OO、陳OO. 10. 高雄區農業改良場. 曾OO、周OO 08-7746762. [email protected]. 11. 花蓮區農業改良場. 楊OO、蔡OO 03-8535915. [email protected]. 12. 臺東區農業改良場. 蔡OO、李OO 089-325110#730. [email protected]. 13. 種苗改良繁殖場. 袁OO. 04-25825471. [email protected]. 14. 茶業改良場. 寧OO. 03-4823633. [email protected]. 15. 茶業改良場文山分場. 邱OO. 02-26651993. [email protected]. 16. 茶業改良場魚池分場. 許OO. 049-2855128. [email protected]. 17. 茶業改良場臺東分場. 余OO. 089-551200. [email protected]. 18. 財團法人臺灣香蕉研究蘇OO 所. 08-7392111~3. [email protected]. 19. 連江縣政府. 賴OO. 0836-22347. 20. 金門縣動植物防疫所. 劉OO. 082-336625. 21. 國立臺灣大學昆蟲學系. 楊OO. 02-33669640. [email protected]. 22. 國立臺灣大學植物病理孫OO 與微生物學系. 02-33664608. [email protected]. 23. 國立中興大學昆蟲學系. 04-22851469. [email protected]. 24. 國立中興大學植物病理王OO 學系. 25 26. 聯絡人. 唐OO. 機關電話. e-mail. 編號. 04-23317504 07-7313304. 06-5912901 #301 06-5912901 #303. [email protected] [email protected] [email protected] [email protected]. [email protected]. 04-22840780 #366 [email protected]. 國立嘉義大學植物醫學 05-2717818 蕭OO、郭OO 系 05-2717823 國立屏東科技大學植物 08-7703202 鄭OO 醫學系 #6161. 11. [email protected] [email protected] [email protected].

(16) 作物病害之鑑定、通報及緊急防治. 表 2、植物有害生物防疫現況處理情形表植物有害生物防疫現況處理情形表 ※本表於辦理新發生植物有害生物、重大植物疫情或輿情之防疫處理時填報案由. □現勘. □訪談. □監測. □防治. □銷燬. □其他：. 日期. 年. 月. 日. 發生地點、地段地號、地址或座標作物所有人作物有害生物. 姓名. 聯絡電話. 住址作物名稱. 種植面積. 種植時間. 受害面積. 種類. 受害時間. 危害情形（栽培狀況、環境或其他現象…等）. 補充說明. 辦理情形/處理措施. 後續作法以上敘述符合實際情形，現場人員確認無誤，請簽名於下：（機關、職級、簽名）. 12.

(17) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 台灣莧菜疫病之研究與病害防治安寶貞1,* 蔡志濃1 王姻婷1 黃晉興1 林筑蘋1 王三太2 楊智凱3 1. 農業試驗所植物病理組農業試驗所鳳山熱帶試驗分所 3 農業試驗所農業工程組 * 聯絡作者；E-mail: [email protected]; [email protected] 2. 摘要 2007年春天在雲林縣西螺鎮蔬菜專業區內的多處莧菜園內發現嚴重疫病，發病時間自11月至翌年6月為止，12月至翌年4月發病較為嚴重，對莧菜產業造成嚴重威脅，該病害在國內外並未報導過，為一新病害。2007年1月至2013年12月共採集59處莧菜田的罹病組織，獲得116株莧菜疫病菌，該病菌僅為害莧菜與野莧，不為害其他蔬菜作物，為一新疫病菌，定名為Phytophthora amaranthi；病菌在8-32 ℃下可生長，在12-28℃下可誘發病害，最適生長與發病溫度均為20-24℃；並且在所有接種發病的罹病組織內形成大量卵胞子，可為殘存器官；病菌在病土中殘存期可長達2.5年以上，均可再誘發病害；含病菌之土壤中經60℃10分鐘便完全死亡。該菌對滅達樂的抗性為中等，在添加100 ppm的培養基上的生長率為對照處理的 26.7-43.6%。進行藥劑防治試驗，供試藥劑包括福賽得 (500×)、快得寧 (1500×)、亞磷酸 (500與1000×) 及達滅芬 (4000×)，結果所有藥劑均有良好的防治效果，但以達滅芬對葉部病害防治效果最佳，次為福賽得、亞磷酸及快得寧；但防治莖基部腐敗時，則以亞磷酸、福賽得較佳，達滅芬次之，快得寧最差。而物理方法將連作土壤蒸汽處理30 min或60 min，均可完全將土攘深度15 cm以內的疫病菌完全消滅，顯著降低疫病的發生。田間灌注1000 ppm 與2000 ppm的亞磷酸三次對莧菜疫病的防治效果甚佳，同時可以防治白銹病，並對下期作之莧菜疫病有良好之防治效果。. 13.

(18) 莧菜疫病. 前言莧菜是我國重要的蔬菜之一，全年均可生產。2007 年 1 月至 4 月間，雲林縣西螺鎮蔬菜專業區莧菜園內首度出現疫病，無論紅莧或白莧均普遍發生，且植株之根、莖、葉均可被感染。罹病葉片初現灰綠色水浸狀斑點，而後擴大成直徑 3-5 cm 之灰褐色圓斑，病組織與健康部位無明顯界限，病徵與晚疫病十分相近；莖部與莖基部被感染時，組織褐變腐敗且出現隘縮情形，罹病株不久枯萎倒伏，有些罹病田在小苗期即嚴重發病，造成幼苗猝倒 (damping off)，因病情嚴重而犛田廢耕，農民損失甚大。莧菜疫病在世界尚未有報導，且試驗發現引起莧菜的疫病菌為一疫病新種 (安等 2008, Ann et al. 2015)。本報告即探討莧菜疫病的病因、病原、病原生態，及找尋病害防治方法，以解決農民病害問題。. 莧菜疫病之發生與病菌之特性莧菜疫病之發生與病徵 2007年1月至4月間，雲林西螺蔬菜專業區莧菜園內首度出現疫病，無論紅莧或白莧均普遍發生，且根、莖、葉均可被感染，但以葉片與莖基部發病最常見。葉片發病時，罹病葉片初現灰綠色水浸狀斑點，而後擴大成直徑3 cm之灰褐色圓斑，病組織與健康部位無明顯界限，病徵與晚疫病十分相近；莖部與莖基部時被感染時，組織褐變腐敗且出現隘縮情形，罹病株不久枯萎倒伏，有些罹病田因病情嚴重而犁田廢耕。根部罹病時，根系稀少且腐敗。經7年觀察，除 2009 年外，每年病害發生均很嚴重，嚴重時全園廢耕。莧菜疫病為中低溫病害，冬春季發病嚴重，夏秋季未曾發生，發病期為11月至翌年6月間，嚴重期為12-4月，依據收集之氣象資料顯示（資料未顯示），病害之嚴重度似乎與冬春季低溫降雨有密切關係。此外，該病害目前僅侷限於西螺地區，其餘如桃園、斗南、台南及屏東地區，均無發現該病害之蹤跡。. 菌株分離、形態與生理特性描述自2007~2011年經採集、分離及純化作業，在西螺地區共獲得 59 個地點的 14.

(19) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 116 個菌株。西螺菌株在 5%CV-8 上生長時無特殊花紋，氣中菌絲很少；在 PDA 上生長略為緩慢，具玫瑰花瓣狀花紋。孢囊 (sporangia) 在孢囊梗 (sporangiophores) 上呈假單軸狀 (simple sympodium) 著生或孢囊梗不規則分枝；孢囊具乳凸 (papilla)，乳凸顯著或不顯著，卵形、檸檬形或長橢圓形；部分孢囊具脫落性 (20-30%)，具有短梗，長度 (0.1-) 11.7 (-45) μm；代表菌株 TARI28041 之孢囊大小平均為 (40-) 52.2 (-70) × (30-) 38.2 (-50) μm，孢囊長寬比 (L/B ) (1.1-) 1.37 (-1.86).；未發現厚膜胞子 (chlamydospores) 與菌絲膨脹體 (hyphal swellings)。所有菌株為同絲型 (homothallism)，藏卵器 (oogonial wall) 頂生，表面平滑；卵孢子 (oospores) 為非充實型 (aplerotic)；藏精器 (antheridia) 底著 (amphigenous)；代表菌株藏卵器、卵胞子及藏精器的大小平均為 (26-) 32.8 (-38) μm，(20-) 28.8 (-32) μm 及 (7.5-) 14 (-20) x (10-) 14.0 (-20) μm，屬Waterhouse分類群中的第2或第4群。代表菌株之菌絲生長範圍均為 8─32℃，最適溫為 24℃，每日直線生長速率約 0.7 cm。孢囊形成溫度為 (16-) 24 (-32)℃, 但溫度超過 >28℃時，形成的孢囊型態不正常；有性生殖的溫度則為 (8-) 20-24 (-28)℃。依據形態特性，該菌應為一尚無描述之新種疫病菌，將學名訂為 Phytophthora amaranthi Ann & Ko (Ann et al. 2015)。. 病原性測定與發病生態選擇3菌株 (包括代表菌株TARI28041等) 接種7品種系的莧菜與野莧 (包括台一、台二、Am69、Am79 、Am96、Am97及本所野莧)，除本所野莧品系外，白莧與紅莧均嚴重發病，且以白莧發病最嚴重。人工接種造成的病斑，與田間自然發病者相同，葉片、莖部與根系均會被感染。將接種發病的組織取回，均可再分離到原先接種的疫病菌。該菌具寄主專一性，接種其他蔬菜均不會發病，包括茄科 (番茄、番椒、茄子、馬鈴薯、煙草、龍葵)、十字花科（白菜、青江菜、油菜、甘藍）、瓜類（胡瓜、香瓜、西瓜等）、菊科蔬菜（萵苣、茼蒿）、波菜、茄子果實、胡瓜果實、馬鈴薯塊莖、蘿蔔塊根、胡蘿蔔、洋蔥麟莖等。. ITS 與β-tubulin 序列分析分析 16 株 (包括代表菌株TARI28041等) 西螺莧菌株之 ITS1-5.8S-ITS2 全長序列，均為 753 bp ，且序列相同度 (identity) 達 100% 。將代表菌株 15.

(20) 莧菜疫病. TARI28041 (type culture) 與 TARI27147 的基因序列登錄於 NCBI 網站的資訊庫，代號為 GU111585 (type culture) 與 GU111584。並將序列上網比對，結果與資訊庫收集的 Phytophthora capsici (WPC6649B1553, GU259460.1) 最為相近，相似度高達 99.34%，僅有5個鹽基有差異。在 B-tubulin 部分基因序列（658 bp）分析方面，所有分析菌株的序列 identity 亦完全一致。代表菌株 TARI28041 (type culture) 與 p27147 的基因序列亦登錄於 NCBI 網站的資訊庫，代號為 KJ179949 (type culture) 與 KJ179948。亦將該序列上網比對，結果與資訊庫收集的 Phytophthora capsici [PD_00091, (P10386) EU079544.1] 最為相近，相似度高達98.78%，僅有8個鹽基有差異。. 病原生態調查致病濃度測定：選擇毒性 (virulence) 最強的菌株 2 支 ( 代表菌株 TARI28041與TARI27147)，將游走子懸浮液濃度10倍序列稀釋為每毫升含104、 103、102 個游走子，再將病菌接種於生長10-14天大白莧的葉部與莖基部，置於 20 ℃下，測定誘致發病之最低濃度。每處理4株，實驗重複2次。結果顯示在 20℃ 下，病原菌游走子濃度104 以上時較易誘發病害，游走子濃度在102時發病率甚低，或不發病。. 發病溫度：莧菜幼苗生長10-14天，以噴霧法接種，再置於不同溫度下，8-32 ℃ 每 4℃一間隔，測定發病範圍與最適溫度及會形成卵孢子之溫度。每處理 4 株，實驗重複 2 次。該菌在 12-32℃ 下可誘發病害，最適合發病的溫度為20℃，其次為24℃與28℃。. 病菌殘存：選擇毒性最強的菌株兩支 (代表菌株TARI28041與TARI27147)，以噴霧法接種植株發病後，觀察病菌在植株內的侵染與變化情形。同時將罹病組織與病菌埋於土壤中，調查病原菌於植株與土壤中的存活情形，每 6 個月調查一次。每處理至少接種 10 株植物，試驗重複 2 次，以明瞭病菌在植株殘體中存活時間長短。結果顯示，人工接種之罹病組織於接種 1-2 星期後均可形成卵胞子，溫度在 12-28 C下均會產生，但以 20C 下產孢最多。將罹病殘體埋於病土中，於 20-28℃ 的溫度下經過 2.5年以上，病土再次種植莧菜時仍會誘發嚴重病害，顯示病菌仍然存活。病菌於 12-28℃ 下均可存活，但以 16℃ 存活最佳，發病率在 56-81% 之間。 16.

(21) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 種子帶菌之可能性：利用選擇性培養基測定，檢測市售種子是否帶菌，但均無檢測到莧菜疫病菌。. 菌株之抗藥性目前共分離 116 株菌株，均對滅達樂略具抗藥性，在添加 10 ppm 與 100 ppm 滅達樂的培養基上可以稍許生長，在添加 100 ppm 的培養基上的生長率為對照處理的26.7-43.6%，為中等抗病。. 莧菜疫病之防治藥劑防治：測定藥劑對莧菜疫病的防治效果，供試藥劑包括亞磷酸、福賽得、快得寧及達滅芬。結果顯示，防治葉部疫害，以達滅芬 (4000×) 效果最佳 (完全沒有發病)、福賽得 (500×) 次之 (罹病度14.8 %)、亞磷酸 (500×與1000×) 再次之 (發病度分別為29.8 與 48.5%)，快得寧 (1500×) 效果較差 (罹病度61.0%)，但均比對照處理為佳 (罹病度87.5%)，而福賽得與亞磷酸 (500×) 會造成輕微藥害，葉緣稍微焦枯。防治莧菜根部與莖基部疫病（黑骨病），則以亞磷酸 (稀釋100× 與 200×) 與福賽得 (200×) 效果最佳 (罹病率0%)，福賽得 (400×) (罹病率12.5%) 次之，達滅芬 (1000× 與 2000×) (罹病率分別為75% 與 87.5) 不佳，而對照處理完全死亡 (罹病率100%)。田間試驗有相似結果，以亞磷酸 (稀釋100×) 效果最佳 (罹病率4.3%)、亞磷酸 (200×) (罹病率5.3%) 與福賽得 (200×) (罹病率5.0%) 次之，福賽得 (400×) (罹病率7.0%)再次之，達滅芬 (2000×) (罹病率8.3%) 不佳，快得寧 (500×)最差(罹病率12.3%)，與對照處理無顯著差異 (罹病率11.9%)。藥劑濃度與使用方法宜再調整。如果施用兩次，則亞磷酸、福賽得、達滅芬均可完全抑制莧菜莖基部疫病之發生。此外，在試驗地（西螺）156.8 m2 的試驗區上灌注 50 L 的亞磷酸中和液，濃度1000 ppm或2000 ppm，發病率分別為4.4% 與3.6%，而未使用區的發病率為 15.1%，亞磷酸可以顯著降低莧菜疫病之發病率達60-90%，同時使用亞磷酸之處理的植株株高 (分別為 47.8 與 53.1 cm) 與單株株重 (分別為11.3 與 13.2 g) 亦較對照組 (分別為45.0 cm 與 10.1 g) 顯著優異。此外，施用亞磷酸對後期作亦有抑病效果，亞磷酸施用田完全無發病，而對照區發病率達10%以上。 17.

(22) 莧菜疫病. 土壤中病菌的耐熱性：將發病一個月的罹病組織與土壤以1:9混合，在經過不同溫度處理 10 min 或 30 min 後，再與土壤以 1:9 混合製成病土種植莧菜，經 60℃以上處理 10 min 的病土即不具導病性，所有栽植的莧菜完全存活，顯示病菌已經死亡。在50℃存活率為87%；40℃的存活率為81%；對照處理的存活率為59 %。此外，10 min 與30 min處理對病菌存活的影響差異不大。. 土壤蒸汽處理：土壤經埋管覆蓋後，經蒸汽處理 30 min 或 60 min，土壤溫度可達80℃以上，均可完全將土攘中的疫病菌完全消滅，重植連作區幼苗未出現疫病，而對照處理的發病率達5.5%以上，土壤蒸汽處理可以顯著降低莧菜幼苗疫病之發病率；此外，處理區的平均植株的株重較重 (30 min 區百株重 375 g； 60 min 區百株重 347.5 g) 且株高較高 (30 min 區株高平均 19.4 cm； 60 min 區株高平均 19.8 cm)，對照區的生長不良之矮化植株較多，百株重 130 g、株高平均 15.9 cm，分析差異顯著，顯示蒸汽處理對莧菜之連作障礙有相當的改善作用。. 結論莧菜疫病菌 Phytophthora amaranthi 為一新疫病菌，具寄主專一性，除莧菜外，目前尚無其他寄主。該菌偏好中低溫，在8 -32℃可生長，最適合生長的溫度為 24℃；最適合發病的溫度為 20℃，一般在 11 月至翌年 6 月發生，12月至翌年 4月發病較頻繁。在最初發現的第一年 (2007) 與第二年 (2008) 病害發生十分嚴重，2009年相對輕微，但2010與2011年又相對較嚴重，該病害發生的嚴重度可能與溫度高低及降雨多寡有關，推測低溫 (20℃左右) 與降雨有利病害之發生。病原菌 P. amaranthi 為同絲型，在罹病組織內會產生大量卵孢子，為殘存器官，可以越夏與存活 2.5 年以上，為冬春季的初次感染源。目前該病害僅在台灣西螺一帶發現，其他如桃園、台南、屏東均未發現病害蹤跡。在病害防治方面，防治莧菜葉部疫害，以達滅芬對防治效果最佳，其次為福賽得與亞磷酸，快得寧效果較差；但防治莖基部腐敗則以亞磷酸、福賽得較佳，達滅芬次之，快得寧最差。試驗中，高濃度（2000 ppm）之亞磷酸與福賽得 (稀釋200×) 會引起藥害，葉緣稍有焦枯，不宜使用。此外，在田間灌注 1000 ppm 與 2000 ppm 的亞磷酸三次對當期莧菜疫病的防治效果甚佳，它同時可以防治白銹病，並對下期作之莧菜疫病有良好之防治效果。 18.

(23) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 疫病菌為好氣性，依據本試驗誘釣方訪檢測結果顯示，莧菜疫病菌在表土 15 cm 以下存活的機率很低，並無撿出。而莧菜園內亦存在腐霉菌 (Pythium spp.)，腐霉菌在表土深度 0-35 cm 處密度相當高，與疫病有相當差異。罹病田土壤埋管覆蓋後，經蒸汽處理 30 min 或 60 min，土壤溫度可達80℃以上，均可完全將土攘中20 cm 以內的疫病菌與腐霉菌完全消滅，但是無法完全殺死表土 15 cm 以下的 Pythium。蒸汽處理可以顯著降低莧菜幼苗猝倒病之發病率；但幼苗猝倒病在蒸汽處理田與對照田之菌相不一，蒸汽處裡田的菌相以腐霉菌為主，而對照田包括腐霉菌、疫病菌及立枯絲核菌，顯示蒸汽處理對疫病菌與立枯絲核菌之殺滅效果較佳。莧菜採收前，調查植株基腐病 (basal stem rot) 之發生情形，發現各處理普遍發生，差異不顯著，但蒸汽處理區的較高大植株較多，平均重量較重；對照區的植株生長不良之矮化植株較多，分析差異顯著，顯示蒸汽處理對莧菜之連作障礙有相當的改善作用。. 參考文獻 1.. 安寶貞、王姻婷、黃晉興、蔡志濃、王三太. 2008. 莧菜疫病. 植病會刊 17:69-70.（摘要，論文宣讀）. 2.. 徐世典等. 2002. 植物病害名彙 (四版). 植病學會刊印. 386 頁.. 3.. Ann, P. J., Huang, J. H., Tsai, J. N., and Ko, W. H. 2014. Morphological, molecular and pathological characterization of Phytophthora amaranthi sp. nov. from amaranth in Taiwan. J. Phytopathol. (排版中) doi 10.111/jph.12433. 4.. Boesewinkel H. J. 1976. Storage of fungal cultures in water. Trans Br Mycol Soc 66: 183-185.. 5.. Cooke D. E. L, Drenth A., Duncan J. M, Wagels G., Brasier C. M. 2000. A molecular phylogeny of Phytophthora and related Oomycetes. Fungal Genet Biol 30:17-32.. 6.. Erwin, D., and O. Ribeiro. 1996. Phytophthora Diseases Worldwide. APS press. Minnesota. 562 pp.. 7.. Gallegly ME, Hong C. (2008) Phytophthora: Identify Species by Morphology and DNA Fingerprints. St. Paul, MN, APS Press. 158 p.. 8.. Ho, H. H., Ann, P. J., and Chang, H. S.1995. The Genus Phytophthora in Taiwan. Acad. Sin. Mon. Ser. 15. Taipei, Taiwan, ROC. 86 pp. 19.

(24) 莧菜疫病. 9.. Hwang S. C., Ko W. H., Aragaki M. (1975) A simplified method for sporangial production by Phytophthora cinnamomi. Mycologia 68:1233-1234.. 10. Ko, W. H., H. S. Chang, and H. J. Su. 1978. Isolates of Phytophthora cinnamomi from Taiwan as evidence for an Asian origin of the species. Trans. Br. Mycol. Soc. 71:496-499. 11. Stamp D. J., Waterhouse G. M, Newhook F. J., Hall G. S. 1990. Revised Tabular Key to the Species of Phytophthora. Mycol. Pap. 162, 12. Villa N. O., Kageyama K., Asano T., Suga H.. 2006. Phylogenetic relationships of Pythium and Phytophthora species based on ITS rDNA, cytochrome oxidase II and β-tubulin gene sequences. Mycologia 98:410–422. 13. Waterhouse, G. M. 1963. Key to the Species of Phytophthora de Bary. Mycol. Pap. 92, CMI, Kew Surrey, England. 21 pp. 14. White T. J., Bruns T., Lee S., Taylor J. 1990. Amplification and direct sequencing of ribosomal RNA genes for phylogenetics. In Innis MA, Gelfand DH, Snirsky JJ, White TJ. Eds. PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications. San Diego, Academic Press, p 315-322.. 20.

(25) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. Studies on Phytophthora Disease of Amaranth and Its Control in Taiwan Ann, P. J.1,*, Tsai, J. N.1, Wong, I. T.1, Huang, J. H.1, Lin, C. P.1, Wang, S. T.2, and Yang, C. K.3 1. Plant Pathology Division, Taiwan Agricultural Research Institute (TARI), ROC Fengshan Tropical Horticultural Experiment, TARI, Kaohsiung, Taiwan, ROC 3 Agricultural Engineering Division, TARI, Taichung, Taiwan, ROC. * Corresponding Author: [email protected] 2. ABSTRACT In the spring of 2007, a serious disease on amaranth was noticed in several farms in the major amaranth production area in central Taiwan. Abundant oospores were found in the disease tissues. A species of Phytophthora was consistently isolated from disease tissues. Morphological characteristics of this organism did not match any reported Phytophthora species and the organism was named Phytophthora amaranthi. Pathogenicity tests and molecular characterization confirmed the identity of the organism as a new pathogen of amaranth and a new species of Phytophthora. The disease generally occurred from November to June of the next year with the most severe periods from December to next April. A total of 116 isolates from 59 fields were obtained. The pathogen was with host specificity; it only attacked amaranth species but not any other vegetable crops. In the fields, the Phytophthora attacked root, basal stem and leaf of the host and caused root and basal stem rot, and leaf blight, respectively. The ranges of temperatures for supporting pathogen growth were from 8 to 32℃ and for inducing disease from 12 to 28℃, with optimum growth and disease development at 20-24℃. A large number of oospores were formed in all the diseased tissues under all the temperatures suitable for disease development. The pathogen could survive as oospores in the soil for more than 2.5 years. All the isolates were slightly resistant to metalaxyl. They can growth at media amended with 10 ppm chemicals. The effects of chemicals on disease control were evaluated. The test chemicals included neutralized phosphorous acid (NPA), Fosetyl-aluminum, oxine copper and dimethomorph. Resulted showed that the best chemical for control of leaf blight was dimethomorph (4000x), followed by Fosetyl-aluminum (500x) and NPA 21.

(26) 莧菜疫病. (500 and 1000x), oxine copper was the worst (1500×). While for inhibition of root and basal stem rot in the green house and field studies, NPA (100 & 200x) and Fosetyl-aluminum (200x) were the best. The soil disinfection with steam for 30 minutes or 60 minutes can completely kill the pathogen in the soil depth of 20 cm and significantly reduced the disease incidence of seedling dumping-off and Phytophthora basal stem root. Meanwhile the effect of soil steaming on suppression of Phytophthora disease was better than the Pythium diseases. Result of field study showed that soil drenching with 1000 ppm and 2000 ppm NPA for 3 times could effectively inhibit Phytophthora disease as well as white rust disease of amaranth in the field, meanwhile the control effect of phosphorous acid could last to next plantation.. 22.

(27) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 進口梨接穗花枯病之鑑定與防治蔡佳欣 1, * 安寶貞 1 鄧文玲 2 1. 行政院農業委員會農業試驗所植物病理組國立中興大學植物病理學系 * 聯絡作者，電子郵件信箱：[email protected] 2. 摘要進口梨接穗花枯病 (Pear blossom blast)，在台灣最早於民國 103 年宜蘭三星鄉農友發現所購買的日本梨穗，枝條有異常凹陷黑斑，將皮削開後可見其內部組織，呈現壞疽狀斑點病癥，該農友通報防檢局將樣品後送至本所檢驗後，由枝條黑斑組織可分離出一種細菌，並鑑定該細菌為 Pseudomonas syringae pv. syringae，為歐美國家梨樹花枯病的病原細菌。該菌可感染梨樹造成花枯、芽枯及葉斑等病徵。當環境適合病害發生時，可造成顯著的梨果產量損失。在診斷鑑定上可將疑似感染病菌之樣品於 King’s B 培養分離病原細菌，所得之細菌測試菸草過敏性反應，並以 Biolog、16S rDNA 序列分析及專一性引子等方式鑑定該菌為 Pseudomonas syringae。進一步再將該細菌接種至梨、紫丁香及豆莢測定其病原型。為避免該病菌於國內蔓延造成經濟損失，已篩選出 4 種藥劑供緊急防治用。關鍵字: 梨接穗、花枯病、Pseudomonas syringae pv. syringae. 前言梨屬於薔薇科 (Rosaceae) 梨屬 (Pyrus) 作物，為國內重要經濟果樹之一，依據農業統計年報(1)，2014 年國內梨栽種面積 5575 公頃，台中市占 3649 公頃為最主要產區、苗栗縣 1358 公頃居次、其他依次為新竹縣、嘉義縣、宜蘭縣等地，年產量約 13 萬公噸。國內主要栽培品種有高需冷性的溫帶梨如秋水、幸水、豐水、新世紀、新興及低需冷性的橫山梨。溫帶梨品種因為在冬季需足夠低溫來滿足其開花結果的需求，在國內原本只能種植梨山地區等高山上，但由於寄接梨技術的發展成熟，可將溫帶梨花接穗寄接在低海拔地區的橫山梨上，達到生產高品質溫帶梨的目的(3,4)，因此目前低海拔地區大多以寄接方式生產溫帶梨，成為我 23.

(28) 進口梨接穗花枯病. 國特殊的梨果生產模式。目前國內的寄接梨接穗來源，六成來自國內梨山地區外，四成梨穗仰賴國外進口，以日本進口為主，少量來自中國大陸。. 進口梨接穗花枯病簡介梨接穗花枯病最早的發現在 103 年 1 月時，防檢局接獲宜蘭縣動植物防疫所通報，三星鄉農友發現使用日本進口之梨接穗出現不明可疑病斑，病斑表皮凹陷，切開表皮發現皮下內部組織亦呈現壞疽(圖一)，樣品經送交本所檢驗後，分離出一種病原細菌，經接種試驗證實具病原性，並鑑定該病原菌為 Pseudomonas syringae pv. syringae。經文獻資料查詢可知該菌為在歐美國家為梨樹花枯病(Pear blossom blast)的病原菌，為梨樹重要的細菌性病害(17)。此病最早在 1914 年由 Barker 等人在英國發現(7)，病菌在梨樹上可感染花器、葉片及枝條等部位，引起之病徵包括有花枯、芽枯、葉斑及潰瘍等(2,22,25)，該病菌多出現於溫帶地區(20℃)(5)，當環境氣候適合病原細菌發展的時候，該病菌感染梨樹花器造成花枯，因而導致產量下降的嚴重損失，濕冷的環境適合此病菌的生長，因此嚴重的病徵大多出現於濕且冷的氣候(24)。此外由於 P. syringae pv. syringae 菌株具有冰核活性 (Ice nucleation activity)，在低溫時易引起作物的霜害(5)。此病已於義大利、法國、美國、西班牙、加拿大、智利、南非、澳大利亞及中國等地報導(,9,19,26)。我國主要梨接穗進口國日本在 2012 年亦報告指出在日本種植之西洋梨樹 (European pear) 受 P. syringae pv. syringae 感染，造成梨葉及幼果黑斑、年輕枝條褐化萎凋、花瓣褐化及花托變黑病徵(23)。. 病原菌基本特性 P. syringae pv. syringae 分類上屬於 Proteobacteria 門，Gammaproteobacteria 綱，Pseudomonales 目，Pseudomonadaceae 科，Pseudomonas 屬，為革蘭氏陰性菌，桿狀具 1 至多根極生鞭毛，於 K’ing B 培養基可產生螢光色素，可產生果聚醣，不具氧化酶酵素，不具馬鈴薯致腐能力，不具精氨酸二水解酶 (Arginine dihydrolase)，可誘導菸草產生過敏性反應。該菌之寄主廣泛，因此該菌廣泛分布於世界各地，多在溫帶國家地區，引起的病害包括有梨花枯病 (Blossom blast)、細菌性黑斑病 (Bacterial spot)(23) 、蘋果疱皮病 (Blister bark)(16) 、芒果頂壞疽 (Apical necrosis)(8)、核果類 (如桃、李、櫻桃及杏) 樹木潰瘍 (Stone fruit bacterial canker)(10, 16,18)、橄欖樹潰瘍 (Olive bacterial canker)(6)、紫丁香細菌性葉枯病 (Lilac bacterial blight)(28)、番茄葉斑病 (Tomato leaf spot)(12)、菜豆褐斑病 (Brown spot of snap bean)(14)、奇異果潰瘍 (Kiwifruit bacterial canker)(20)、甘蔗紅條斑(21)等，此菌亦可存在於雜草(Grass)上(18)。. 24.

(29) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 診斷鑑定 P. syringae 之病原型 (Pathovar) 眾多，病原型主要依危害的寄主與病原性的不同，至少有 57 種(11,13)，近年因為分子生物學的發達，P. syringae 各種不同的病原型可用基因將其分群 (Group)，P. syringae pv. syringae 屬於第 3 群(15)。因此此病菌之診斷鑑定，可將疑似感染的梨接穗樣品切取黑色壞疽組織，先於於 K’ing B 培養基分離病菌，將具有螢光之細菌挑出，可利用 16S rDNA 序列分析、Biolog 細菌鑑定系統及 P. syringae 分群之專一性引子(15)等方式先確認為植物病原菌 P. syringae。後續病原型測定，可將病菌接種至紫丁香、梨及豆莢，觀察接種處出現之壞疽病徵加以確認(27)。. 防治方法 1.. 2. 3. 4. 5. 6.. 避免從罹病果園採穗:由文獻資料可知該病菌可於外觀健康的植物表面殘存，病菌族群隨季節變動，可能成為將來主要的感染源(19)，受病菌污染的梨穗並不一定會出現病徵，因此須避免從罹病果園進口梨穗。去除病穗:由於該病菌會感染花器，應隨時注意剪除花枯病穗，並消毒工具。低溫潮濕的天候容易發病，因此冬季及春季連續下雨後需特別注意是否有病害發生。山區氣溫較低適合此病菌生長，亦需隨時注意。藥劑防治:若發現梨樹感染，除剪除病枝外，可依照防檢局公告之緊急防治藥劑施藥處理(表一)。清園:病園於採收後需進行清園消毒。. 參考文獻 1. 2.. 3. 4. 5.. 行政院農業委員會統計室。2015。農業統計年報。行政院農業委員會。330 頁。邱文、徐福壽、謝關林、徐麗慧、懷燕、李斌、余山紅、錢軍。2008。引起梨花枯病和芽枯的 Pseudomonas syringae pv. syringae 病原細菌鑑定。中國農業科學。41: 2657-2662。施昭彰。2013。台灣梨育種。台灣果樹育種研討會專刊。137-143。徐信次、黃和炎。2000。寄接梨之栽培管理。台南區農業改良場技術專刊 89-8 (No.106)。30 頁。曾國欽、徐世典。2003。重要植物細菌病害診斷鑑定技術。植物重要防疫檢疫病害診斷鑑定技術研習會專刊 (二)。95-115 頁。 25.

(30) 進口梨接穗花枯病. 6.. 7. 8.. 9. 10. 11.. 12. 13. 14.. 15.. 16.. 17.. 18.. 19.. Ashorpour, M., Kazempour, M. N., Ramezanie, M. 2008. Occurrence of Pseudomonas syringae pv. syringae the causal agent of bacterial canker on olives (Olea europaea) in Iran. ScienceAsia 34:323-326. Barker, B. P., and Grovo, O. 1914. A bacterial disease of fruit blossom. Ann. Appl. Biol. 1: 85-97. Cazoria, F. M., Tores, j. A., Olalla, L., Perez-Garcia, A., Farre, J. M., and de Vicente, A. 1998. Bacterial apical necrosis of mango in southern Spain: A disease caused by Pseudomonas syringae pv. syringae. Phytopathology 88:614-620. Clara, F. M., 1932. A new bacterial disease of pears. Sciences 75:111. Jones, A. L. 1971. Bacterial canker of sweet cherry in Michigan. Plant Dis. Rep. 55:961-965. Gardan, L., Shafif, H., and Grimont P. A. D. 1997. DNA relatedness among pathovars of P. syringae and related bacteria. In Pseudomonas syringae pathovars and related pathogens (Rudolph K., Burr, T. J., Mansfield, J. W., Stead, D. eds.) p445-448. Kluwer Academic Publishers, London, United Kingdom. Gullino, M. L., Gilardi, G., Sanna, M., Caribaldi, A. 2009. Epidemiology of Pseudomonas syringae pv. syringae on tomato. Phytoparasitica 37:461-466. Hirano, S. S. and Upper, C. D. 1990. Population biology and epidemiology of Pseudomonas syringae. Annu. Rev. Phytopathol. 28:155-177. Hirano, S. S., Rouse, D. I., Clayton M. K., and Upper, C. D. 1995. Pseudomonas syringae pv. syringae and bacterial brown spot of snap bean: A study of epiphytic phytopathogenic bacteria ＆ associated disease. Plant Dis. 79: 1085-1093. Inoue, Y. and Takikawa, Y. 2006. The hrpZ and hrpA genes are variable, and useful for grouping Pseudomonas syringae bacteria. J. Gen. Plant Pathol. 72:26-33. Kennelly, M. M., Cazorla, F. M., de Vicente, A., Ramos, C. 2007. Pseudomonas syringae disease of fruit trees: Progress toward understanding and control. Plant Dis. 9:4-17. Latorre, B. A., Rioja, M. E., and Lillo, C. 2002. The effect of temperature on infection and a warning system for pear blossom blast caused by Pseudomonas syringae pv. syringae. Crop Prot. 21: 33-39. Little, E. L., Bostock, R. M., and Kirkpatrick. 1998. Genetic characterization of Pseudomonas syringae pv. syringae strains from stone fruit in California. Appl. Environ. Microb. 64:3818-3823. Mansvelt, E. L. and Hattingh, M. J. 1988. Resident populations of Pseudomonas syringae pv. syringae on leaves, blossom, and fruits of apple and pear trees. J. 26.

(31) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 20. 21. 22.. 23.. 24. 25. 26.. 27.. 28.. Phytopathol. 121:135-142. Mazarei, M. and Mostoflipour, P. 1994. First report of bacterial canker of kiwifruit in Iran. Plant Pathol. 43:1055-1056. Rahimian, H. 1995. The occurrence of bacterial red streak of sugarcane caused by Pseudomonas syringae pv. syringae in Iran. J. Phytopathol. 143:321-324. Spotts, R. A., and Cervantes, L. A. 1995. Factors affecting the severity of bacterial canker of pear caused by Pseudomonas syringae pv. syringae. Plant Pathol. 44:325-331. Tabira T., Abe, A., Honda, H., Sato, K., Takeda, T., Inoue, Y., Uematsu, H., Azegame, K. 2012. Bacterial black spot of European pear (Pyrus communis L. var. sativa de Candolle) caused by Pseudomonas syringae pv. syringae. Jpn. J. Phytopathol. 78: 178-182. [in Japanese] Whitesides, S. K. and Spotts, R. A. 1991. Susceptibility of pear cultivars to blossom blast caused by Pseudomonas syringae. Hortscience 26: 880-882. Wilsom, E. E. 1934. A bacterial canker of pear trees new to California. Phytopathology 24:534-537. Yessad, S., Manceau C., Luissetti, J. 1992. A detached leaf assay to evaluate virulence and pathogenicity of strains of Pseudomonas syringae pv. syringae on pear. Plant Dis. 76:370-373. Yessad-Carreau, S., Manceau C., Luissetti, J. 1994. 1994. Occurrence of specific reactions induced by Pseudomonas syringae pv. syringae on bean pods, lilac and pear plants. Plant Pathol. 43:528-536. Young, J. M., 1991. Pathogenicity and identification of the lilac pathogen, Pseudomonas syringae pv. syringae van Hall 1902. Ann. Appl. Biol. 118:283-298.. 27.

(32) 進口梨接穗花枯病. Identification and Control of Pear Blossom Blast in Imported Pear Scions Tsai, C. H.1,* , Ann, P. J.1, and Deng, W. L. 2 1. Division of Plant Pathology, Agricultural Research Institute, COA Department of Plant Pathology, National Chung Hsing University * Corresponding Author, e-mail: [email protected] 2. ABSTRACT In 2014, Pear blossom blast in imported pear scions was first found in Sanshing township, Yilan county. The abnormal sunken black spots were observed in the surface of some pear scions imported from Japan. The internal tissues of the diseased scions showed necrotic spot symptom. The bacteria isolated from necrotic tissues of the scions were identified as Pseudomonas syringae pv. syringae. The bacteria can cause blossom blast, bud blight, leaf spot symptoms and so on. When weather favors disease development, the disease could result in reducing yields significantly. In diagnosis, the bacteria isolated from infected scions on King’s B medium could test the hypersensitive reaction in tobacco plant. The bacteria can be further identified as Pseudomonas syringae based on Biolog, 16S rDNA sequence analysis and specific primers. The pathovar syringae of P. syringae can be tested by inoculation of the bacteria on pear, lilac, and bean pod. For avoiding economic loss, 4 emergency agrochemicals were selected for the disease control. Keywords: pear scion, pear blossom blast, Pseudomonas syringae pv. syringae. 28.

(33) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 圖一、罹病梨接穗表面具圓形凹陷壞疽病斑(左箭頭處)，切開後接穗內部組織呈現褐色壞疽斑點(右)。. 29.

(34) 進口梨接穗花枯病. 表一、防檢局公告之梨花枯病緊急防治藥劑。. 30.

(35) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 玉米褪綠斑駁病毒病害流行及傳播模式研究周建銘 1, * 林鳳琪 2 鄧汀欽 1 簡伊萱 1 陳君弢 3 陳怡如 2 蔡錦慧 1 黃秀雯 4 1. 行政院農業委員會農業試驗所植物病理組行政院農業委員會農業試驗所應用動物組 3 行政院農業委員會動植物防疫檢疫局新竹分局 4 行政院農業委員會台南區農業改良場作物環境課 *聯絡作者:周建銘；E-mail:[email protected] Fax:(04)23302803 2. 摘要玉米褪綠斑駁病毒(Maize chlorotic mottle virus, MCMV)可感染玉米造成葉片褪綠及黃化或壞疽病徵，嚴重時造成植株矮化、褐化枯死情形，蒐集田間樣本並將 MCMV 鞘蛋白序列解序後進行親緣性分析，顯示台灣發生的 MCMV 病毒與中國大陸及肯亞的 MCMV 病毒株親緣性達 98%-99%；而本病毒於玉米栽培區如雲林縣、嘉義縣及台南市等地造成大面積危害，玉米產量減少甚至絕收，已成為玉米栽培重要限制因子。由 2014 年至 2015 年田間調查結果顯示，全台皆有本病毒感染玉米植株，分析其流行趨勢發現本病毒於 10 月至翌年 5 月為發生盛期。檢測玉米鮮穗種子帶毒情形，顯示種子有極高機率帶有 MCMV 病毒，此一情況提高種子傳毒風險，經由長出測試實驗也可獲得種子傳毒病株。MCMV 可藉由多種媒介昆蟲傳播，在台灣已知可以玉米薊馬進行傳播，玉米薊馬(Frankliniella williamsi Hood)以成蟲獲毒能力較若蟲佳，需要一定數量薊馬才能有效傳毒。為有效防治玉米 MCMV 病害，應結合田間管理、使用適當的殺蟲劑及選擇耐性品種進行防治。關鍵字: 玉米褪綠斑駁病毒、玉米薊馬、病害流行、種子傳播. 緒言玉米(Zea mays)為國際上重要的糧食作物之一，依據世界農糧組織(Food and Agricultural Organization, FAO)2013 年的統計資料，玉米總產量逾 10 億公噸，為全球最大宗的糧食作物，而台灣的飼料玉米及食用玉米總栽培面積在 1990 年曾高達 81,773 公頃，之後栽培面積逐年下滑，其中飼料玉米栽培面積由 1990 年時 65,560 公頃減少至 2012 年時僅餘 6,612 公頃，食用玉米栽培面積則有 10,743 公 31.

(36) 玉米褪綠斑駁病毒. 頃，近年則因休耕地活化等政策推廣種植玉米等旱作，飼料玉米栽培面積增加至 13,544 公頃，食用玉米栽培面積則為 13,464 公頃，全台各地皆有種植玉米，主要產區為雲林縣、嘉義縣及台南市等地區，依據 2014 年農業統計年報資料，雲林縣主要栽種食用玉米，栽培面積佔全台 43%(5,797 公頃/13,464 公頃)，飼料玉米則有 93%(12,605 公頃/13,544 公頃)集中栽種於嘉義縣及台南市(行政院農業委員會, 2000, 行政院農業委員會, 2015)。台灣玉米全年皆可栽培生長，主要栽培季節集中在春作、秋作及裡作，少部分於夏季種植(謝光照, 2006)。玉米栽培受日照、溫度等氣候因子影響劇烈，秋作及裡作玉米栽種除產量與品質較佳外，病蟲害及天然災害管理也相較於夏作時期容易，但近年來，農民於秋作至翌年春作栽培時常發生大面積葉片黃化褪綠、褐化乾枯情形，田區亦常見植株矮化情形，造成玉米嚴重歉收，一般農民稱此病害為「矮化症」或「瘋欉」，此類病徵為典型病毒病危害，往年國內報告玉米病毒病害僅有玉米矮化嵌紋病毒 B 型系統(Maize dwarf mosaic virus-B, MDMV-B( 或稱甘蔗嵌紋病毒 (Sugarcane mosaic virus, SCMV))(鄧汀欽, 1985)及玉米條紋病毒(Maize stripe virus, MSpV)(趙佳鴻 et al., 1988)，兩種病毒皆會造成玉米植株矮化、葉片嵌紋及黃化等病徵，在病徵外觀上與此新發生病毒病害相似，但經調查鑑定確認此感染玉米的新病毒病為玉米褪綠斑駁病毒(Maize chlorotic mottle virus, MCMV)及其與甘蔗嵌紋病毒複合感染所引起的玉米致死性壞疽病(Maize lethal necrosis, MLN)(Deng et al., 2014)，由於發生面積大且疫情嚴重，從苗期至成株都有感染病毒的情形，本研究針對玉米褪綠斑駁病毒的鑑定、發生、病害流行趨勢及傳播模式進行探討，以期能據此研擬出玉米褪綠斑駁病毒之防治策略。. 玉米褪綠斑駁病毒簡介玉米褪綠斑駁病毒(MCMV)屬於番茄叢矮病毒科(Tombusviridae)玉米褪綠斑駁病毒屬(Machlomovirus)，為一單股正極的 RNA 球形病毒，MCMV 最早是於 1974 年在秘魯的玉米雜交品系 PM-205 發現，其病徵為黃化條斑及壞疽並造成植株死亡(Castillo & Hebert, 1974)，爾後在美洲大陸地區陸續發現 MCMV 感染玉米，其中 1976 年在美國堪薩斯州及內布拉斯加州發現 MCMV 會與玉米矮化嵌紋病毒(MDMV)或小麥條斑嵌紋病毒(WSMV)複合感染造成玉米致死性壞疽(Maize lethal necrosis，MLN)(Niblett & Claflin, 1978, Uyemoto et al., 1980)，之後在 1990 年於美國夏威夷州可愛島(Kauai Island)發生由 MCMV 與 MDMV 或甘蔗嵌紋病毒(SCMV)複合感染造成的玉米致死性壞疽病害(Jensen et al., 1991)；在 2009 年中國大陸雲南省也發生由 MCMV 所引起的玉米致死性壞疽病害(Xie et al., 2011)， 2011 年在非洲肯亞也爆發由 MCMV 與 SCMV 複合感染的玉米致死性壞疽病害造成大面積的玉米植株死亡，並在近年內於東非地區迅速擴展，鄰近國家南蘇丹、衣索比亞、坦尚尼亞、盧安達及剛果民主共和國陸續有新發生紀錄(Wangai et al., 32.

(37) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 2012, Adams et al., 2014, Lukanda et al., 2014, Mahuku et al., 2015b)，顯見其具有高傳播性。. 玉米褪綠斑駁病毒鑑定與核酸親源分析 2014 年春天農民送檢之甜玉米植株樣本有疑似病毒病危害情形，且其甜玉米田區植株出現大面積褐化枯死情形，田間病徵為葉片出現黃化嵌紋病斑，植株矮化抽穗不良，或花軸縮短，果穗結實不稔，產量大幅減少甚至絕收(圖 1)。經以本實驗室製備可檢測甘蔗嵌紋病毒(Sugarcane mosaic virus)之 MDMV-B 多元抗體進行間接法酶聯抗體免疫吸附分析法(indirect ELISA)未測得陽性反應，而以田間罹病葉片汁液機械接種於超甜玉米品種 Honey 236，可造成植株葉片褪綠嵌紋病斑，經系列稀釋接種於超甜玉米品種 Honey 236 後可獲得一純系病毒，另以 Potyvirus 屬簡併式引子對(Pot1:GACTGGATCCATTBTCDATRCACCA/Hrp5: ATGATHGARKCNTGGGG)(Colinet et al., 1994, Pappu et al., 1998)、Potexvirus 屬簡併式引子對(Potex1RC:TCAGTRTTDGCRTCRAARGT/Potex5C: AYCARCAR GCMAARGAYGA) (van der Vlugt & Berendsen, 2002)及 Tenuivirus 屬簡併式引子對(Tenui-DF1:ACACAAAGTCCTGGGTAWAA/ Tenui-DR1: AAGAARAADWKA GDCCGTA)分別進行反轉錄聚合酶鏈鎖反應(RT-PCR)反應，結果僅由 Tenui-DF1/ Tenui-DR1 之 RT-PCR 反應可增幅出與預期大小相近之產物，經選殖後進行定序後比對，可組合成一完整的核苷酸片段，將此核苷酸片段於 GeneBank 上進行 Blast 比對後與玉米褪綠斑駁病毒(Maize chlorotic mottle virus, MCMV)的 Yunnan 3 分離株相對應片段(acc. No. JQ982469)相同度為 99%，利用 GenBank 登錄之 MCMV 分離株 Yunnan 3 之全長度序列設計包含病毒鞘蛋白之引子對(MCMVCPF:TGGGAATTCCAGCCAGATTA /MCMV-CPR: TGAGTTCAGAAACCCTCG TG)進行增幅以獲得全長度鞘蛋白核苷酸序列。其鞘蛋白基因共有 711bp，轉譯後鞘蛋白胺基酸共有 236a.a.，經比對後其鞘蛋白胺基酸序列與 MCMV 分離株 Sichuan 最為相近，相似度達 99% (Deng et al., 2014)。為了解台灣新發生 MCMV 與已發表之其他 MCMV 病毒株全長度序列相似度，抽取 MCMV 的雙股 RNA 後，以 Poly(A) tailing kit 於 3’添加 Poly(A) tail 後以 MCMV-5’RACEFS:CCACAGAC CATGTGGGTTGG 及 MCMV-g3514FA: CCCTT GTTGGACGAGGT 分別與 XhoIoligod(T): CTCGAGTTTTTTTTTTTTTTTTTTV 進行增幅後選殖定序，並將獲得之 MCMV-Yunlin 病毒株核苷酸全長序列(acc. No.KJ782300)與 GenBank 上登錄之 MCMV 全解序病毒株比對，結果顯示 MCMV-Yunlin 病毒株與肯亞病毒株(acc. No. JX286709) 、 Yunnan3 病毒株 (acc. No. JQ982469) 、 Sichuan 病毒株 (acc. No. JQ982470)、Yunnan2 病毒株(acc. No. JQ982468)及 Yunnan 病毒株(acc. No. GU138674)屬於同一個分群，而與 Nebraska 病毒株(acc. No. EU358605)及 Kansas 病毒株(acc. No. NC003627)則為不同分群(Unpublished data)，顯示台灣新發生之 33.

(38) 玉米褪綠斑駁病毒. MCMV 與近年來在非洲及中國發生的 MCMV 親緣關係較為接近。. 台灣玉米褪綠斑駁病毒病害流行發生調查 MCMV在雲林縣、嘉義縣及台南市等玉米主要栽培地區疫情爆發造成大面積危害(圖2)，造成玉米品質下降、產量減少甚至絕收。為瞭解MCMV於台灣危害及擴散情形，自2014年3月至2015年3月，蒐集雲林縣、嘉義縣、台南市、苗栗縣、台中市、彰化縣、南投縣、高雄市、花蓮縣及台東縣各玉米產區之疑似病毒感染玉米樣本，並於雲林縣虎尾鎮、元長鄉及台南市麻豆區設置監測田，利用自製或購自AC Diagnositics的MCMV抗體及自製的SCMV抗體進行ELISA檢測。調查結果顯示在各採集縣市皆有MCMV病株，分析自2014年3月至2015年3月採集田間樣本檢測結果，此病毒於10月至翌年5月為MCMV流行高峰，7月至9月底夏作高溫時期MCMV罹病率明顯下降，10月開始秋作時期MCMV罹病率逐漸上升 (Unpublished data)，結果顯示當季節轉變，MCMV在台灣秋作、裡作及春作農民密集種植玉米時，同時也是發病的高峰；此外台南市玉米監測田自2015年1月開始調查至2015年3月，結果顯示此病毒病害一旦於該區域有初次感染源後，將可迅速造成全區玉米的感染。分析各時期採集玉米病毒感染樣本中，多數為MCMV 單獨感染樣本，MLN感染樣本極少(Unpublished data)。此一結果與近年來在非洲肯亞及衣索比亞發現MCMV多與SCMV複合感染造成MLN爆發危害的情形不同，而與Uyemoto氏等人於1980年在美國內布拉斯加州與堪薩斯州大爆發的MCMV 疫情及在剛果民主共和國的調查結果類似，據Uyemoto氏等人調查結果，116個 MCMV感染樣本中，僅有27個為與WSMV或(及)MDMV-A複合感染造成的MLN 病害，而於剛果民主共和國的20個樣本中全為MCMV單獨感染的玉米樣本，針對部份樣品中僅測得MCMV單獨感染卻具有類似MLN可造成植株死亡的病徵， Uyemoto氏推論可能有其他未知病毒感染，後其經過接種指示植物後，搭配電子顯微鏡及寄主範圍測試確認該未知病毒為MDMV-B病毒株；近年來高通量定序 (High throughput sequencing)發展迅速，儼然成為判斷未知病毒的有利工具，於 2014年在肯亞周邊國家盧安達玉米田，發現類似MLN病害的玉米樣本中，Adams 氏以針對肯亞地區的MCMV及SCMV病毒株所開發的Real-time PCR引子對進行檢測，僅測得MCMV，後經以高通量定序全解序樣本後，發現該區域的SCMV 異於肯亞地區的SCMV，相似度為87%，且因Real-time PCR引子對設計區域岐異度較高，造成無法由Real-time PCR檢出SCMV，而台灣的MCMV病害樣本中也有許多類似MLN病害病徵，但卻未檢出SCMV，是否有不同SCMV病毒株或是其他 Potyvirus參與其中，則有待進一步調查；此外，田間目視所見，已知的MCMV 傳毒媒介昆蟲，玉米薊馬皆維持高密度族群，而SCMV的傳毒媒介-蚜蟲，並不多見，或多於管理較差的田區才可發現蚜蟲高密度族群，該類田區也多可測得 MLN病害，而由台灣不同調查季節的結果也發現，MCMV除流行趨勢有明顯高 34.

(39) 台灣新浮現之重要作物病害及其防治研討會專刊. 低起伏外，夏季MCMV罹病植株多為輕微褪綠黃化或無病徵，冬季MCMV單獨感染植株則常見類似MLN病徵，嚴重黃化且褐化枯死情形，推測其原因可能為冬季低溫環境，玉米生長緩慢且條件適合病毒發展造成病徵擴展迅速成類似 MLN病徵，此一推論仍需後續實驗證實。根據田間觀察結果，MCMV 幾乎可感染所有田間常用商業品種，包括甜玉米、糯玉米、白玉米及硬質玉米，而由實驗室接種結果也得到相同結果，由調查結果顯示硬質玉米罹病率較低且病徵較輕微(Unpublished data)。. 玉米褪綠斑駁病毒傳播模式研究 MCMV 短時間內於東非地區及亞洲地區造成傳播及擴散，係因其具有多種的傳播方式，包括種子傳毒、多種媒介昆蟲傳播、土壤傳播等，以下針對種子傳毒及媒介昆蟲進行說明。. (一)經由種子傳毒根據 Jensen 等人於夏威夷的玉米田區的實驗結果顯示 MCMV 可藉由種子傳毒方式進行遠距離傳播，其種子傳毒率為萬分之四(17/42000 顆種子)(Jensen et al., 1991)，而自 2010 年開始，中國大陸陸續於美國、德國進口之玉米種子中測得 MCMV，其傳毒率分別為 0.33%、0.5%，而於泰國進口玉米種子則可測得其種子帶毒率為 2%，(龔海燕 et al., 2010, 劉洪義 et al., 2011, 雷屈文 et al., 2013)其種子傳毒率遠高於 Jensen 等人的實驗結果，而由 Mahuku 氏等人的研究結果顯示，從 MCMV 病田蒐集之種子，以 RT-PCR 方式檢測，種子帶毒率為 72%(18/25 顆種子)，而由市場上購買的種子，同樣以 RT-PCR 檢測，其種子帶毒率約為 0.6%(12/2610 顆種子)(Mahuku et al., 2015a)，而在台灣筆者針對 MLN 罹病株新鮮玉米穗種子進行 ELISA 檢測，種子 MCMV 帶毒率極高，若將 MCMV 罹病株新鮮玉米穗進行組織轉染測試後，顯示其全穗包含穗軸、種皮及胚皆可測得 MCMV 病毒陽性反應，若將病株新鮮玉米穗脫粒後，以 38℃烘乾、常溫下陰乾一個月及新鮮冷藏等方式處理，其皆仍有一定比率種子帶毒率(Unpublished data)，顯示種子有極高機率帶有 MCMV 病毒，提高種子傳毒風險；取台南 22 號玉米種子進行長出測試，可測得一種子傳毒病株。然而蒐集農民所使用之玉米種子以群體抽樣方式進行 ELISA 檢測，皆未測得 MCMV 陽性反應(Unpublshed data)。. (二)經由媒介昆蟲傳毒 MCMV 可經由多種鞘翅目金花蟲科甲蟲以半持續性方式傳播，包含有 Diabrotica virgifera 、 D. barberi 、 D. undecimpunctata howardi 、 Chaetocnema pulicaria、Systena frontalis、Oulema melanopa 等六種甲蟲(Nault et al., 1978)，而近年來，玉米薊馬(Frankliniella williamsi)也被證實可以半持續性方式傳播，已知 35.