單一劑量皮膚毒性試驗結果

3.1. 單一劑量皮膚毒性試驗正對照組 neomycin 評估量表之建立 在塗抹 10 % neomycin 48 小時後，可觀察到在此劑量有輕微的 過敏產生，但以 Fraize-FHSA 評分則為幾乎無刺激性，隨著劑量增加 至 20 %及 40 % 皆能有效產生皮膚弱刺激反應。本實驗定義皮膚刺激 的程度是以 Primary dermal irritation index 為準，刺激指數大於 0 至 0.5 %為幾乎無刺激性，刺激指數大於 0.5 至 2.0 %為弱刺激性，刺激 指數大於 2.0 至 5.0 %為中度刺激性，若紅腫程度大於 5.0 至 8.0 %以 上為強刺激性，建立以此 neomycin 作為正對照組，確立本實驗可以 有效的引發老鼠皮膚過敏的現象，且有濃度與時間的依存性，如圖 十七、表二十、表二十一所示。

圖十七、Neomycin 單一劑量皮膚毒性試驗評估 表二十、Neomycin 單一劑量皮膚刺激試驗紅腫比較

solvent control 10% neomycin 20% neomycin 40% neomycin

0 hr 1.32 ± 1.83 0 ± 0 0 ± 0 1.22 ± 0.92

24 hr 2.26 ± 0.57 0.04 ± 0.06 3.36 ± 2.92 12.26 ± 7.02 48 hr 0.48 ± 0.42 3.25 ± 2.76 11.22 ± 14.01 13.54 ± 2.33

0 小時

24 小時

48 小時

Solvent control

40 % Neomycin 10 %

Neomycin 20 % Neomycin

Mean ± SD

表二十一、Neomycin 紅腫評分比較表 (Draize-FHSA scoring system)

solvent control 10% neomycin 20% neomycin 40% neomycin 0 hr 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 24 hr 0.17 ± 0.41 0.00 ± 0.00 0.33 ± 0.52 1.00 ± 0.00 48 hr 0.00 ± 0.00 0.33 ± 0.52 0.83 ± 0.41 1.17 ± 0.41

由表二十、二十一發現neomycin在本研究中單一劑量皮膚刺激紅 腫比較與Draize-FHSA之評分，在塗抹 20, 40 % neomycin 48 小時後分 別有 11.57~13.51 之倍數相關。本實驗將以 100 %茶樹精油為標準樣 品，做為建立茶樹精油安全性評估模式。並利用上述建立之皮膚急 性毒性評量表，向下探尋茶樹精油標準樣品之最低致皮膚急性毒性 的濃度，以提供日後市售茶樹精油樣品毒性之參考依據。

3.2. Terpinen-4-ol與 1,8-cineole之單一劑量皮膚急性毒性試驗結果 茶樹精油中主成分 terpinen-4-ol 以不同濃度進行皮膚刺激試驗。

本實驗所使用之濃度為 100 mM 之濃度，換算成為 1.5 %；此濃度較 ISO 4730 之換算濃度略高，2 % (具有輕微皮膚刺激之濃度) * 30 % (ISO 4730 之規範最低含量) = 0.6 %，評估 terpinen-4-ol 之皮膚毒性。

主要毒性成分 1,8-cineole 也是利用相同濃度進行評估。

Terpinen-4-ol 在濃度 1.5 % /site (100 mM)不具有皮膚刺激的毒 性，目前也無文獻指出 terpinen-4-ol 會造成皮膚毒性。1,8-Cineole 在 濃度 1.5 % /site (100 mM) 具有輕度的皮膚刺激的毒性，當濃度低於 0.375 % /site 時，不會對皮膚造成影響，此濃度也低於 ISO 4730 所規 範之濃度。如表二十二。

表二十二、Terpinen-4-ol 與 1,8-cineole 之單一劑量皮膚急性毒性試驗

Terpinen-4-ol 0.19 % /site 0.375 % /site 0.75 % /site 1.5 % /site

0 hr 2.39± 1.73 3.24± 0.40 2.21± 0.74 1.52 ± 0.18

24 hr 2.84 ± 0.45 2.55 ± 0.63 3.19 ± 1.96 3.42 ± 0.63

48 hr 3.20 ± 0.47 5.09 ± 1.85 3.34 ± 0.36 3.56 ± 0.47

(Mean ± SD)

Mean ± SD

表二十二、Terpinen-4-ol 與 1,8-cineole 之單一劑量皮膚急性毒性試驗

1,8-Cineole 0.19 % /site 0.375 % /site 0.75 % /site 1.5 % /site

0 hr 3.13 ± 0.42 2.93 ± 0.83 2.27± 1.22 2.59± 0.84

24 hr 3.48 ± 0.33 4.98 ± 1.61 5.70 ± 1.30 8.34 ± 1.17

48 hr 3.66 ± 0.35 5.51 ±1.49 8.76 ± 1.52 13.59 ± 2.02

(Mean ± SD)

3.3. 茶樹精油單一劑量皮膚毒性試驗結果

我們利用自行萃取符合 ISO 4730 規範之茶樹精油 TTO-A 作為標 準品，探求不會造成皮膚毒性的濃度，再依此結果進行市售之茶樹 精油的毒性評估。

塗抹不同濃度之茶樹精油 24 小時後，即可觀察到有不同程度之皮膚 過敏反應產生，隨著劑量與時間的增加產生皮膚刺激反應也越趨明 顯。

實驗結果顯示：以荷荷芭油為稀釋劑，在相同濃度下比較皮膚毒 性的強度；荷荷芭油稀釋之茶樹精油 TTO-A 在濃度為 2 %時仍然會 產生中度之皮膚刺激性，而 0.5 及 1 %之 TTO-A 則有弱刺激性，小於 0.25 %之濃度則為幾乎無刺激性。因此我們選用坊間芳香療法中較 盛行之基底油荷荷芭油為後續實驗的稀釋溶劑。茶樹精油單一劑量 皮膚刺激試驗紅腫比較如表二十三、表二十四所示。

3.4. 市售茶樹精油之單一劑量皮膚急性毒性試驗結果

我們以蒸餾萃取之茶樹精油 TTO-A 為標準對照樣品，找尋出適 合評估茶樹精油對於皮膚的毒性的濃度為 2 %時有中度刺激性，因 此我們利用此濃度去評估市售之茶樹精油的單一劑量毒性試驗，如表 二十五所示。結果顯示 TTO-B 及 TTO-C 等產品所造成的皮膚刺激較 明顯，但在抑制金黃色葡萄球菌效果不佳 (表十五)，TTO-B 之 terpinen-4-ol、1,8-cineole、ρ-cymene、limonene 含量較高，而 TTO-C 則以α-terpinene、terpinolene 及 α-terpineol 較高 (表七)。

表二十三、茶樹精油單一劑量皮膚刺激試驗紅腫比較 (濃度/site)

濃度 0 % 0.25 % 0.5 % 1 % 2 % 5 % 10 %

0 hr 1.53 ± 1.33 2.12 ± 1.02 0.86 ± 0.45 1.22 ± 0.92 0.45 ± 0.58 0.55 ± 0.77 1.32 ± 1.83 24 hr 2.10 ± 0.75 3.60 ± 1.12 14.24 ± 3.87 12.26 ± 7.02 39.47 ± 10.73 48.58 ± 4.50 69.86 ± 7.23 72 hr 2.89 ± 0.39 3.51 ± 0.35 12.90 ± 2.15 13.54 ± 2.33 36.61 ± 3.67 49.12 ± 3.32 79.00 ± 5.50

(Mean ± SD)

表二十四、茶樹精油之皮膚毒性利用 Draize-FHSA scoring system 分析

濃度 0 % 0.25 % 0.5 % 1 % 2 % 5 % 10 %

0 hr 0.00 ± 0.00 0.17 ± 0.41 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 24 hr 0.17 ± 0.41 0.33 ± 0.52 1.17 ± 0.41 1.00 ± 0.00 3.50 ± 0.55 4.00 ± 0.89 6.33 ± 0.52 72 hr 0.17 ± 0.41 0.33 ± 0.52 1.00 ± 0.00 1.17 ± 0.41 3.33 ± 0.52 4.17 ± 0.75 6.67 ± 1.21

表二十五、市售品茶樹精油之單一劑量皮膚急性毒性試驗評分表 (2% /site)

市售品 TTO-B TTO-C TTO-D TTO-E TTO-F

0 hr 3.85 ± 0.95 3.41 ± 0.67 2.87 ± 0.82 3.23 ± 0.31 1.85 ± 1.67 24 hr 6.09 ± 0.84 14.41 ± 2.43 5.83 ± 2.07 5.49 ±1.25 5.54± 0.87 48 hr 14.12 ± 1.97 27.93 ± 4.78 8.26 ± 2.06 7.62 ± 2.07 9.48 ± 0.77

(Mean ± SD)

茶樹精油在許多的網路文章提到是可以直接塗抹於皮膚上的精 油，但濃度的選擇卻需要更仔細的標示。本實驗利用以 TTO-A 做為 標準樣品，建立茶樹精油單一劑量皮膚刺激試驗的評分標準，確立 茶樹精油有引發老鼠皮膚過敏的現象，且有濃度與時間之依存性，

可提供未來茶樹精油添加於化妝品之接觸性及毒性檢驗依據。

以 TTO-A 檢測茶樹精油在 2 % /site 的濃度下，為誘發皮膚中度 刺激性的劑量，因市售品成分雖大致上均符合 ISO 4730 規範，但仍 存在微量的個別差異足以引發潛在的皮膚刺激性，消費者在使用時需 要特別注意。而濃度低於 0.25 % /site 以下則為安全的使用濃度。

本實驗檢測使用市面上容易購得之 5 種茶樹精油產品，利用單 一劑量毒性實驗分析，其造成皮膚刺激的濃度相近，可能與其主成 分類似皆符合 ISO 4730 的標準，因此市面上之銷售產品，未來在標 示其使用方式時應添加警語，提醒消費者茶樹精油的安全濃度。

目前在茶樹精油的建議使用量為 1 %~10 %，且宣稱茶樹精油為 少數可以直接塗抹於皮膚上之精油，這些類似的標語或濃度也應該 加以規範。

二、塗抹茶樹精油 28 天之肝腎毒性評估

依據中藥新藥臨床試驗作業準則草案總說明，進行重複劑量毒 性試驗時，臨床第一、二、三階段及查驗登記時必須提供重複劑量毒 性試驗之最短給藥期間，在囓齒類動物為依照藥品在臨床試驗使用期 間之長短，規定為最少應為 2 星期至 1 個月。我們利用蒸餾萃取的茶 樹精油 TTO-A 作為標準品，尋找出在 2 % /site 的劑量下會造成皮膚 輕微毒性。因此我們利用此劑量重複投予在 Wistar 大鼠背上，藉此觀 察茶樹精油是否會造成肝腎毒性，並以 Wistar 大鼠血清中肝腎功能之

指數 GOT, GPT, BUN, CRE 為標的。

1. 試驗材料