圖一 圖一 圖一
圖一、、、、IL-1β 啟動子基因多型性檢測洋菜膠體電泳照片。Lane M 為 pGEM4 質體以限制酶 HinfI 切割的結果，作為片段大小標記。其餘 lane 為包含該多型性之 PCR 放大片段，以 AvaI 限制酶切割的結果。含有 此多型性之對偶基因會由 305 bp 的片段被切割成 190 bp 和 115 bp 兩 片段，藉此判定其基因型。各樣品的多型性基因型標示於各 lane 的上 方。
圖二 圖二 圖二
圖二、同步定量 PCR 分析白血球 IL-1β/β-actin mRNA 的相對表現量。
橫軸為 IL-1β 的基因上游的啟動子-511 位點多型性基因型。
IL-1 beta / beta-actin mRNA
圖三 圖三 圖三
圖三、、、、IL-8 啟動子基因多型性檢測洋菜膠體電泳照片。Lane M 為 pGEM4 質體以限制酶 HinfI 切割的結果，作為片段大小標記。其餘 lane 為包含該多型性之 PCR 放大片段，以 MfeI 限制酶切割的結果。含有 此多型性之對偶基因會由 549 bp 的片段被切割成 390 bp 和 159 bp 兩 片段，藉此判定其基因型。各樣品的多型性基因型標示於各 lane 的上 方。
圖四 圖四 圖四
圖四、同步定量 PCR 分析白血球 IL-8/β-actin mRNA 的相對表現量。
橫軸為不同的 IL-8 基因上游-251 的啟動子多型性基因型。
IL-8 / beta-actin mRNA
圖五 圖五 圖五
圖五、、、IL-6 啟動子基因多型性檢測洋菜膠體電泳照片。Lane 為、 pGEM4 質體以限制酶 HinfI 切割的結果，作為片段大小標記。其餘 lane 為包含該多型性之 PCR 放大片段，以 NlaIII 限制酶切割的結果。含 有此多型性之對偶基因會由 167 bp 的片段被切割成 122 bp 和 45 bp 兩片段，藉此判定其基因型。各樣品的多型性基因型標示於各 lane 的上方。
圖六 圖六 圖六
圖六、、、RT-PCR 分析 PD 患者淋巴細胞株 ND0519 經 LPS 誘導後 TNF-α 、 mRNA 表現量。圖為三個時間(2 h、6 h 和 24 h)和六種不同濃度 LPS 處理(0、0.1、1、10、100 和 1000 ng/ml)的 RT-PCR 結果，下方的 β-actin 做為內生性控制組。
Time LPS (ng/ml)
圖七 圖七 圖七
圖七、RT-PCR 分析 PD 患者淋巴細胞株 ND1830 經 LPS 誘導後 TNF-α mRNA 表現量。圖為三個時間(2 h、6 h 和 24 h)和六種不同濃度 LPS 處理(0、0.1、1、10、100 和 1000 ng/ml)的 RT-PCR 結果，下方的 β-actin 做為內生性控制組。
圖八圖八
圖八圖八、、、同步定量 PCR 分析 PD 患者淋巴細胞株經 LPS 誘導後其 TNF-α 、 mRNA 的表現量。ND0519( ■ )和 ND1830( ● )分別以三個時間(2 h、6 h 和 24 h)和六種不同濃度 LPS 處理(0、0.1、1、10、100 和 1000 ng/ml)，
再進行同步定量 PCR 分析 TNF-α/β-actin mRNA 的相對表現量。
圖九 圖九 圖九
圖九、、、、男性 PD 患者(ND1298)與控制組(ND1908)淋巴細胞株經 LPS 誘導後各種 cytokines 表現量的差異。－LPS：表示未以 LPS 處理，
＋LPS：以 LPS 100 ng/ml 處理 6 小時。(A) Cytokine antibody array 表 現量，POS：為正控制組，NEG：為負控制組。(B) Cytokine antibody
A.
圖十 圖十 圖十
圖十、、、、女性 PD 患者(ND1296)與控制組(ND2105)淋巴細胞株經 LPS 誘導後各種 cytokines 表現量的差異。－LPS：表示未以 LPS 處理，
＋LPS：以 LPS 100 ng/ml 處理 6 小時。(A) Cytokine antibody array 表 現量，POS：為正控制組，NEG：為負控制組。(B) Cytokine antibody
A.
表一表一
表一表一、、、、IL-1β、IL-6 和 IL-8 基因多型性之檢測方法
多型性 引子對 煉合溫度
MgCl2
限制酶 檢測(bp) IL-1β
C-511T
F:TGGCATTGATCTGGTTCATC R:CTTTAGGAATCTTCCCACTT
54℃
1.0 mM
AvaI: CYCGRG
(305 / 191, 114) IL-6
G-174C
F:TGACTTCAGCTTTACTCTTGT R:CTGATTGGAAACCTTATTAAG
55℃
1.5 mM
NlaIII: CATG
(167 / 122, 45) IL-8
T-251A
F:CTTATCTTCACCATCATGATAG
R:GGCTGCCAAGAGAGCCACGGCCCAGC 57℃
2.0 mM
MfeI: CAATTG (549 / 390, 159)
表二表二
表二表二、、、、RT-PCR 及 Real-time PCR 的引子對及反應條件
基因片段 引子對 增幅片段大小
(bp) 煉合溫度(℃) MgCl2 (mM) 分析目的 TNF-α
cDNA F:ACAAGCCTGTAGCCCATGTT
R:AAAGTAGACCTGCCCAGACT 427 52 2.0 RT-PCR
cDNA F:GCCCATGTTGTAGCAAACCC
R:GTTCAGCCACTGGAGCTGC 50 依據廠商所提供的標準化步驟操作 Real-time PCR IL-1β
cDNA F: GCTGATGGCCCTAAACAGATG
R: GCAGAGGTCCAGGTCCTGG 51 依據廠商所提供的標準化步驟操作 Real-time PCR IL-8
cDNA F:TTGGCAGCCTTCCTGATTTCT
R:CTTGGCAAACATGCACCTTCA 53 依據廠商所提供的標準化步驟操作 Real-time PCR β-Actin
cDNA F: GGTCATCACCATTGGCAATG
R: TCCTTCTGCATCCTGTCGG 210 60 1.5 RT-PCR 內生
性控制組 cDNA F: GGTCATCACCATTGGCAATG
R: TGGAAGAGTGCCTCAGGGC 50 依據廠商所提供的標準化步驟操作 Real-time PCR 內生性控制組
表三表三
表三表三、、、、淋巴細胞株個別資料
TNF-α IL-1β IL-8
基因型 淋巴
細胞株編號 T-1031C C-863A C-511T T-251A
年齡 性別 身份
ND1296 TT CC CT AT 60 女 PD ND1298 CC AA TT TT 61 男 PD ND2105 CC AA TT AT 63 女 NC ND1908 TT CC TT AT 62 男 NC ND0519 TT CC CC AT 57 女 PD ND1830 CC AA CC TT 57 男 PD
PD 為 Parkinson's disease 患者，NC 為未患 PD 疾病者。
表中 TNF-α T-1031C 與 C-863A 基因多型性是由馮宜欣所鑑定的結果。(馮，2006)
表四表四
表四表四、、、IL-1β -511 C>T 多型性依年齡分析的基因型分佈及等位基因頻率 、
PD 患者族群 控制組
多型性 年齡
No. (%) No. (%)
Odds ratioψ (95% CI)
P
基因型 All N=391 N=213
CC 117 (29.9) 58 (27.2) 1.09 (0.73-1.61) 0.678
CT 199 (50.9) 109 (51.2) 1.00
TT 75 (19.2) 46 (21.6) 0.89 (0.58-1.39) 0.610 等位基因
C 433 (55.4) 225 (52.8)
T 349 (44.6) 201 (47.2)
基因型 >50 years N=294 N=179
CC 84 (28.6) 48 (26.8) 1.09 (0.70-1.69) 0.716
CT 150 (51.0) 93 (52.0) 1.00
TT 60 (20.4) 38 (21.2) 0.98 (0.61-1.59) 0.931 等位基因
C 318 (54.1) 189 (52.8)
T 270 (45.9) 169 (47.2)
基因型 >60 years N=214 N=108
CC 55 (25.7) 29 (26.9) 0.90 (0.52-1.57) 0.706
CT 116 (54.2) 55 (50.9) 1.00
TT 43 (20.1) 24 (22.2) 0.85 (0.47-1.55) 0.590 等位基因
C 226 (52.8) 113 (52.3)
T 202 (47.2) 103 (47.7)
基因型 >70 years N=96 N=55
CC 26 (27.1) 18 (32.7) 0.79 (0.36-1.71) 0.540
CT 46 (47.9) 25 (45.5) 1.00
TT 24 (25.0) 12 (21.8) 0.54 (0.21-1.39) 0.202 等位基因
C 98 (51.0) 61 (55.5)
T 94 (49.0) 49 (44.5)
ψ基因型或對偶基因頻率分佈有顯著差異之多型性，進行相對危險性檢測(odds
ratio 分析)是以族群中較常見的對偶基因作為比較的基礎，分析不同基因型的同
表五表五
表五表五、、、IL-1β -511 C>T 多型性依性別分析的基因型分佈及等位基因頻率 、
PD 患者族群 控制組
多型性 性別
No. (%) No. (%)
Odds ratioψ (95% CI)
P
基因型 女性 N=183 N=87
CC 63 (34.4) 19 (21.8) 1.81 (0.98-3.41) 0.062
CT 90 (49.2) 49 (56.4) 1.00
TT 30 (16.4) 19 (21.8) 0.86 (0.44-1.70) 0.660 等位基因
C 216 (59.0) 87 (50.0)
T 150 (41.0) 87 (50.0)
基因型 男性 N=208 N=126
CC 54 (26.0) 39 (31.0) 0.76 (0.45-1.28) 0.305
CT 109 (52.4) 60 (47.6) 1.00
TT 45 (21.6) 27 (21.4) 0.92 (0.52-1.64) 0.768 等位基因
C 217 (52.2) 138 (54.8)
T 199 (47.8) 114 (45.2)
ψ Odds ratio 的計算是以最常見的基因型 CT 作為比較的標準。
表六 表六 表六
表六、、、、IL-8 -251 T>A 多型性依年齡分析的基因型分佈及等位基因頻率
PD 患者族群 控制組
多型性 年齡
No. (%) No. (%)
Odds ratioψ (95% CI)
P
基因型 All N=317 N=136
TT 128 (40.4) 61 (44.9) 0.82 (0.54-1.27) 0.390
TA 147 (46.4) 58 (42.6) 1.00
AA 42 (13.2) 17 (12.5) 0.97 (0.52-1.89) 0.938 等位基因
T 403 (63.6) 180 (66.2)
A 231 (36.4) 92 (33.8)
基因型 >50 years N=239 N=122
TT 99 (41.4) 56 (45.9) 0.84 (0.52-1.35) 0.472
TA 105 (43.9) 50 (41.0) 1.00
AA 35 (14.7) 16 (13.1) 1.04 (0.53-2.10) 0.906 等位基因
T 303 (63.4) 162 (66.4)
A 175 (36.6) 82 (33.6)
基因型 >60 years N=175 N=71
TT 71 (40.6) 31 (43.7) 0.89 (0.49-1.61) 0.693
TA 80 (45.7) 31 (43.7) 1.00
AA 24 (13.7) 9 (12.7) 1.03 (0.44-2.57) 0.941 等位基因
T 222 (63.4) 93 (65.5)
A 128 (36.6) 49 (34.5)
基因型 >70 years N=78 N=35
TT 31 (39.7) 15 (42.9) 0.85 (0.36-1.99) 0.703
TA 39 (50.0) 16 (45.7) 1.00
AA 8 (10.3) 4 (11.4) 0.82 (0.22-3.42) 0.771 等位基因
T 101 (64.7) 46 (65.7)
A 55 (35.3) 24 (34.3)
ψOdds ratios的計算是以PD患者出現頻率較高基因型TA作為比較的標準。
表七表七
表七表七、、、IL-8 -251 T>A 多型性依性別分析的基因型分佈及等位基因頻率 、
PD 患者族群 控制組
多型性 性別
No. (%) No. (%)
Odds ratioψ (95% CI)
P
基因型 女性 N=143 N=54
TT 64 (44.7) 22 (40.7) 1.19 (0.61-2.35) 0.608
TA 61 (42.7) 25 (46.3) 1.00
AA 18 (12.6) 7 (13.0) 1.05 (0.40-2.99) 0.917 等位基因
T 189 (66.1) 69 (63.9)
A 97 (33.9) 39 (36.1)
基因型 男性 N=174 N=82
TT 64 (36.8) 39 (47.6) 0.63 (0.36-1.10) 0.109
AT 86 (49.4) 33 (40.2) 1.00
AA 24 (13.8) 10 (12.2) 0.92 (0.41-2.21) 0.848 等位基因
T 214 (61.5) 111 (67.7)
A 134 (38.5) 53 (32.3)
ψOdds ratios的計算是以頻率較高基因型TA作為比較的標準。
表八表八
表八表八、、、IL-6 -174 G>C 多型性基因型分佈及等位基因頻率 、
PD 患者族群 控制組 多型性
No. (%) No. (%)
基因型 N=366 N=214
GG 365 (99.07) 214 (100)
GC 1 (0.03) 0 (0)
CC 0 (0) 0 (0)
等位基因
G 366 (99.9) 214 (100)
C 1 (0.01) 0 (0)
