附錄一 身體健康調查表
本表旨在幫助您瞭解自身健康情況，並協助測驗人員判斷實驗前您是 否需要進一步的健康檢查；請據實回答，過去一年內，醫師是否告訴您有 下列狀況，請於空格內打(ˇ)：
編 號： 受試者：
聯絡電話： 填寫日期： 年 月 日
病 症 有 無 不確定
1 高血壓 2 心臟病 3 糖尿病 4 支氣管炎 5 貧血 6 心律不整 7 藥物過敏
8 緊張、情緒或心理異常 9 氣喘
10 很快站起來時，會頭暈或輕微痛 11 暈倒或失去知覺
12 經常性胃痛
13 運動或跑步後，極端疲憊得難恢復 14 您認為您現在的身體健康狀況如何？
□極佳 □尚可 □不知道 □稍差 □極差 15 過去半年間是否有過其他病症發生？
請說明：
受試者簽名：
附錄二 每日飲食調查表
姓名： 填寫日期： 年 月 日
進 食 時 間 時 分
菜 餚 名 稱 主 要 材 料 烹 調 方 式 重量或份量 備 註
附錄三 受試者同意書
研究單位：國立臺灣師範大學 體育系碩士班二年
研究計劃名稱：增補複方炙甘草湯對單次衰竭運動後血液脂質與氧化指標的影響 研究者：張嘉珍 聯絡電話：0927-232552 指導教授：謝伸裕
受試者姓名： 性別： □男 □女 年齡： 歲 出生年月日： 年 月 日 聯絡電話：
通訊地址：
緊急聯絡人： 緊急聯絡電話：
一、研究目的：
中藥複方炙甘草湯自古以來為中醫古典名方，主要的功能是促進心血管系統 的運作，在臨床上則作為治療之用。因此本研究將「複方炙甘草湯」藉由日常生 活的營養增補，觀察對人體心血管系統的作用，以及在衰竭運動後氧自由基對身 體產生的變化，並透過血液的分析來判斷。
二、研究流程：
第 1 天 測量身高、體重、體脂率、
‧V
O2max (漸增負荷運動測試)
第 3 天 安靜時採集橈靜脈血
第 3～30 天 每天 1 次複方炙甘草湯
第 31 天 運動前採集橈靜脈血 85％V‧
O2max 至衰竭 (衰竭運動) 運動後採集橈靜脈血
受試者編號：
三、實驗須知：
1． 實驗期間禁止飲用咖啡、茶、可樂等含咖啡因之刺激性食品或營養品，
如肌酸、維他命 A、C、E 等。
2． 實驗期間因感冒服用藥物，須告知實驗者，以掌握受試者身體狀況。
3． 實施運動測試時，須穿著運動服裝。
4． 運動測試前 48 小時，勿從事激烈運動。
四、血液檢測項目：
1． 抗氧化酶的活性：
①. 過氧化氫酶 ( catalase, CAT )
①. 超氧離子歧化酶 ( superoxide dismutase, SOD ) 2． 血液脂質
①. 低密度脂蛋白
①. 高密度脂蛋白
①. 氧化態低密度脂蛋白 3． 乳酸
五、預期效果：
1．服用「複方炙甘草湯」可以降低血脂，有助於促進心血管系統。
2．透過「20 天複方炙甘草湯」的增補，可以降低運動引發的氧化壓力，並 能有效的提昇抗氧化防禦系統。
六、參加本研究計畫受試者個人權益將受到保護：
1. 試驗所得資料可因學術性需要而發表，但受試者之隱私（如：姓名、照 片、年齡…等）將予絕對保密。
2. 受試者本人願意承擔實驗過程中的任何風險。
本人已經詳閱下列各項資料，有關本試驗計畫之疑問業經計劃主持人詳細予 以解釋，本人了解在試驗期間本人有權隨時退出試驗，本人同意接受為本人體試 驗之自願受試者！
研究者簽名：
自願受試者簽名： 日期： 年 月 日
（或法定代理人）
見證人簽名： 日期： 年 月 日
與受試者關係：
附錄四 每日身體活動記錄表
姓名： 填寫日期： 年 月 日
0-15 分 16-30 分 31-45 分 46-60 分 晚上 12 點
早上 1 點 早上 2 點 早上 3 點 早上 4 點 早上 5 點 早上 6 點 早上 7 點 早上 8 點 早上 9 點 早上 10 點 早上 11 點 中午 12 點 下午 1 點 下午 2 點 下午 3 點 下午 4 點 下午 5 點 下午 6 點 晚上 7 點 晚上 8 點 晚上 9 點 晚上 10 點 晚上 11 點
附錄四 每日身體活動記錄表(續) 一、身體活動記錄說明：
1．請參考下面的編碼表﹐回憶記錄您一天的活動﹐將你每十五分鐘的身體活動種 類代表號碼填入每一格中。
2．例如：早上 8:00 至 9:00 您在上課﹐則在 8:00 至 9:00 所有的格子中填入如下 表：
早上 7 點
早上 8 點 2 2 2 2
早上 9 點 扯鈴
3．請把每一格子填滿﹐如果編碼表沒有包括您的活動﹐請將您進行的活動名稱寫 入格子中﹐例如上表扯鈴。
編碼 身體活動
1
睡覺
：或躺在床上休息2
坐著
：吃東西、聽、寫、讀、看電視﹑打電腦﹑打電動玩具或看 電影等類似活動。3
站著；輕度活動：
洗東西、刮鬍子、梳頭髮、煮東西(上廁所超 過 15 分)等類似活動。4
慢走（少於 3.2 公里/小時）
：開車、騎車、穿衣服、沐浴、唱 卡拉 ok 等類似活動。5
輕度勞力工作
：家中雜務、如打掃、擦洗窗戶；繪畫、招待、逛 街、﹑盪鞦韆﹑溜滑梯﹑走路在 3.2-6.4 公里/小時等類似活動。6
輕度運動及休閒活動
：打棒球、壘球、高爾夫球、排球、保齡 球、桌球、射箭、划船、扯鈴﹑跳繩﹑爬竿﹑吊單槓﹑騎腳踏車（少 於 9.6 公里/小時）等類似活動。7
中度勞力工作
：木工、耙草、割草、裝載和卸貨、砍木材、修繕 房子等類似活動。8
中度運動及休閒活動
：騎自行車在 14.4 公里/小時以上、舞蹈、滑水、羽毛球、體操、跆拳道、柔道、棒球投手、騎腳踏車(競賽 式)、游泳、網球、躲避球﹑籃球、騎馬、健身術、走路在 6.4 公里 /小時以上等類似活動。
9
高強度勞力工作、運動或休閒活動
：跑步在 8.0 公里/小時以 上、手球、跆拳道、柔道、羽毛球、網球、游泳、健行、爬山、橄 欖球、籃球、足球、背負重物、有氧舞蹈等類似活動。附錄四 每日身體活動記錄表(續) 二、能量消耗之計算公式：
身體活動記錄表共 96 格，每格為 15 分鐘。問卷之參考編碼共 9 個，
代表能量消耗之高低。編碼 1 –9 分別乘以 0.26、0.38、0.57、0.69、0.84、
1.2、1.4、1.5、2.0，所得數據為受試者每公斤體重每 15 分鐘所消耗之能
量 ( kcal/kg/15 min ) (呂昌明、林旭龍、黃奕清、李明憲、王淑芳，2000)。
附錄五 血液生化分析 一、抗氧化酶活性的分析
(一)過氧化氫酶 ( catalase, CAT )
以 catalase assay kit ( Cayman, USA ) 進行檢測，步驟簡述如下：
1． 製備不同甲醛濃度，以製作甲醛標準曲線
4.25 mM 的甲醛 ( μl)
稀釋的 sample buffer ( μl)
最終濃度 ( μM)
Standard A 0 1000 0
Standard B 10 990 5
Standard C 30 970 15
Standard D 60 940 30
Standard E 90 910 45
Standard F 120 880 60
Standard G 150 850 75
2． 紅血球溶胞液的樣本使用已稀釋的 sample buffer 稀釋 500 倍 (須 於稀釋後 30 分鐘內測量完畢)。
3． 在所有測量的 well 中加入 100 μ l 的 assay buffer ( 100mM 的磷酸 鉀，pH = 7.0 ) 與 30 μl的甲醇。
4． 在 control well 中加入 20 μl的 catalase ( control )。
5． 在 standard well 中分別加入 20 μl之不同濃度的甲醛 ( Standard A - Standard G )。
6． 在 sample well 中分別加入 20 μl之稀釋的樣本。
7． 在所有測量的 well 中加入 2 0 μl濃度為 8.82 M 的過氧化氫。
8． 於室溫下，將 plate 置於振盪器 ( Digisystem, rotaor DSR 2100V, Taiwan ) 上振盪 20 分鐘。
9． 在所有測量的 well 中分別加入 3 0 μl 的 10 M KOH 與呈色劑
( purpald ) 後，在室溫下放置於振盪器上反應 10 分鐘。
10．在所有測量的 well 中加入 1 0 μl的 0.5 M 的磷酸鉀，於振盪器上反 應 5 分鐘。
11．將 ELISA reader ( BioTek, μ Quant, U.S.A. ) 的波長設定為 540 nm，
測量吸光值並繪製出甲醛之標準曲線。
12．以甲醛的濃度作為橫座標，吸光值為縱座標，繪製出直線方程式。
13．將樣本測量的吸光值帶入直線方程式換算為 CAT 的活性，計算公 式如下：
[(樣本吸光值 ﹣y 截距)/斜率 ×
ml ml 02 . 0
17 .
0
] / 20 min × 稀釋倍數
(二)過氧化物歧化酶 ( SOD )
以 superoxide dismutase assay kit （Cayman, U.S.A.）進行檢測，步驟 簡述如下：
1． 製備不同濃度的 SOD，以製作標準曲線。
SOD stock (
μ
l) Sample Buffer(μ
l) Final SOD Activity (U/ml)Standard A 0 1000 0
Standard B 20 980 0.025
Standard C 40 960 0.050
Standard D 80 920 0.100
Standard E 120 880 0.150
Standard F 160 840 0.200
Standard G 200 800 0.250
2． 在所有測量的 well 中加入 200 μl di l ut e d r a dical derector。
3． 在 standard well 中加入 1 0 μl 不同濃度的 SOD ( standard A - G )。
4． Sample well 中加 1 0 μl 的紅血球溶胞液之萃取液
5． 快速地在所有測量的 well 中加入 20 μl di l ut e d xa nt hi ne oxi da s e 。 6． 放置在 ELISA reader ( BIO-RAD, model 680, Canada ) 內震盪 20 分
鐘後，以波長 450 nm 下測量吸光值，再與 standard 進行比對換算，
以計算正確數值。
二、血紅素分析
1． 在所有測量的分光比色管內加入 1000 μ l的 hemoglobin reagent ( Instruchemie, Netherlands)。
2． 在 blank 的分光比色管中加入 2 μ l的 ddH
2O。
3． 在 standard 的 分 光 比 色 管 中 加 入 2 μ l濃 度 為 10.3mM 的 hemoglobin standard ( Instruchemie, Netherlands)。
4． 在 sample 的分光比色管中，分別加入 2 μ l的紅血球溶胞液。
5． 將分光比色計 ( Hitachi U-2000, Japan ) 的波長設定為 540 nm。
6． 先將 blank 置入分光比色計內歸零。
7． 分別置入 standard 與 sample 測量吸光值。
8． Hemoglobin 濃度換算：
sample 的吸光值/standard 的吸光值 × 10.3 ( mM )或 sample 的吸光值 × 36.8 ( g/dl )
三、脂質過氧化物分析—MDA 分析流程
1． 以不同濃度的 TMOP 作為標準溶液 ( Standard A –E )，配製時需 避光。
Concentration
(μΜ ) TMOP ( μl) ddH2O ( μl)
Standard A 0 0 250
Standard B 1 7.6 242.4
Standard C 2 15.2 234.8
Standard D 3 22..8 227.2
Standard E 4 30.4 219.6
2． 在所有測量的微量離心管內加入 10 μ l BHT (4% w/v)。
3． 分別在 standard 的微量離心管內加入 250 μ l 之不同濃度的 TMOP ( standard A –E )。
4． 在 sample 的微量離心管內加入 250 μ l 的血漿(含 EDTA)。
5． 在所有測量的微量離心管內加入 250 μ l HCl ( 0.1 N ) 與 250 μ l TBA ( 0.5% w/v )。
6． 放置於振盪器 ( Thermolyne, type 37600 mixer, Canada ) 上充分混 合 60 秒，重覆 5 次。
7． 設定恆溫培養箱 ( Precision, C1-45 ) 的溫度為 60℃，持續加熱 60 分鐘。
四、血液脂蛋白分析
(一)低密度脂蛋白膽固醇 ( low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C ) 以 cholesterol LDL direct ( BioSystems ) 進行檢測，步驟簡述如下：
1． 分別取 7 μl 的血清(樣本)與校正液(Calibrator)加入 750 μl Re a ge nt A (含 MES buffer ＞ 30 mM、cholesterol esterase 與 cholesterol oxidase ＜ 1.5 U/ml 、 0.5 mM 的 4-aminoantipyrine、ascorbate oxidase ＜ 3.0 U/l、peroxidase ＞ 1 U/ml 與 detergent，pH = 6.3 ) 後靜置 5 分鐘。
2． 將自動生化分析儀 ( BioSystems, analyser BTS-370, Spanish ) 的 波長設定為 545 nm 下讀取第一點吸光值 (A1)。
3． 再加入 250 μ l 的 Reagent B (含 MES buffer ＞ 30 mM、1 mM 的 N,N-bis(4-sulfobutyl)-m-toluidine 與 detergent，pH = 6.3 )，靜置 5 分鐘。
4． 設定波長為 700 nm 下讀取第二點吸光值 (A2)。
5． 計算 LDL-C 濃度 ( mg/dl )：
Sample
(A
2—A
1)/
Calibrator(A
2—A
1) * 87.4
( 二 ) 高 密 度 脂 蛋 白 膽 固 醇 ( high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C )
以 cholesterol HDL direct ( BioSystems ) 進行檢測，步驟簡述如 下：
1． 分別取 7 μl 的血清(樣本)與校正液 ( Calibrator ) 加入 750 μl Reagent A (含 buffer Good、cholesterol esterase 與 peroxidase＜
1.0 U/ml、1 mM 的 N,N-bis ( 4-sulfobutyl ) -m-toluidine 與 accelerator ) 後靜置 5 分鐘。
2． 將自動生化分析儀 ( BioSystems, analyser BTS-370, Spanish ) 的波 長設定為 600 nm 下讀取第一點吸光值 (A1)。
3． 再加入 250 μ l 的 Reagent B (含 buffer Good、cholesterol esterase ＜ 1.5 U/ml 與 1 mM 的 4-aminoantipyrine、ascorbate oxidase ＜ 3.0 KU/L 與 detergent )，靜置 5 分鐘。
4． 設定波長為 700 nm 下讀取第二點吸光值 (A2)。
5． 計算 HDL-C 濃度 ( mg/dl )：
Sample
(A
2—A
1)/
Calibrator(A
2—A
1) * 46.9
(三)氧化態低密度脂蛋白 ( oxidative low-density lipoprotein, oxLDL ) 以 oxLDL-β
2GPI ELISA Kit ( Cayman ) 進行檢測，步驟簡述如下：
1． 製備不同濃度的 Reference solution，以製作標準曲線。
Reference solution (
μ
l) Sample Dilutent (μ
l) Reference level ( U )Standard A 250 0 100
Standard B 250 250 50
Standard C 250 750 25
Standard D 250 1750 12.5
Standard E 250 3750 6.25
Standard F 0 250 0
2． 以 sample diluent 將解凍一次的樣本、postivite control 與 negative control 稀釋 100 倍。
3． 在測量的 well 中分別加入 100 μ l的 Standard A - Standard F 與稀釋 後的 positive control、negative control 與血清樣本。
4． 靜置於室溫下反應 1 小時，不可搖盪。
5． 將 plate 倒置，使 well 中的液體完全清乾。
6． 在測量的 well 以 wash solution 清洗 4 次。在最後一次清洗時，須 強烈的搖盪，再移除 wash solution。
7． 在測量的 well 中加入 100 μ l的 HRP-Conjugate antibody solution，
並於室溫下靜置 1 小時。
8． 在測量的 well 以 wash solution 清洗 4 次。
9． 在測量的 well 中加入 100 μ l的 HRP substrate，並於室溫下靜置 30 分鐘。
10． 在測量的 well 中加入 100 μ l的 stop solution (0.36 N 的硫酸)後。
11． 將 ELISA reader ( BioTek, μ Quant, U.S.A. ) 的波長設定為 540 nm，於 5 分鐘內測量完畢。
12． 以吸光值為橫座標，Reference level 為縱座標，繪製標準曲線，
並計算出二元一次方程式之公式。
13． 將樣本之吸光值帶入公式求出濃度後，再乘以相關係數 1.05，
即可求得 oxLDL 的濃度。
五、乳酸 ( lactate )
1． 取 2 μl血漿加入 200 μl l a c t a t e r e a ge nt s ol ut i on ，靜置室溫 10 分鐘，
設定 ELISA reader ( BioTek, μQuant, U.S.A. ) 的波長為 540 nm 下 測量吸光值。
2． 所得數值再換算為乳酸濃度。計算乳酸濃度 ( mg/dl )：
(樣本吸光值/標準液吸光值 ) × 40 ( mg/dl ) × 0.111
附錄六 實驗數據
表二 血液生化分析數據
組別 安慰劑組 ( N = 9 ) 炙甘草組 ( N = 9 ) 時序
生化值 增補前 增補後/
運動前 運動後 增補前 增補後/
運動前 運動後
CAT 活性 (mmol/min/g
Hb)
417.95
± 36.23
502.73
± 39.61
504.28
± 74.31
390.48
± 30.05
521.81
± 130.30
523.53
± 130.30 MDA 濃度
( mM )
3.60
± 0.27
2.80
± 0.31
3.49
± 0.27
2.58
± 0.39
1.63
± 0.11
1.84
± 0.11 MDA 濃度a
( mM )
2.99b
± 0.26
2.67c*
± 0.11 - 2.99b
± 0.26
1.66c
± 0.09 - MDA 濃度a
( mM )
- 2.24b
± 0.24
3.08c*
± 0.04 - 2.24b
± 0.24
2.04c
± 0.09 LDL-C 濃度
( mg/dl )
68.14
± 5.90
71.34
± 6.69
75.46
± 6.52
66.16
± 4.69
65.44
± 6.01
66.29
± 6.19 HDL-C 濃度
( mg/dl )
50.48
± 2.28
49.80
± 2.81
52.83
± 2.77
53.54
± 3.37
51.61
± 2.78
53.21
± 3.15 oxLDL 濃度
( U )
7.94
± 0.82
7.51
± 0.78
7.54
± 0.80
6.56
± 0.69
5.62
± 0.74
5.98
± 1.17 乳酸濃度
( mM )
1.85
± 0.21
1.61
± 0.17
7.48
± 0.70
1.57
± 0.27
1.29
± 0.09
7.87
± 1.93
