第三章、 實驗材料與方法
第一節、 研究架構
本實驗為複合乳酸菌與安慰劑的隨機、安慰劑、雙盲研究
（double-blind, placebo-controlled, randomized study）。本實驗通過台 灣大學醫學院附設醫院人體試驗倫理委員會審核（附件 1）。
一、實驗步驟
〈一〉、實驗期間共 3 個月，將受試者分實驗組與安慰劑組兩組，
實驗組每日給予複合乳酸菌（Zen-u Biotechnology Co. Ltd）108 CFU 每天 6 公克。安慰劑組給予安慰劑每天 3 克，兩組纖維維 持平時攝取量。
〈二〉、實驗組：每天配合飲食，添加一日 3 次，每次 2 公克複合 乳酸菌，每公克含108CFU 菌落數的納豆菌、嗜酸乳酸菌、雙叉 乳桿菌之複合商品。
〈三〉、安慰劑組：食用正常飲食及糖飴安慰劑，每次 1 公克，每 天3 次，為期 1 個月。
〈四〉、實驗前及實驗中每週紀錄兩組使用軟便劑種類、灌腸、腹 瀉次數、以手挖除之排便次數、排便規律性（次數）、排便量、
糞便顏色、糞便軟硬度。
（五）、體位、飲食與免疫及發炎指標數據，收集為實驗前、實驗 後第4 週與第 10 週共 3 次。
（六）、受試者參加組別隨機分配方為：收案住民編號後，抽岀一 號後每隔5 號選一位。比如：抽出為 2 號則號碼為 2、7、12、
17、22、27---依此原則共取出 23 位為第一組，其餘則為第二 組。介入之複合乳酸菌與安慰劑外觀相同（圖2），安慰劑組與 實驗組之食物均編號並寫上姓名（圖3），由不知情工作人員給 予病房照顧者餵食受試者，照顧者不知給予之食物為乳酸菌或 安慰劑，資料紀錄者也不知道受試者為實驗組或安慰劑組。
二、採樣流程
實驗組與安慰劑組經 2 週穩定期後，採第 1 次生化數據及糞 便酸鹼值檢體，並各介入乳酸菌與安慰劑4 週，結束時，採第 2 次生化數據及糞便酸鹼值，並經2 週沖刷期，兩組再交叉介入乳 酸菌與安慰劑4 週，結束時，採第 3 次生化數據及糞便酸鹼值，
腸道功能續追蹤2 週後，結束本實驗。
（抽血/體位測量） （ 抽血/體位測量） 抽血/體位測量
二、受試者選擇標準
受試者為中部某區域醫院附設護理之家住民，健康狀況穩定，
不改變飲食與藥物治療。排除條件為使用抗生素藥劑、類固醇與轉 院。抽血條件維持在持續5 天耳溫≦ 37.5℃，發燒時延後抽血至符 合持續5 天耳溫≦ 37.5℃，不排除使用軟便劑。
第三節、材料及數量
一、實驗材料
複合乳酸菌：試驗品由Zen-u Biotechnology Co. Ltd 出品，含納 豆菌、嗜酸乳酸菌、雙叉乳桿菌，菌落數 108CFU/ml，詳細成分含：
Lactobacilli mrs broth
（DIFCO 0881
）、Proteose peptone NO.3 10.0 g、牛肉精（beef extrac）10.0g、酵母精（yeast extrac）5.0 g、糊精（dextrose）
20.0 g、Tween 1.0 g、檸檬酸氨（ammonium citrate）2.0 g 、醋酸鈉
（CH3COONa）5.0g、硫酸鎂（MgSO4）1.0 g、水合硫酸錳
（MnSO4H2O）0.05 g、磷酸氫鉀（K2HPO4）2.0 g。其中納豆菌株 以 BNC-280，微生物鑑定：biomerieux 之 AP150CH AP120E 以及 Biolog 之 GP2 Microplate，並以 16SrRNA 序列比較分析菌株特性，
確為納豆菌。桿狀、大小約0.8х3.5 μm。每次餵食 2 公克共計餵食 3 次。
二、安慰劑－糖飴
為益富實業股份有限公司出品。糖飴主要成份為玉米澱粉，每 100 公克 380 大卡，研究以每人每天餵食 3 次共計 3 公克，其營養 成分如下表：
表 1、實驗材料-糖飴營養成分
營養素 100g 3g 營養素 100g 3g
熱量（kcal） 380 11 維生素C（mg） 60 1.8
蛋白質（g） 0 維生素 B1（mg） 1.5 0.05
脂肪（g） 0 維生素 B2（mg） 1.7 0.05
碳水化合物（g） 95 2.8 維生素B6（mg） 1.5 0.05
膳食纖維質（g） 0 維生素 B12（μg） 4.5 0.1
鈣（mg） 430 13 菸鹼酸（mg） 15 0.5
鐵（mg） 8 0.2 泛酸（mg） 7.5 0.2
維生素A（μg） 751 22.5 葉酸（μg） 300 9
維生素D（μg） 5 0.2 生物素（μg） 100 3
維生素E（mg） 30 0.9 膽鹼（mg） 50 1.5
維生素K（mg） 38 1.1
三、包裝與保存
複合乳酸菌與糖飴均以粉劑之鋁箔包裝供應。複合乳酸菌每 包2 公克，糖飴每包 1 公克。保存於 28℃以下之室溫。
四、食用方法
實驗時以夾鏈塑膠大藥袋依實驗組、安慰劑組，分別盛裝複合 乳酸菌或糖飴，袋上貼有受試者姓名及每天食用紀錄，每週一次由 研究者檢查是否食用完畢及是否有餵食者簽名（圖4）。
第四節、資料收集項目
一、基本資料
資料收集含受試者背景資料與人體測量學、飲食資料。背景資 料包括年齡、性別，紀錄個案疾病史，有無以下疾病發生：腦中風
（cerebrovascular accident，CVA）、巴金森氏症（Parkinsonism）、腸 道症狀、肝疾病、糖尿病、肺結核、心臟病；紀錄類固醇（steroid）、
使用軟便劑，如：Dulcolax、MgO、中草藥之使用種類（附件 3）。
人體測量資料包括：身高、體重、計算得身體質量指數（body mass index, BMI）、三頭肌皮脂厚度〈Triceps skinfold, TSF〉、臂中圍、計 算得上臂肌肉面積，以上項目皆由同一人測量。飲食資料：紀錄食 物攝取、分析三大營養素、纖維攝取量、水分、活動量、用藥與免 疫相關之疾病。
二、活動量
實驗期間紀錄每天活動，包括臥床、輪椅、走路之活動，單位 為時間/分/天。
三、住民急性感染狀況
每週收集受試者之肺炎發生次數、尿道感染次數、住院次數、
住院天數、72 小時再住院次數、並於實驗中收集三次高敏感 C 反應 蛋白與紅血球沉降速率。
四、體位測量資料準則
體位測量數據包括：身高、體重、三頭肌皮脂厚度、身體質量 指數（body mass index, BMI）、臂中圍、上臂肌肉面積。其測量方 法為：
〈一〉、身高：
採用身高計測量，受測者脫鞋後，臂、臀及小腿緊靠測量 桿站立，兩腳併攏，兩膝伸直，身體中心對準測量桿，雙手自 然垂下貼於大腿兩側，兩眼平視，測量桿平貼受測者頭頂，以 公分為單位，讀出身高計之位置。不能站立者以胸骨中線至中 指公分長乘2 計算。
〈二〉、體重一律以購自政華展業有限公司之 Marisa 型號電動移
位磅秤秤重。
〈三〉、身體質量指數（body mass index, BMI）
BMI：= 體重（公斤）÷﹝身高（公尺）﹞2
〈四〉、臂中圍〈Midarm circumference, MC〉：
採皮尺測量右手指尖峰到鷹嘴突長度後取終點，做記號“+”
再用軟尺量臂圍。
〈五〉、三頭肌皮下脂肪厚度(triceps skinfold,TSF)：
採彎角規（caliper）測量，將被測者手肘向胸前彎曲，上 手臂與下手臂成90 度，在肩峰突與鷹嘴突的中心點做一記號，
最後將被測者手臂輕輕垂直，測量者以大姆指和食指沿著高於 記號一公分左右，將皮下脂肪拉離其下肌肉組織，之後利用彎 角規拴住終點位置脂肪厚度，讀岀數值，每次量差不得＞
0.01mm，重複三次，取平均值並紀錄。
〈六〉、上臂肌肉面積〈Arm muscle area，AMA〉代入公式：
MAMC = MAC-3.14× TSF 五、血液、生化數據、糞便收集
（一）、白血球與其細項分析(leukocytes and difference count）、
hs-CRP、紅血球沉降速率、膽固醇、三酸甘油酯及糞便酸鹼（pH）
值，分析項目委由台大醫院雲林分院實驗診斷科分析。其檢驗
方法如下：
1、白血球與其細項分析，以紫頭管內含EDTA（K3）做CBC檢驗，
採血後，倒轉5-8次以上，採足管上所指示之血量。
2. hs-CRP 使用TBA-120FR生化分析儀，利用抗原-抗體反應，檢 體之 CRP 與吸附在 latex particles 之 anti-CRP 形成凝集反 應， 利用波長 572 nm 測其吸光度增加量，再對照標準 CRP 濃 度作成之檢量線來定量檢體中CRP濃度。檢體收集時，以黃頭管 內含polymer gel and clot activator（聚合凝膠及促凝固劑），靜置 10-30分鐘後進行。
3.ESR：以黑色管內含3.8%檸檬酸鈉（sodium citrate ），全血2ml，
採血後，倒轉5-8次以上，採足管上所指示之血量，做沉降速率 計時。
4、膽固醇與三酸甘油酯之改變：以綠頭管內含 lithium heparin gel
（肝素鋰）採血後，倒轉5-8 次以上，採足管上所指示之血量，
做專一酵素化學法檢驗（enzymatric, colorimetric method）。
5、糞便 pH 值：取得新鮮糞便約 1 公克，至於乾淨之離心管中，
1 小時內冷藏。檢測時，加入 9 倍無菌二次去離子水，內含玻 璃珠，以震盪器均質，再以 pH 值檢測儀(Delta 520, Mettler, England)，直接插入均質液中，測定糞便 pH 值。
（二）、Ig A 外送中國醫藥學院附設醫院臨床診斷科分析。利用 Sandwich ELISA 方式檢測。
六、住民排便狀況
收集護理之家住民腸道症狀資料含：排便次數、灌腸次數、
以手挖除排便次數、使用軟便劑之種類、糞便量、糞便軟硬度、
糞便顏色、腹瀉次數（附件4）。其收集時間為：介入前期至結束 期之每週腸胃症狀、用藥種類紀錄。內容為：
（一）、糞便軟硬程度分5 級：分數從 1－5，1.稀糊狀、2.很軟、3.
正常軟度、4.有點硬、5.糞便很硬不易排岀。
（二〉、排便規律性（次數）分 5 級：分數從 1－5，1.三天一次、
2.二天一次、3.每天一次、4.每天 2 次、5.沒有規律(2 次以上）。
〈三〉糞便量程度分 5 級：分數從 1－5，1.很少〈50g 以下、約兩 指量〉、2.少〈50-100g、約半個壘球大〉、3.普通〈100-150g、約 一個壘球大〉、4.多〈150-200g、約 2/3 一般飯碗大〉、5.非常多
〈300g 以上〉。
〈四〉糞便顏色分級：分數從 1－3，1.灰慘白、3.黃色、5.、黑棕 色(附件 4)。
七、飲食紀錄資料收集
〈一〉、普通飲食，送膳人員使用固定容器配置伙食，並經食物 份量認識受訓，以減少份量誤差。由受過飲食份數訓練之工作 人員，紀錄當天剩餘食物，每星期抽樣3 天剩餘食物，含一個 例假日，並以衛生署台灣常見食品營養素分析資料庫，分析三 大營養素與纖維。紀錄表如（附件5）。住民如有攝取額外食物 由同一工作人員紀錄，紀錄表如（附件6）。
〈二〉、管灌食物為固定商業配方，依受試者實際進食量紀錄並 分析三大營養素與纖維。
〈三〉、一般脂肪估計，裹粉猪排每份以13－15 公克油脂計、不 裹粉油炸以10 公克油脂計，煎的每份以 8 公克計，炒蔬菜的 每份以5 公克計（糖尿病衛教學會衛教小組教材）。
第五節、統計分析
資料收集後以excel 建檔，以 SAS 9.0 版統計軟體分析，統 計方法包括mean ± SD、percentage，並以 one-way ANOVA（實 驗組、安慰劑組與基準值）及Duncan’s multiple-range test 作組間 差異比較，及Student’s t-test（實驗組與安慰劑組）、paired t-test
（實驗前後）統計分析，p < 0.05 時，表示具統計差異。
第四章、結果
第一節、受試者基本資料
本實驗受試者為台灣中部某地區教學醫院護理之家住民。徵詢 同意並簽寫同意書後收案；共收案43 人，其中 1 人中途因退住退 出實驗，另4 人因高血糖高滲透壓症候群、肺炎、併發心肺衰竭死 亡，退出實驗。總計完成實驗者38 人。男性 16 人（42.2％），女性 22（57.8％）人。年齡範圍在 55 歲到 94 歲，平均為 80.1 ± 8.4 歲（表 1）。男性平均 80 ± 9 歲、女性平均 80 ± 8 歲，以 Student’s t-test 比 較兩組差異，p 值為< 0.8，沒有顯著差異(表 2)。
第二節、飲食狀況
熱量攝取範圍在1419 大卡/天至 2050 大卡/天。實驗前 1685 ± 195 大卡/天、實驗後安慰劑組平均 1699 ± 217 大卡/天，實驗組平均 1675 ± 232 大卡/天；以 one-way ANOVA 比較實驗組、安慰劑組與
基準值，p 值為 0.43，無統計差異。
蛋白質攝取量，實驗前安慰劑組平均59 ± 3 公克/天、實驗後 安慰劑組平均 60 ± 12 公克/天，實驗組平均 59 ± 13 公克/天，以以
蛋白質攝取量，實驗前安慰劑組平均59 ± 3 公克/天、實驗後 安慰劑組平均 60 ± 12 公克/天，實驗組平均 59 ± 13 公克/天，以以