1042 生科二 A 組別 姓名

1042 生科二 A 組別 姓名 ^1050323

海藻保健食品中的色素分析–高效液相層析法

請回答以下問題 :

一、1. 樣品 A、B 是 圖譜(葉綠素標準品、市售綠藻錠，二擇一回答) 2. 第 1 根 peak 是 的沖提結果(葉綠素標準品、acetone，二擇一回答) 3. 第 2 根 peak 是 的沖提結果(葉綠素標準品、acetone，二擇一回答) 二、樣品 C、D 是 圖譜(葉綠素標準品、市售綠藻錠，二擇一回答) 三、請計算樣品 B-D 之葉綠素濃度

{請依照樣品 A 所提供的標準濃度來推算 B-D 之濃度，此為比例法，

適用於標準品珍貴不易得}。

四、請敘述樣品 A 和樣品 C 圖譜為何不一樣 ? 若要知道樣品 C 其他 peak 是甚麼成分，

應如何處理 ?

圖 B 圖 A

圖 C 圖 D

樣品 RT (min) AREA (mV*sec) Height mV 濃度 (mg/L)

A 2.25 262.37 42.12 1

B 2.38 191.60 27.08

C 2.38 136.10 15.58

D 2.25 577.65 89.00

實驗記錄

1. 各種不同的葉綠素

2. 數據登記

葉綠素 a 結構

葉綠素 a 葉綠素 b 葉綠素 c1 葉綠素 c2 葉綠素 d 葉綠素 f 分子式 C55H72O5N4Mg C55H70O6N4Mg C35H30O5N4Mg C35H28O5N4Mg C54H70O6N4Mg C55H70O6N4Mg

C2 團 -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CHO

C3 團 -CH=CH2 -CH=CH2 -CH=CH2 -CH=CH2 -CHO -CH=CH2

C7 團 -CH3 -CHO -CH3 -CH3 -CH3 -CH3

C8 團 -CH2CH3 -CH2CH3 -CH2CH3 -CH=CH2 -CH2CH3 -CH2CH3

C17 團 -CH2CH2COO-Phytyl -CH2CH2COO-Phytyl -CH=CHCOOH -CH=CHCOOH -CH2CH2COO-Phytyl -CH2CH2COO-Phytyl

C17-C18 鍵 單鍵 單鍵 雙鍵 雙鍵 單鍵 單鍵

Occurrence 普遍存在 陸生植物與綠藻、輪藻等 多種藻類 多種藻類 一些紅藻 某些藍藻

樣品 RT (min) AREA (mV*sec) Height mV

濃度

(mg/L) 注射分析體積 (ul)

1 葉綠素 a 標準品 1 號 100

2 葉綠素 a 標準品 2 號 100

3 葉綠素 a 標準品 3 號 100

4 葉綠素 a 標準品 4 號 100

5 葉綠素 a 標準品 5 號 100

請利用 Excel 計算編號 1-5 號標準品之線性迴歸公式 ， R

= 此為檢量線法，適用於標準品易採購，準確性比上述比例法高出許多。

4 樣品

名稱 :

利用公式計 算濃度

100

樣品前處理 [全程保持低溫]

第 1~8 組 1 顆綠藻錠

秤重 克 研磨後，取 0.1 克 置於試管中 + 5 ml acetone 震盪 5 分鐘

3000rpm 離心 5 分 鐘，

取上清液， 以 0.22μm 過濾膜進 行過濾，濾液置於 Facon、 貼標籤

取上述過濾液 50 μl + 950 μl acetone，置於 vial 內

[用油性筆於蓋子側邊標示組別]

HPLC 上機 移動相:

1. 溶劑: 100% 甲醇 2. 流速: 1 ml/min 3. 壓力:

~800 psi 固定相:

1. Column:

2. 長度、內徑: 100x4.6 mm 3. 粒徑: 120Ả pore size

第 9~16 組

校園採集樹葉(名稱/拍照) 第 17~24 組

蔬菜(名稱/拍照)

研磨後，取 1 克 如上述實驗流程

1. 請將 Facon 和 Vial 插放至講桌冰桶內 2. 請第 組負責幫全班上機

3. 請第 組負責幫全班進行數據積分運算、數據會掛網

三、實驗結果 請計算此市售樣品

之葉綠素 a 含量 mg/g (意即每克藻粉或樹葉、蔬菜含有多少毫克葉 綠素 a)

回收率 = |實際產量−理論產量|

理論產量 × 100 %

綠寶公司 總葉綠素標示含量 : 26.5 mg/g

請討論回收率不是百分之百的可能原因 ?

請詳列計算過程 [使用方程式編輯器]

四、結報注意事項

1. 結報要做封面，並標示 Email (一位代表)、班級、姓名、組別。

2. 請於 3/31 前將結報電子檔分別寄給各班學藝 ，收齊後再請學藝將檔案用 google 雲端硬碟分享給我，勿單獨繳交給我。

我的 Email 0404judylai@gmail.com 結報檔案名稱 : 01_(輸入你的姓名)_食科二 A_HPLC 1050328

3. Excel 圖形須標示 XY 軸標題和單位、檢量線 Y= aX+b ______________________________ R

___________________

4. 須附所有原始數據 (公布在網站上)。

5. 要拍實驗過程相片

1042 食科二 A HPLC 資料 ^1050328

樣品 RT (min) AREA (mV*sec) Height mV 濃度 (mg/L) 注射分析體積

(ul)

1 葉綠素a 標準品 1 號 1 100

2 葉綠素a 標準品 2 號 2 100

3 葉綠素a 標準品 3 號 5 100

4 葉綠素a 標準品 4 號 10 100

5 葉綠素a 標準品 5 號 20 100

請利用 Excel 計算編號 1-3 號標準品之線性迴歸公式 ， R²=

4 市售樣品

品名 :

總葉綠素標示含量 : mg/g

利用公式計 算濃度

樣品 RT (min) AREA (mV*sec) Height mV 濃度 (mg/L) 注射分析體積

(ul)

1 食二B 第 1 組樣品 100

食二B 第 2 組樣品 100

食二B 第 3 組樣品 100

食二B 第 4 組樣品 100

食二B 第 5 組樣品 100

食二B 第 6 組樣品 100

食二B 第 7 組樣品 100

食二B 第 8 組樣品 100

食二B 第 9 組樣品 100

食二B 第 10 組樣品 100

食二B 第 11 組樣品 100

食二B 第 12 組樣品 100

食二B 第 13 組樣品 100

食二B 第 14 組樣品 100

食二B 第 15 組樣品 100

食二B 第 16 組樣品 100

食二B 第 17 組樣品 100

食二B 第 18 組樣品 100

食二B 第 19 組樣品 100

食二B 第 20 組樣品 100

食二B 第 21 組樣品 100

食二B 第 22 組樣品 100

食二B 第 23 組樣品 100

食二B 第 24 組樣品 100

1042 食科二 B HPLC 資料 ^1050328

樣品 RT (min) AREA (mV*sec) Height mV 濃度 (mg/L) 注射分析體積

(ul)

1 葉綠素a 標準品 1 號 2.1 104.93 8.85 1 100

2 葉綠素a 標準品 2 號 2.2 236.13 38.56 2 100

3 葉綠素a 標準品 3 號 2.2 585.20 79.58 5 100

4 葉綠素a 標準品 4 號 2.2 1250.57 189.46 10 100

5 葉綠素a 標準品 5 號 2.2 2143.19 244.07 20 100

請利用 Excel 計算編號 1-3 號標準品之線性迴歸公式 ， R²=

4 市售樣品

品名 :

總葉綠素標示含量 : mg/g

利用公式計 算濃度

樣品 RT (min) AREA (mV*sec) Height mV 濃度 (mg/L) 注射分析體積

(ul)

1 食二B 第 1 組樣品 2.12 1730.13 154.83 15.57 100

食二B 第 2 組樣品 2.08 858.39 79.49 7.55 100

食二B 第 3 組樣品 2.08 952.73 79.8 8.4219 100

食二B 第 4 組樣品 2.07 1148.60 92.24 10.23 100

食二B 第 5 組樣品 2.08 1483.78 127.69 13.34 100

食二B 第 6 組樣品 2.08 993.01 75.74 8.975 100

食二B 第 7 組樣品 2.08 945.18 90.24 8.35 100

食二B 第 8 組樣品 2.07 1080.95 77.27 9.61 100

食二B 第 9 組樣品 2.08 1698.70 152.78 15.27 100

食二B 第 10 組樣品 2.10 1043.62 87.96 9.2639 100

食二B 第 11 組樣品 2.07 941.97 84.04 100

食二B 第 12 組樣品 2.08 986.41 93.54 8.725 100

食二B 第 13 組樣品 2.10 1160.10 102.15 10.281 100

食二B 第 14 組樣品 2.07 827.99 68.30 7.27 100

食二B 第 15 組樣品 2.07 933.52 86.56 8.244 100

食二B 第 16 組樣品 2.08 1128.31 103.71 7.85 100

食二B 第 17 組樣品 2.12 898.79 102.86 7.922 100

食二B 第 18 組樣品 2.10 1064.63 101.07 9.088 100

食二B 第 19 組樣品 2.15 1399.40 182.17 12.5999 100

食二B 第 20 組樣品 2.13 1259.47 182.71 11.26 100

食二B 第 21 組樣品 2.08 2225.04 197.47 20.207 100

食二B 第 22 組樣品 100

食二B 第 23 組樣品 2.10 1342.75 123.86 12.03 100

食二B 第 24 組樣品 2.10 1060.60 94.15 8.4219 100

1042 生科二 HPLC 資料 ^1050323

樣品 RT (min) AREA (mV*sec) Height mV 濃度 (mg/L) 注射分析體積

(ul)

1 葉綠素a 標準品 1 號 1 100

2 葉綠素a 標準品 2 號 2.1500 153.7381 19.3832 2 100

3 葉綠素a 標準品 3 號 2.1667 379.9694 46.4417 5 100

4 葉綠素a 標準品 4 號 2.1667 904.5964 123.4833 10 100

5 葉綠素a 標準品 5 號 2.1667 1462.5988 180.7436 20 100

請利用 Excel 計算編號 1-3 號標準品之線性迴歸公式 ， R²=

4 市售樣品

品名 :

總葉綠素標示含量 : mg/g

利用公式計 算濃度

樣品 RT (min) AREA (mV*sec) Height mV 濃度 (mg/L) 注射分析體積

(ul)

1 食二B 第 1 組樣品 2.1000 915.4948 76.6957 100

食二B 第 2 組樣品 2.1000 1179.0532 100.1814 100

食二B 第 3 組樣品 2.1000 980.4417 82.1088 100

食二B 第 4 組樣品 2.1167 967.7652 77.9663 100

食二B 第 5 組樣品 2.1167 811.6157 64.6747 100

食二B 第 6 組樣品 2.1000 934.1578 75.0213 100

食二B 第 7 組樣品 2.1167 810.4813 65.2869 100

食二B 第 8 組樣品 2.1167 769.7164 69.2973 100

食二B 第 9 組樣品 2.1167 905.7074 73.2524 100

食二B 第 10 組樣品 2.1167 964.7946 78.4863 100

食二B 第 11 組樣品 2.1333 972.2763 78.6848 100

食二B 第 12 組樣品 2.1333 1151.1417 90.2665 100

食二B 第 13 組樣品 2.1000 886.6268 71.8091 100

食二B 第 14 組樣品 2.1333 992.6488 80.4322 100

食二B 第 15 組樣品 2.1127 908.0240 74.5870 100

食二B 第 16 組樣品 2.1167 869.6756 69.1241 100

食二B 第 17 組樣品 2.1333 832.9215 75.4892 100

食二B 第 18 組樣品 2.1167 952.8065 77.0499 100

食二B 第 19 組樣品 2.1167 966.4605 76.9925 100

食二B 第 20 組樣品 2.1333 753.2341 59.5560 100

食二B 第 21 組樣品 2.1000 986.8837 81.5372 100

食二B 第 22 組樣品 2.0667 897.7014 73.9127 100

食二B 第 23 組樣品 2.0500 981.9355 80.2422 100

食二B 第 24 組樣品 100