Taipei Medical University Institutional Repository:Item 987654321/4319
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(2) 目錄 目錄……………………………………………………………… 附圖目錄………………………………………………………… 附表目錄………………………………………………………… 縮寫表…………………………………………………………… 中文摘要………………………………………………………… 英文摘要………………………………………………………… 第一章 緒論………………………………………………… 第一節 研究背景…………………………………………… 第二節 痤瘡之病因………………………………………… 第三節 澳洲茶樹簡介……………………………………… 第四節 澳洲茶樹精油……………………………………… 第五節 研究目的…………………………………………… 本實驗之流程圖…………………………………… 第二章 茶樹精油之品質管制……………………………… 第一節 前言………………………………………………… 第二節 實驗部分…………………………………………… 一、 材料及設備………………………………………… 二、 茶樹精油之製備…………………………………… 1. 水蒸氣蒸餾………………………………………… 2. 精油含量測定………………………………………… 三、 茶樹精油之氣相層析質譜儀圖譜與指標成分之定 量…………………………………………………… 1. 利用GC-MS分析茶樹精油及其標準品…………… 2. 氣相層析質譜儀之條件…………………………… 3. 檢品配製…………………………………………… 第三節 氣相層析質譜儀指紋圖譜分析指標成分結果…… 一、 澳洲茶樹各部位之精油萃取結果與產率………… 二、 茶樹精油之成分分析結果………………………… 第四節 討論………………………………………………… 第三章 茶樹精油之抗痤瘡療效評估……………………… 第一節 前言………………………………………………… 第二節 茶樹精油作用之實證醫學探討…………………… 一、 茶樹精油用於痤瘡治療之系統評價……………… 1. 文獻來源…………………………………………… 2. 文獻之納入標準…………………………………… 3. 納入文獻之質量評值方法………………………… 二、 茶樹精油作用之實證醫學探討結果……………… i. i iv v vi 1 2 4 4 10 14 15 17 19 20 20 20 20 21 21 21 22 22 22 23 25 25 25 30 33 33 34 34 34 34 35 35.
(3) 1. 2. (1) (2) (3) (4) (5) (6) 第三節 一、 1. 2. 3. 4. 二、 1. 2. 三、 1. 2. 3. 四、 第四章 第一節 第二節 一、 1. 2. 3. 二、 1. 2. 第三節 一、 1. 1.1 1.2. 茶樹精油用於痤瘡治療之系統評價結果………… 茶樹精油用於痤瘡治療之基礎研究文獻回顧…… 茶樹精油之抗細菌活性…………………………… 茶樹精油之抗真菌活性…………………………… 茶樹精油之抗病毒活性…………………………… 茶樹精油之抗原蟲活性…………………………… 茶樹精油之抗發炎反應…………………………… 結論………………………………………………… 實驗部份…………………………………………… 實驗材料…………………………………………… 試驗菌株…………………………………………… 試藥………………………………………………… 人工配方茶樹精油…………………………………… 儀器設備…………………………………………… 實驗方法…………………………………………… 培養液及培養基之製備…………………………… 瓊脂井化擴散法 (agar well di f f us i onme t hod) …… 茶樹精油抑制金黃色葡萄球菌活性結果………… 茶樹精油之主成分抑制金黃色葡萄球菌活性…… 市售品及萃取茶樹精油抑制金黃色葡萄球菌活性 茶樹精油各主要成分比例調整後對金黃色葡萄球菌 之活性……………………………………………… 討論………………………………………………… 茶樹精油之安全性評估…………………………… 前言………………………………………………… 茶樹精油安全性之實證醫學探討………………… 茶樹精油安全性之系統評價……………………… 文獻來源…………………………………………… 文獻之納入標準…………………………………… 納入文獻之質量評值方法………………………… 茶樹精油安全性之實證醫學探討結果…………… 茶樹精油安全性之系統評價結果………………… 茶樹精油不良反應之文獻回顧…………………… 實驗部份…………………………………………… 單一劑量皮膚毒性試驗…………………………… 實驗材料…………………………………………… 實驗動物…………………………………………… 試藥………………………………………………… ii. 35 36 36 38 38 38 38 39 42 42 42 42 42 42 42 42 43 44 44 45 47 47 49 49 50 50 50 50 50 50 50 53 58 58 59 59 59.
(4) 1.3 2. 3. 3.1 3.2 3.3 3.4 二、 1. 1.1 1.2 1.3 2. 3. 三、 第五章 第六章. 實驗儀器…………………………………………… 實驗方法…………………………………………… 單一劑量皮膚毒性試驗結果……………………… 單一劑量皮膚毒性試驗正對照組Neomycin 評估量 表之建立…………………………………………… Terpinen-4-ol與 1,8-cineole之單一劑量皮膚急性毒 性試驗結果………………………………………… 茶樹精油單一劑量皮膚毒性試驗結果…………… 市售茶樹精油之單一劑量皮膚急性毒性試驗結果 塗抹茶樹精油 28 天之肝腎毒性評估……………… 試驗材料…………………………………………… 實驗動物…………………………………………… 試藥………………………………………………… 實驗儀器…………………………………………… 實驗方法…………………………………………… 塗抹茶樹精油 28 天之肝腎毒性評估結果………… 討論………………………………………………… 結論………………………………………………… 參考文獻……………………………………………. iii. 59 59 61 61 62 63 63 65 66 66 66 66 66 66 70 71 72.
(5) 附圖目錄 圖一、 圖二、 圖三、 圖四、 圖五、 圖六、 圖七、 圖八、 圖九、 圖十、 圖十一、 圖十二、 圖十三、 圖十四、 圖十五、 圖十六、 圖十七、 圖十八、. 痤瘡致病之規則系統…………………………… 不同類型痤瘡之治療方式……………………… 澳洲茶樹之外觀(A)樹型與(B)葉枝……………… 水蒸氣蒸餾萃取裝置……………………………… 茶樹精油含量測定之裝置………………………… 樣品TTO-A之GC-MS指紋圖譜………………… 樣品TTO-B之GC-MS指紋圖譜………………… 樣品 TTO-C 之 GC-MS 指紋圖譜………………… 樣品 TTO-D 之 GC-MS 指紋圖譜………………… 樣品 TTO-E 之 GC-MS 指紋圖譜………………… 樣品 TTO-F 之 GC-MS 指紋圖譜………………… 植物二次代謝物生合成主要途徑………………… 瓊脂井化擴散法及精油於平板培養基之抑菌圈外 觀…………………………………………………… 蒸餾萃取茶樹精油及市售品之金黃色葡萄球菌抑 制……………………………………………… 1,8-Cineole (eucalyptol)在大鼠及人體內之代謝 單一劑量皮膚毒性試驗操作圖……………… Neomycin單一劑量皮膚毒性試驗評估…………… 長期塗抹TTO-A之後大鼠血清血清肝腎功能生化 數值………………………………………………. iv. 10 13 15 21 22 27 27 28 28 29 29 31 44 46 52 60 61 68.
(6) 附表目錄 表一、 表二、 表三、 表四、 表五、 表六、 表七、 表八、 表九、 表十、 表十一、 表十二、 表十三、 表十四、 表十五、 表十六、 表十七、 表十八、 表十九、 表二十、 表二十一、 表二十二、 表二十三、 表二十四、 表二十五、 表二十六、. 植物萃取物與抗痘相關之科學論文……………… 常用於抗痘化粧品之植物萃取物的毒性研究及其 使用濃度或劑量………………………………… 茶樹精油之組成………………………………… 茶樹精油成分之性質…………………………… 十二種購得茶樹精油成分標準品之名稱及其 GC-MS滯留時間………………………………… 市售五種茶樹精油之品牌及樣品代號…………… 蒸餾萃取與市售之茶樹精油成分含量分析…… 茶樹精油及組成之Rideal-Walker coefficient…… Jadad Score Calculation…………………………… 茶樹精油用於痤瘡治療之文獻摘要及Jadad評分 茶樹精油之抗細菌活性………………………… 茶樹精油之抗真菌活性………………………… 蒸餾萃取及人工配方茶樹精油之組成…………… 茶樹精油主成分之金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑比 及MIC、MBC……………………………………… 茶樹精油與人工配方精油DF1, DF2 之抑菌圈直徑 比…………………………………………………… 茶樹精油之不良反應相關文獻回顧……………… 精油植物主成分及潛在之接觸性過敏原……… 茶樹精油成分造成之毒性………………………… 皮膚紅腫評分表 (Draize-FHSA scoring System)… Neomycin單一劑量皮膚刺激試驗紅腫比較……… Neomycin紅腫程度評分比較表………………… Terpinen-4-ol與 1,8-cineole之單一劑量皮膚急性毒 性試驗…………………………………………… 茶樹精油單一劑量皮膚刺激試驗紅腫比較……… 茶樹精油之皮膚毒性利用Draize-FHSA scoring S ys t e m分 析 … … … … … … … … … … … … … … 市售品茶樹精油之單一劑量皮膚急性毒性試驗評 分表……………………………………………… 雌性Wistar大鼠血中肝腎功能之生化檢驗參考值. v. 6 8 16 17 24 24 26 34 35 36 40 41 43 45 46 51 54 56 58 61 62 62 64 64 64 67.
(7) 縮寫表 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28.. ACD BUN CFU COX CRE GC-MS GM-CSF GOT GPT IL ISO LPS MBC MIC PDII PGE2 ROS RW coefficient TSA TSB TNF TTO TTO-A TTO-B TTO-C TTO-D TTO-E TTO-F. Allergic contact dermatitis Blood urea nitrogen Colony-forming unit Cyclooxygenase Creatinine Gas chromatography-mass spectrometry Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Glutamic Oxaloacetic Transaminase Glutamic Pyruvic Transaminase Interleukin International Standards Organisation Lipopolysaccharide Minimum Bactericidal Concentration Minimum inhibitory concentration Primary Dermal Irritation Index Prostaglandin E2 Reactive oxygen species Rideal-Walker coefficient Tryptic soy agar Tryptic soy broth Tumor necrosis factor Tea tree oil (volatile oil of Melaleuca alternifolia) 萃自葉及嫩枝(foliage & branchlet)之茶樹精油 台中化工行之茶樹精油 西班牙A品牌之茶樹精油 台北化工行 1 之茶樹精油 台北化工行 2 之茶樹精油 網路商店之茶樹精油. vi.
(8) 中文摘要 精油普遍用於化妝品及保養品，其中又以茶樹精油為廣泛用於 芳香療法的精油之一。其源自於澳洲茶樹具有抑制微生物、消炎作 用，但是在高濃度時會引起皮膚刺激作用，因此本研究將探討茶樹 精油的安全、有效劑量及主要成分中導致皮膚刺激反應之相關性。 以實證醫學方式搜尋茶樹精油之臨床試驗文獻不多，且Jadad評值偏 低，因此將進行後續基礎實驗。 首先取蒸餾萃取茶樹精油 (天然精油)，及市售品以氣相層析質 譜儀檢測其主要成分，其品質均符合ISO 4730 之成分規範。繼而進 行抑制金黃色葡萄球菌活性及皮膚局部使用之安全性探討。12 個標 準品、天然精油及市售品檢測抑制金黃色葡萄球菌活性，結果顯 示：以terpinolene (MIC 6.25%, MBC 100%)、α-terpinene (MIC 6.25%, MBC 25%)及α-terpineol (MIC 10%, MBC 40%)之抗菌效果最佳。再 以主要抗菌之成分調配人工配方精油，抗菌作用提高，且較天然精 油強，但仍不及某廠商市售品之效果。 皮膚接觸毒性檢測，是利用neomycin建立皮膚刺激反應標準。 天然茶樹精油及主要毒性成分 1,8-cineole 與活性成分terpinen-4-ol檢 測結果顯示：天然茶樹精油 2%以上即產生顯著之皮膚刺激毒性，而 1,8-cineole及terpinen-4-ol則無顯著毒性。另外，連續 28 天塗抹 2%茶 樹精油於Wistar大鼠皮膚，觀察血清中GOT、GPT、BUN及creatinine 之變化，相對於溶媒組，亦無顯著影響肝腎功能。 綜合實證醫學及基礎研究對於茶樹精油應用於痤瘡治療之功效 與安全性之探討結果：茶樹精油確實能有效抑制金黃色葡萄球菌， 並有抗發炎之機轉，而達成治療痤瘡之效果；且若低濃度塗抹局部 皮膚使用而非口服，亦不會對身體造成毒性。 關鍵字：澳洲茶樹精油、皮膚刺激、痤瘡、實證醫學、金黃色葡萄球菌 1.
(9) Abstract Tea tree oil (TTO) is one of the essential oils that are popularly used in cosmetics and mending agents. TTO, the essential oil of Melaleuca alternifolia, is used in aromatherapy and has been investigated as antimicrobial and anti-inflammatory agents. However, TTOs can cause skin irritation at high concentrations. In this study, we first explored the safety and efficient dosage of TTO and the mechanism of TTO-induced skin irritation. Previous limited studies of TTO related randomized and double blind clinical trials all showed low Jadad scores. Therefore, we executed following animal experimental researches in order to delineate the above questions. TTO were extracted by hydrodistillation and five brands of commercial TTOs were purchased from Taiwan retail market. All compositions fit with International Standard 4730 guideline for TTO. We determined anti-Staphylococcal activity and safety evaluation for skin irritations of TTOs in rats. The antibacterial effects of 12 kinds of self extracted and commercial TTO’ s components were measured by agar well diffusion method. Terpinolene (MIC 6.25%, MBC 100%), α-terpinene (MIC 6.25%, MBC 25%), and α-terpineol (MIC 10%, MBC 40%) were the major components in TTOs and exhibited most potent antibacterial activity. According to the above results, we designed a TTO formula from these anti-bactieral compounds. TTO formula was more effective an-bacterial acitivity than extracted TTO but less effective than commercial one. Allergic contact dermatitis model was established by neomycin irritations. The extracted TTO showed significant skin irritation at more than 2%/site, while 1,8-cineole and terpinen-4-ol showed no significant dermal toxicity. Continued smear of 2%/site TTO on Wistar rats skin for 2.
(10) 28 days showed no significant alteration of serum GOT, GPT, BUN and creatinine level in rats in. The above result suggested 2%/site of TTO smear on skin for 28 days did not cause damage in the liver and kidney function.. According to the evidence-based literature review about the efficacy and safety of TTO for acne treatment and our experimental research, TTOs showed antibacterial activity against Staphylococcus aureus. Topical used with low dose of TTOs rather than oral administration will not cause kidney or liver toxicity. Key words ：Melaleuca alternifolia, tea tree oil, skin irritation, acne, evidence-based medicine, Staphylococcus aureus. 3.
(11) 第一章 緒論 第一節 研究背景 痤瘡又名青春痘，中醫古籍所稱肺風粉刺 (其他痤瘡)、面皰 (痘 瘡狀痤瘡)、粉刺、嗣面 (其他痤瘡)、酒刺等。其好發於皮脂分泌旺 盛之部位，如臉部、頭皮、前胸、後背、頸項等，自古以來一直困擾 著諸多荳蔻年華的少男少女，也是國人皮膚最常見的疾患之一。痤瘡 因多發於面部，不僅會影響外貌美觀，更會讓患者產生尷尬、焦慮及 羞愧之心，造成嚴重之社交障礙及就業困擾。依據 Collier 等人針對 1013 個 20 歲以上成年人所作的研究顯示，隨著年齡上升其盛行率逐 年下降，而年紀較長之女性則較同年齡男性有較高之痤瘡發生率。男 性與女性發生率分別為 20-29 歲 42.5, 50.9 %；30-39 歲 20.1, 35.2 %； 40-49 歲 12.0, 26.3 %；50 歲以上 7.3, 15.3 %1。痤瘡的流行病學研究 在台灣尚不多見，蔡旻情於 2006 年指出高雄縣 4076 名及澎湖馬公市 3274 名國小學童，發炎性青春痘及粉刺之盛行率分別為 12.6 %, 5.0 % 及 6.9 %, 10.4 %，而該次研究調查最早出現粉刺的年齡為六歲 2。 Warner 依照痤瘡不同的分級給予不同的治療方式，例如第一型 的痤瘡主要為粉刺經常伴隨有小部分發炎的丘疹 (papules)或膿疱 (pustules)，但未有疤痕存在時，則可選擇外用 retinoid, benzoyl peroxide, azelaic acid 或 salicylic acid 等 3。痤瘡之治療通常除了抗生素與抗發 炎用藥，也有許多中草藥、民間或經驗療法。雖然解決面皰的問題， 應該由多個面向著手，例如針對其抗發炎、抗菌、抑制皮脂分泌與角 質軟化等。國內現狀有許多含藥化妝品、含中草藥宣稱有治療痤瘡效 果之藥妝用品、清潔用品等，但療效與不良反應是否有確切實證基 礎，以往並未有人討論。此外，我們實驗室執行衛生署藥物食品檢驗 局「植物萃取物（含中藥成分）化粧品安全性評估與檢驗方法之研究」 4.
(12) (DOH96-FD-1004)計畫時，調查市售品最常使用於抗痘化粧產品相關 之植物萃取物前 20 名，結果如表一所示，繼而利用美國國家生物技 術資訊中心 4、Elsevier Science Direct On Site (SDOS) Database、Ovid Medline Database、PubMed 等資料庫搜尋 1987-2007 年間相關科學期 刊論文，結果發現植物萃取物用於進行抗痘研究之論文極多。因此我 們針對市售品中最常添加的植物，進行其抗痘活性論文的蒐集與評 估，其論文摘要整理如表一。利用此文獻整理，分析常添加於抗痘產 品的植物萃取物，是否有其功能與必要性。其毒性相關論文摘要整理 如表二，藉以進行常用植物萃取物的風險評估。文獻結果顯示：茶樹 精油具廣泛適用性及頗多的不良反應報告，因此本論文將針對其抗. 痘活性及毒性進行系統之評估。. 5.
(13) 表一、植物萃取物與抗痘相關之科學論文 排名. 植物. 中文名. 實驗方式 Antimicrobial sebum or sebaceous AB, AE NA AA NA AB, AE NA AA, AB, AE NA. keratolytic K NA NA K. 參考文獻. No.4. Hamamelis virginiana Aloe barbadensis Chamomilla recutita Camellia sinensis. 金縷梅 蘆薈 洋甘菊 綠茶. Anti-inflammation IA, IB IE, IF IC IB, IC, IE, IJ. No.5. Lavandula angustifolia. 薰衣草. IB,IG, IH. AB, AG,. NA. NA. No.6. Rosmarinus officinalis. 迷迭香. IB,IE. NA. NA. Melaleuca alternifolia. 茶樹. IC, IE, IF, IM, IP. NA. NA. Glycyrrhiza glabra Cucumis sativus Citrus medica limonum. 甘草 黃瓜 檸檬. IC, IE, IF, IO NA IB. AB, AE, AF AA, AB, AD, AE, AF, AG AA, AB,AE NA AB. NA NA NA. NA NA NA. No.11. Salvia officinalis. 鼠尾草. IC, IH, IO. AB, AE. NA. NA. No.13. Morus bombycis Salix alba. 桑白皮 白柳皮. NA NA. NA NA. Vitis vinifera. 葡萄. NA. NA. [21] [62] [63]. Cinnamomum zeylanicum Aesculus hippocastanum Mentha piperita. 錫蘭肉桂 馬栗 歐薄荷. IB, ID, IJ AB IC, II AB IB, IC, ID, IE, IH, NA IJ IC, ID, IJ AB, AE, AG IB, IC, IH NA IK, IL, IM AB, AE, AF, AG. [31] [48] [49] [50] [51] [52] [53] [54] [55] [56] [57] [58] [59] [60] [15] [61]. NA NA NA. NA NA NA. [60] [64] [65] [66] [67] [68] [69] [70] [33] [68] [71] [72] [73] [74] [75] [76]. No.1 No.2. No.8 No.9. No.16. 6. [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] [14] [15] [16] [17] [18] [19] [20] [21] [22] [23] [24] [25] [26] [27] [28] [29] [30] [31] 32] [33] [27] [33] [34] [35] [36] [37] [38] [39] [40] [41] [42] [43] [44] [45] [46] [47].
(14) 表一、植物萃取物與抗痘相關之科學論文(續) 排名. 植物. No.16. Eucalyptus globulus. No.20. Calendula officinalis Portulaca oleracea Cedrus atlanlica Citrus aurantium dulcis. 實驗方式 Anti-inflammation Antimicrobial sebum or sebaceous AA, AB, AE, 藍膠桉葉 IB, ID, IJ, IM NA AF 金盞花 IM, IN AB, AE, AF NA 馬齒莧 NA NA NA 銀雪松樹 IB AE NA IB, IC, ID, IE, IJ, 酸橙(枳實) AB, AE NA IN 中文名. keratolytic NA NA NA NA NA. 參考文獻 [77] [78] [79] [80] [81] [82] [83] [84] [85] [7] [86] [87] [88] [89] [90] [91] [92] [93] [94] [95] [96] [97] [98] [99] [100]. 註：Anti-inflammation: IA: UV erythema test, IB: carrageenan rat paw oedema, IC: Cyclooxygenase-2 (COX-2), ID: NO, IE: prostaglandin (PGE), IF: TNF-α, IG: Free radical scavenging activity, IH: Croton oil-induced ear edema in mice, II: air pouch model in rats, IJ: NOS, IK: Xylene-induced ear oedema, IL: cotton-pellet granuloma, IM: Reactive oxygen species (ROS), IN: 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)-induced inflammation in mice, IO: 5-lipoxygenase (5-LO), IP: Histamine diphosphate Antimicrobial: AA: Propionibacterium acnes; AB: Staphylococcus aureus; AC: Propionibacterium granulosum; AD: Malassezia furfur, AE: Others, AF: Staphylococcus epidermidis, AG: Candida albicans Keratolytic: K NA: Not available. 7.
(15) 表二、常用於抗痘化粧品之植物萃取物的毒性研究及其使用濃度或劑量 排名. 植物. 中文名. Hamamelis virginiana Aloe barbadensis Chamomilla recutita. 金縷梅 蘆薈 洋甘菊. No.4. Camellia sinensis. 綠茶. No.5. Lavandula angustifolia. 薰衣草. No.6. Rosmarinus officinalis. 迷迭香. Melaleuca alternifolia. 茶樹. No.1 No.2. No.8. Glycyrrhiza glabra. 甘草. No.9. Cucumis sativus Citrus medica limonum. 黃瓜 檸檬. Salvia officinalis. 鼠尾草. Morus bombycis. 桑白皮. No.11. 潛在毒性 NA 1.產生自由基，降低 human skin fibroblast cells 存活率 1.過敏性結膜炎 2.接觸性蕁麻疹 1.肝毒性 2.產生自由基 1.光過敏性 2.水萃物之動物(老鼠)試驗有神經毒性 1.成分 1,8-cineole 注射誘發小鼠足腫發炎 2.接觸及揮發毒性(鞘翅目黯金針蟲之幼蟲) 3.導致癲癇 1.接觸過敏及刺激反應 2.全身性反應(憂鬱、虛弱、運動失調、肌肉震顫) 3.耳毒性 4.細胞毒性 5.運動失調、嗜睡 1. Licorice-induced pseudoaldosteronism 2. 影響 human cytochrome P450 3A4 酵素活性 NA 1. 影響 digoxin 之傳送 2. 刺激性皮膚炎 1. 增加四氯化碳的毒性 2. 導致癲癇 1. Drug interaction. Morin 與 cyclosporin(CsA)併用，小鼠試驗 中會降 低 CsA 濃度. 8. 植物萃取物濃度 或使用劑量 NA 10% Aloe vera ND. 參考文獻 [101] [102][103][104 ]. 750mg/day. [105][106]. ND 10mg/ml. [29][107]. 20 μl 1,8-cineole LC50 = 15.9 μg/cm3 ND. [108] [109] [110]. 5-100%. [36] [111] [112] [113]. Glycyrrhizin 80-240mg/day NA 5-50% ND 3.5mg/ml ND 200 mg/kg morin. [114] [115]. [116] [117] [110] [118] [119].
(16) 表二、常用於抗痘化粧品之植物萃取物的毒性研究及其使用濃度或劑量(續) 排名 No.13. No.16. No.20. 植物. 中文名. Salix alba. 白柳皮. Vitis vinifera. 葡萄. Cinnamomum zeylanicum. 錫蘭肉桂. Aesculus hippocastanum Mentha piperita. 馬栗 歐薄荷. Eucalyptus globulus. 藍膠桉葉. Calendula officinalis Portulaca oleracea. 金盞花 馬齒莧. Cedrus atlanlica Citrus aurantium dulcis. 銀雪松樹 酸橙(枳實). 潛在毒性 含 Salicylate 與 acetaminophen 併用會增加肝、腎毒性 抗血小板活性 過敏性反應 高劑量葡萄籽前花青素萃取物 Grape seed proanthocyanidin extract (GSPE)會引起心肌細胞凋亡傷害 1.過敏性反應，口腔多型性紅斑 2.舌頭鱗狀細胞癌 3.小鼠血紅素下降 1.含 coumarin 增加出血危險 1.靜脈注射歐薄荷油導致猛爆性肺水腫 2.大鼠體內 FSH, LH 濃度增加，testosterone 濃度降低 3.增加其它併用藥物之皮膚穿透力 4.口服輕微短暫的皮膚紅疹(skin rash) 5.大鼠高劑量口服有腎毒性 1.成分 1,8-cineole 注射誘發小鼠足腫發炎 2.言語不清，運動失調，肌肉無力 3.導致癲癇 NA 1.大鼠服用水萃物後，產生骨骼肌鬆弛作用 2.高鉀離子濃度產生肌肉鬆弛作用 NA 1.過敏反應 2.急性側壁心肌梗塞 1. 2. 1. 2.. 9. 植物萃取物濃度 或使用劑量 ND. 參考文獻 [120]. GSPE 100 or 500 μg/Ml 1 grape. [121] [122]. ND 0.5-3g/kg 100mg/kg/day. [123] [124] [125] [120] [126] [127] [128] [129] [130] [108] [110] [131] [132] [133]. NA [134] [135] [136] [137] NA [138] [139].
(17) 第二節 痤瘡的病因 青春痘的發生原因在毛囊皮脂腺，因推論發生原因之不同，而有 大異其趣的治療法則；雄性激素之刺激會影響毛囊皮脂之結構，加上 遺傳或外在因素都可能造成毛囊角質細胞之過度角質化，或皮脂細胞 的皮脂過度增生分泌等 (圖一)140，最後造成毛囊平衡狀態之改變，或 表皮正常菌叢之增生等。. 圖一、痤瘡致病之規則系統 140 痤瘡有許多種的病因分類，但大致上可分為下列四種造成之因 素： (一) 毛囊的角化異常 (Retention hyperkeratosis)： 毛囊皮脂腺早期的改變是毛囊開口的過度角質化，此與毛囊口細 胞增生及角質細胞層脫屑作用降低兩者皆有關。結果皮脂及角質蛋 白在毛囊通道形成了過度角質化的栓子 (微面皰)，其發生原因不明。 (二) 皮脂分泌旺盛 (Increased sebum production)： 身體各區域的皮脂腺分布密度及分泌活性並不相同，若皮脂腺 10.
(18) 處於極度活化的狀態，將造成大量皮脂的分泌。而皮脂中的某些成 分如鯊烯 (Squalene)本身就具有導致粉刺的特性。 皮脂腺變大伴隨腎上腺雄性素增加及皮脂產生增加，而皮脂提供 了皮膚厭氧性類白喉桿菌屬正常菌叢─痤瘡桿菌生長所需之介質。細 微粉刺提供了厭氧且富脂質之環境而造成這些細菌旺盛生長，它們利 用三酸甘油酯將其水解後產生游離脂肪酸及甘油，當作營養的來源。 (三) 毛囊內細菌增生 (Propionibacterium acnes within the follicle)： 痤瘡患者毛囊內的致病菌主要是痤瘡桿菌 (Propionibacterium acnes)，它又名初油酸桿菌是一種厭氣性細菌，此外痤瘡也可能與其 他種類的細菌或黴菌有關，如金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及皮屑 芽孢菌等。痤瘡桿菌平時即存在於人體毛囊中，即使不長痤瘡的人 也有痤瘡桿菌，它是與肌膚共存的常在菌落。正常情況下，並不會危 害人體。但是當皮脂阻塞堆積於毛囊中，使它過度繁殖並釋放出某些 物質時，就會產生青春痘。一些研究報告指出，年輕的痤瘡患者每 平方公分的皮膚含有數十萬隻的痤瘡桿菌，遠遠高於正常的皮膚。 痤瘡桿菌過度繁殖後，可直接導致毛囊的發炎，更重要的是， 此菌會釋放出多種發炎物質，其中的脂化酵素會分解原先已存在於 毛囊中的皮脂成為游離脂肪酸。這些游離脂肪酸對我們的皮膚有極 強的刺激性，會使毛囊及毛囊周邊皮膚紅腫發炎，形成臨床上膿皰 性或囊腫性痤瘡。 (四) 發炎反應 (Inflammation)： 由於阻塞的角質層與過度分泌之油脂，加上細菌的孳生，很容 易在皮膚上引起發炎反應，過多的發炎物質會造成皮膚的進一步刺 激與傷害。. 11.
(19) 痤瘡桿菌增生的發炎結果，組織釋出趨化因子吸引嗜中性白血 球，藉由三酸甘油酯水解產生之游離脂肪酸，及毛囊上皮細胞破裂後 之嗜中性白血球溶酶體酵素釋出，兩者皆會引發刺激反應。促發炎脂 質及角質蛋白然後擠壓到周圍的真皮，導致丘疹及結節形成。 局部治療是痤瘡標準的治療方式，通常使用維生素A酸衍生物 (retinoids)、benzoyl peroxide及抗生素等。erythromycin與clindamycin 等局部使用之抗生素雖然對治療痤瘡有效，但單獨使用此類藥物可 能與細菌抗藥性之產生有關. 141. 。Warner等認為痤瘡治療大致上分為. 四型，依照不同之嚴重度選擇方式如圖二 3。. 12.
(20) Treatment of type 1 acne. Treatment of type 2 acne. Treatment of type 4 acne. Treatment of type 3 acne. 圖二、不同類型痤瘡之治療方式 3. 13.
(21) 第三節 澳洲茶樹簡介 茶樹基原 域. 真核域 (Eukarya). 界. 植物界 (Plantae). 門. 被子植物門 (Magnoliophyta). 綱. 雙子葉植物綱 (Magnoliopsida). 目. 桃金娘目 (Myrtales). 科. 桃金娘科 (Myrtaceae). 屬. 千層樹屬 (Melaleuca). 種. Melaleuca alternifolia 澳洲茶樹 (Tea tree，舊稱Ti tree)是被子植物門，雙子葉植物綱，. 桃金孃目，桃金孃科 (Myrtaceae)，千層樹屬 (Melaleuca)，又名白千 層屬植物，故澳洲茶樹又名互葉白千層 (Melaleuca alternifolia)。全 世界同屬植物約有 236 種，屬於澳洲原生種有 230 種，其餘產於馬來 西亞、印度尼西亞、新幾內亞、所羅門群島及位於大洋洲西南方的 新喀里多尼亞，台灣並無同屬原生植物。茶樹植物原產於澳洲新南 威爾斯省的北部及昆士蘭的南部，但西澳等各省亦有栽培 142。 澳洲茶樹為常綠喬木，全株高約6至7公尺，樹幹外皮色灰白形似 台灣常見的行道樹白千層；葉片呈披針狀、平滑革質全緣，沿著嫩枝 互生，葉基及葉尖均呈銳形，具平行葉脈3至7條，葉長約2至5公分； 花色米白為叢生之圓柱形穗狀花序，頂生於枝梢，外觀驟視之狀如瓶 刷；其果為木質蒴果緊附於枝端143,. 144. 。澳洲茶樹與國人用於泡茶之. 台灣山茶 (Camellia sinensis L. Kuntze)、園藝觀賞俗稱山茶花之日本 山茶 (Camellia japonica L.)或製作苦茶油之油茶 (Camellia oleifera Abel)不同。 14.
(22) (B). (A). 圖三、澳洲茶樹之外觀 (A)樹型與 (B)葉枝，拍攝於行政院農業委員 會種苗改良繁殖場 (台中縣新社) 第四節 澳洲茶樹精油 茶 樹 精 油 是 一 種 主 要 從 澳 洲 原 產 植 物 茶 樹 (Melaleuca alternifolia)經蒸氣蒸餾取得的揮發性精油，其廣泛使用於歐洲、北美 洲，但僅有少量精油為澳洲以外所生產。茶樹精油主要是以 4-松油醇 (terpinen-4-ol) 和 1,8-桉葉油素 (1,8-cineole)的濃度規定控制其品 質。Terpinen-4-ol 是茶樹精油主要的活性成分，具有紫丁香之花香味， 且香氣柔和，其含量不應低於 30%；1,8-cineole 則有清涼的草藥氣味， 往往會使茶樹精油帶有一定的刺激性氣味，而影響油的香氣，且多數 研究者認為它對人體皮膚產生刺激性 145, 15. 146. ，所以其在茶樹精油內之.
(23) 含量應越低越好。國際標準化組織於 1996 年制定了最新的茶樹油國 際標準，即 ISO 4730-1996，規定了茶樹油中 14 種化合物的濃度，如 表三 36, 147。. 表三、:茶樹精油之組成 Composition (%) ISO 4730 range a ≥30b 10-28 5-13 ≤15c 1.5-5 0.5-12 1-6 1.5-8 Trace-7 Trace-8 0.5-4 Trace-3.5 Trace-3 Trace-1.5. Components Terpinen-4-ol γ -Terpinene α-Terpinene 1,8-Cineole Terpinolene ρ -Cymene α-Pinene α-Terpineol Aromadendrene δ -Cadinene Limonene Sabinene Globulol Viridiflorol a. ISO 4730, International Organisation for Standardisation standard no. 4730. No upper limit is set, although 48% has been proposed. c No lower limit is set. b. 茶樹精油之主成分為萜類碳氫化合物，含有單萜類、倍半萜及其 相關的醇化物。萜類是一種揮發性、芳香族的碳氫化合物，亦可被視 為 isoprene (化學式為 C5H8)之聚合物。早期的研究報告指出茶樹精油 的組成包括 12. 148. 、21. 149. 和 48. 150. 種成分。1989 年 Brophy 及同仁們. 在一篇創新的文章中以氣相層析儀及氣相層析質譜儀檢驗了 800 種 茶樹精油的樣品，報告指出約有 100 種成分及其濃度範圍 151。 依照ISO 4730的規範，茶樹精油相對密度介於0.885-0.906之間， 且僅微溶於水，可混溶於非極性溶媒。茶樹精油成分的物理及化學 性質如表四。 16.
(24) 表四、茶樹精油成分之性質 Composition. Chemical formula C10H18O C10H16 C10H16 C10H18O C10H16 C10H14 C10H16 C10H18O C15H24 C15H24 C10H16 C10H16 C15H26O. Type of compound. Solubility (ppm) a 1,491 1.0 8.2 907 4.3 6.2 0.57 1,827. Log Kow b. Terpinen-4-ol Monocyclic terpene alcohol 3.26 γ -Terpinene Monocyclic terpene 4.36 α-Terpinene Monocyclic terpene 4.25 1,8-Cineole Monocyclic terpene alcohol 2.84 α-Terpinolene Monocyclic terpene 4.24 ρ-Cymene Monocyclic terpene (+)-α-Pinene Dicyclic terpene 4.44 α-Terpineol Monocyclic terpene alcohol 3.28 Aromadendrene Sesquiterpene δ -Cadinene Sesquiterpene (+)-Limonene Monocyclic terpene 1.0 4.38 Sabinene Dicyclic monoterpene Globulol Sesquiterpene alcohol a Reference from Flav. Fragr. J. 14:322–332. b Kow octanol-water partition coefficient, reference from J. Chromatogr. A 864:221–228.. 茶樹精油於現今市面上作為天然局部抗微生物及抗發炎製劑， 其使用濃度介於 0.5 %到 100 %之間。隨著使用濃度的增加就更會有 茶樹精油相關的皮膚反應，包括過敏性接觸皮膚炎，但直到最近關 於茶樹精油造成過敏性接觸皮膚炎之報導個案仍少於 50 件 152。亦有 多位學者研究其精油製成含漱劑用於牙齒及口腔衛生；其他外用劑型 可用於燒燙傷、刀傷、擦傷、被昆蟲叮咬與治療頭皮屑等. 153. 。茶樹. 精油亦曾進行包括痤瘡、足癬及陰道炎之體內臨床試驗 154-156。. 第五節 研究目的 根據上述文獻之回顧，發現茶樹精油在痤瘡治療經驗上毀譽參 半，因此我們利用實證醫學文獻評值方式，以確立療效及不良反應之 效度。實證醫學之文獻評估方法講求以現有能取得之最佳證據，經過 嚴格評讀後，運用於最適當之病患照護。有許多研究因為有意或無心 的設計不佳，如隨機分派之方式錯誤，或根本未有隨機分派之機制，. 17.
(25) 有些則是雙盲設計付之闕如。如果實驗設計不當，則再完美的數據呈 現也不值一哂；反之若經過良好隨機分配、雙盲設計的臨床試驗，且 有退出試驗之詳細規則及記錄，則能夠除去人為操作之斧鑿痕跡，而 能真正呈現公正客觀的研究成果。 鑒於替代療法之研究成果變異性頗大，一些未有顯著療效之文獻 常常未能付梓，所以Jadad等學者於 1996 年發表了評估隨機臨床試驗 品質之文章，文中描述了依照隨機、雙盲、退出研究之內容，若全部 符合則品質最高為 5 分，反之則最低為 0 分，一般認為得分在 2 分 (含) 以下，其研究品質就有待商榷了。Jadad評分法及評估項目如表九。 本研究即是利用Medline, EMBASE, Cochrane及PubMed等資料庫，以 茶樹精油及痤瘡為關鍵字，經電腦搜尋相關對照試驗與個案報告文 獻，再以Jadad score作為研究品質評定之工具，確認結果之效度。探 討澳洲茶樹精油之治療活性成分及適當治療濃度，以及經確認之各 種影響人體之毒性成分與最低安全濃度，並且根據「含中藥藥膠布臨 床前 (動物)安全性評估及人體貼膚測試規範」之基礎動物實驗來探討 其潛在的不良反應，且利用抑制金黃色葡萄球菌之能力做為評估抗痤 瘡之活性。. 18.
(26) 本實驗之流程圖. 澳洲茶樹 水蒸氣蒸餾 茶樹精油. 品質管制. 依照 ISO 4730 茶樹精油之成分 分析. 文獻回顧. Jadad score 抗痤瘡療效評估. 文獻回顧. 抗金黃葡萄球菌活性. Jadad score 安全性評估. 文獻回顧. 19. 1. 單一劑量皮膚毒性試驗 2. 塗抹 28 天之肝腎毒性評估.
(27) 第二章 茶樹精油之品質管制 第一節 前言 蒸氣蒸餾方式是萃取茶樹精油最適當之過程，不僅是其在萃取過 程中對精油組成之影響最小，亦因為蒸氣具有易取得、價廉且無 (化 學)毒害之特性，其僅需在較低的壓力 (大氣壓力)下操作且可以回收 循 環 再 利 用 。 所 以 市 售 茶 樹 精 油 大 多 以 水 蒸 氣 蒸 餾 法 (water distillation或hydrodistillation)取得。有些精油易溶於水，但茶樹精油 溶於水之程度有限，其最有價值之成分terpinen-4-ol則微溶於水，因 此會有部分的terpinen-4-ol在蒸餾過程中隨著新鮮蒸氣被移除。茶樹 精油主要產地澳洲在 1968 年規範茶樹精油萃取過程中不得破壞其內 部組成，而其定義亦被International Standards Organisation (ISO)所沿 用，若以其它技術取得，茶樹精油的化學組成將會有些微差異。其後 茶 樹 精 油 的 標 準 在 澳 洲 (Standards Australia 1997) 及 國 際 間 (International Standards Organisation 1996)皆更新定義為「以蒸氣蒸餾 澳洲茶樹 (互葉白千層)、狹葉白千層、疏花白千層及其他白千層屬之 葉及細枝獲得之精油，且符合國際標準之對此油之要求者」147, 157。. 第二節、實驗部份 一、材料及設備 澳洲茶樹之葉、細枝 (直徑小於 0.3 公分)及粗枝 (直徑大於等於 0.3 公分)。 水蒸氣蒸餾萃取裝置：包含萃取槽、水蒸氣產生器、冷凝管與錐 形瓶集液器等。 精油含量測定之裝置 (Clevenger-type apparatus)：包含精油定量 受器 (輕油集油器)、格拉罕氏冷凝管 (Grahm condenser)及 1 公升磨 20.
(28) 砂口圓底燒瓶。 硬殼加熱包 (Glascol及Fargo，容量 1000 mL)。 二、茶樹精油之製備 1. 水蒸氣蒸餾 以行政院農業委員會種苗改良繁殖場張定霖課長鑑定採集之澳 洲茶樹之葉 (foliage)及枝切碎後，置入不鏽鋼圓形萃取槽中，由水蒸 氣產生器將蒸氣導入萃取槽中，經冷凝管冷卻後，由矽膠管導入集 液器中，蒸氣蒸餾 2 小時後收集精油，隨後靜置 1 小時取油層。水蒸 氣蒸餾萃取裝置如圖四，依照上述實驗方法獲得之茶樹精油代號為 TTO-A (萃自葉及嫩枝之茶樹精油)。 冷凝管. 萃取槽. 水蒸氣產生器. 集液器. 圖四、水蒸氣蒸餾萃取裝置 2. 精油含量測定 澳洲茶樹之葉及枝切碎後，置入圓底燒瓶中，並加入 750~900 mL 之二次水，經充份混合後，加 1~2 mL的二甲苯至精油定量受器中， 將燒瓶與精油受器及冷凝管相接，然後加熱微沸 6 小時後收集精 油，並用乙醚洗滌集油器，待乙醚揮發後計算精油的產率。精油含 21.
(29) 量測定裝置如圖五。. (A) 精油定量受器 (輕油集油器). (B) 冷凝管. (C) 精油蒸餾裝置. 圖五、茶樹精油含量測定之裝置. 三、茶樹精油之氣相層析質譜儀圖譜與指標成分之定量 1. 利用GC-MS分析茶樹精油及其標準品 茶樹精油中的主要成分為具有揮發性的物質，並且根據茶樹精 油 ISO 4730 的規定，購入十二種標準品 (如表五)，隨後利用 GC-MS 分析標準品的滯留時間與茶樹精油之指紋圖譜。. 2. 氣相層析質譜儀之條件 茶樹精油及標準品分析之 GC-MS 分析條件 採用DB-5MS (0.25 mm x 30 m, film: 0.25 μm)氣相層析管柱以氣 相層析儀 (GC-MS)進行溫度梯度升溫沖提，起始溫度為50 ℃維持3 分鐘後，以每分鐘20.0 ℃上升至250.0 ℃，並在250.0 ℃維持5分鐘， 再以相同速率上升至300.0 ℃維持3分鐘，隨後將樣品沖洗乾淨，並 配合NIST/EPA/NIH質譜資料庫比對。其餘控制條件如下： 22.
(30) Column Oven Temp. :50.0 °C Injection Mode :Split Pressure :73.0 kPa Peak Report TIC Column Flow :1.27 mL/min [GCMS-QP2010] IonSourceTemp :200.00 °C Solvent Cut Time :2.00 min Detector Gain :0.00 kV. Injection Temp. :300.00 °C Flow Control Mode :Pressure Total Flow :16.9 mL/min Purge Flow :3.0 mL/min Linear Velocity :40.8 cm/sec Interface Temp. :200.00 °C Detector Gain Mode :Relative Threshold :1000. 3. 檢品配製 由網路、化工材料行及百貨公司購買 5 種不同之茶樹精油如表 六，另購入十二種茶樹精油成分標準品。取茶樹精油及成分樣品 2 μl 溶於 998 μl的甲醇中，以 1:100 分流方式注入 1 μl樣品溶液於 GC-MS 中，經上述控制條件分析後，滯留時間如表五。. 23.
(31) 表五、十二種購得茶樹精油成分標準品之名稱及其 GC-MS 滯留時間 Composition. CAS No. Chemical. Molecular. Retention. structures. Weight (g/mol). Time (min). Terpinen-4-ol. 562-74-3. 154.25. 8.575. γ-Terpinene. 99-85-4. 136.1. 7.292. α-Terpinene. 99-86-5. 136.1. 6.724. 1,8-Cineole. 470-82-6. 154.25. 7.075. α-Terpinolene. 586-62-9. 136.1. 6.936. ρ-Cymene. 99-87-6. 134.22. 6.967. (+)-α-Pinene. 80-56-8. 136.1. 5.842. α-Terpineol. 98-55-5. 154.25. 8.692. Aromadendrene. 489-39-4. 204.35. 10.867. (+)-Limonene. 5989-27-5. 136.24. 7.017. Sabinene. 3387-41-5. 136.24. 6.350. Globulol. 489-41-8. 222.371. 11.810. 表六、市售五種茶樹精油之品牌及樣品代號 精油品牌 樣品代號. 台中化工行 西班牙 A 牌 台北化工行 1 TTO-B. TTO-C. TTO-D. 24. 台北化工行 2. 網路商店. TTO-E. TTO-F.
(32) 第三節 氣相層析質譜儀指紋圖譜分析指標成分結果 一、澳洲茶樹各部位之精油萃取結果與產率 植物部位. 葉. 葉 + 細枝. 枝. 樹枝直徑. －. ＜0.3 cm. 0.3~0.7 cm. 重. 量. 221.6 g. 213.0 g. 152.3 g. 產. 率. 2.02 %. 0.59 %. 0%. 二、茶樹精油之成分分析結果 利用水蒸氣蒸餾萃取之茶樹精油命名為TTO-A，其及市售品 (TTO-B~F)之各別成分如表七所示，結果顯示：所有茶樹精油含量皆 符合ISO 4730 之標準。 市售之茶樹精油經過上述 GC-MS 分析後，根據不同的滯留時間 與質譜數據之分析比對後，檢測得知蒸餾萃取及所有市售茶樹精油 產品，茶樹精油之活性主成分 terpinen-4-ol 含量皆大於 30 %，其中以 代號 TTO-B 之茶樹精油 terpinen-4-ol 含量最高達 53.25 %，其次為 TTO-D、TTO-F，而蒸餾萃取之 TTO-A 含量最低僅 47.89 %，但仍符 合 ISO 4730 所訂定應大於等於 30 %之規範。 茶樹精油主要之毒性成分 1,8-cineole 之含量皆小於 15 %，其中 以代號 TTO-B 含 5.28 %之 1,8-cineole 為最高，結果顯示所有之茶樹 精 油 樣 品 皆 符 合 ISO 4730 的 標 準 ， 有 些 標 示 為 微 量 之 成 分 如 aromadendrene 、 δ -cardinene 、 sabinene 、 globulol 、 viridiflorol 等 以 GM-MS 檢測時未被檢出。各成分含量之分析統計與 ISO 4730 之比較 如表七。市售品及蒸餾萃取茶樹精油 TTO-A~F 之 GC-MS 指紋圖譜 如圖六至圖十一。. 25.
(33) 表七、自行萃取與市售品之茶樹精油成分含量分析 成分. 成分含量 (%). ISO 4730 range (%). TTO-A. TTO-B. TTO-C. TTO-D. TTO-E. TTO-F. Terpinen-4-ol. ≧ 30. 47.31. 53.23. 50.37. 52.79. 50.50. 51.64. γ -Terpinene. 10–28. 20.59. 15.51. 19.06. 18.89. 17.74. 20.46. α-Terpinene. 5-13. 9.58. 5.78. 8.33. 7.17. 7.68. 8.28. 1,8-Cineole. ≦ 15. 1.71. 5.28. 3.03. 3.33. 3.36. 3.41. Terpinolene. 1.5–5. 2.96. 2.16. 2.71. 2.30. 2.59. 2.66. ρ -Cymene. 0.5–12. 1.51. 4.77. 2.01. 1.95. 2.70. 2.53. 1–6. 1.96. 1.69. 3.65. 3.95. 1.82. 1.93. 1.5–8. 3.02. 2.90. 5.97. 2.08. 3.31. 2.73. Aromadendrene. Traces– 7. 0.00. 0.46. 0.00. 0.00. 0.00. 0.00. δ -Cadinene. Traces– 8. 0.47. 0.72. 0.00. 0.34. 0.32. 0.46. Limonene. 0.5–4. 1.55. 2.75. 2.73. 0.84. 0.82. 0.85. Sabinene. Traces– 3.5. 0.26. 0.06. 0.00. 0.15. 0.00. 0.00. Globulol. Traces– 3. 0.00. 0.00. 0.00. 0.00. 0.00. 0.00. Traces– 1.5. 0.00. 0.00. 0.00. 0.00. 0.00. 0.00. α-Pinene α-Terpineol. Viridiflorol. 備註： TTO-A:葉及嫩枝蒸餾之茶樹精油，TTO-B: 台中化工行，TTO-C: 西班 牙 A 牌，TTO-D: 台北化工行 1，TTO-E: 台北化工行 2，TTO-F: 網路商店。. 蒸餾萃取之茶樹精油TTO-A中terpinen-4-ol含量較低，含量為 47.31 %。可能的原因是萃取過程中直接將新鮮茶樹葉部利用標準之 精油蒸氣蒸餾方式萃取，未添加任何有機溶媒作為輔助劑；另一方面 terpinen-4-ol微溶於水，故在新鮮水蒸氣產生時，亦有可能隨之溶於 其中，而再以分液漏斗分部分離時，因terpinen-4-ol部分存在水層未 被溶出。 結果亦顯示：蒸餾萃取茶樹精油TTO-A中有毒性之 1,8-cineole含 量亦最低 1.73 %，其次是市售品TTO-C含量為 3.03 %。同時觀察到市 售品TTO-B茶樹精油之 1,8-cineole含量最高達 5.28 %，但仍然在ISO 4730 規定小於等於 15 %之標準範圍內。. 26.
(34) 0.25. 0.00. 2.5 5.0. 5.0 7.5. (x10,000,000) TIC. 7.5 10.0. 10.0. 10.458 10.568 10.703 10.866 11.062 11.101 11.205 11.258 11.749 11.879 11.985 11.813. 2.5. 8.575. 0.00. 9.836. 0.75 7.324. 0.25. 10.458 10.567 10.702 10.865 10.906 11.060 11.202 11.250 11.325 11.749 11.985 11.810. 9.391 9.760 9.833. 8.209 8.689. 5.733 5.840 6.351 6.427 6.520 6.755 7.0156.873 6.964 7.072 7.615. 0.50. 7.612 7.800 8.033 8.204 8.689. 5.734 5.842 6.351 6.428 6.517 6.873 6.753 6.961 7.069 7.015 7.324. 8.579. (x10,000,000) 1.75 TIC. 1.50. 1.25. 1.00. 0.75. 12.5. 12.5. 圖七、TTO-B之GC-MS指紋圖譜. 27 15.0. 15.0. 17.5. 17.5. 20.0. 20.0. 22.5. 圖六、TTO-A之GC-MS指紋圖譜. 1.25. 1.00. 0.50. 22.5.
(35) 0.00. 2.5. 5.0. 0.25 10.0. 1.25. 7.5. 10.0. 11.745 11.809 11.984. 7.5. 10.455 10.565 10.700 10.750 10.825 10.902 10.862 11.058 11.100 11.201 11.254 11.324. 5.0. 9.832. (x10,000,000) TIC 8.573. 2.5. 8.684. 0.50. 7.321. 0.00. 7.609 8.033. 0.25 8.689. 11.749. 10.458 10.567 10.701 11.203 11.061. 8.225 8.274. 7.167 7.469 7.612 7.500. 6.426 6.517 6.752 6.872 6.960 7.069 7.013. 5.735 5.842. 7.323. 0.75. 6.425 6.517 6.751 6.869 6.958 7.066 7.011. 5.732 5.839. 8.578. (x10,000,000) 1.50 TIC. 1.25. 1.00. 0.50. 12.5. 圖八、TTO-C之GC-MS指紋圖譜. 1.00. 0.75. 12.5. 圖九、TTO-D之GC-MS指紋圖譜. 28 15.0 17.5 20.0 22.5. 15.0. 17.5. 20.0. 22.5.
(36) 0.25. 0.00. 2.5. 5.0 7.5. 1.50. 7.5. 10.457 10.567 10.702 10.751 10.864 10.904 11.060 11.099 11.203 11.258 11.325 11.748 11.810 11.985. 5.0. 9.834. (x10,000,000) TIC 8.576. 2.5 10.457 10.567 10.532 10.701 10.864 10.900 11.060 11.099 11.203 11.257. 9.834. 8.031 8.281 8.686. 6.350 6.426 6.516 6.751 6.783 6.872 6.959 7.068 7.012 7.161 7.610 7.475 7.323. 8.575. (x10,000,000) TIC. 8.686. 0.75. 7.323. 0.00 5.733 5.844. 0.25. 7.611 8.034. 5.731 5.840 6.351 6.426 6.517 6.872 6.752 6.960 7.068 7.008. 2.00. 1.75. 1.50. 1.25. 1.00. 0.75. 0.50. 10.0 12.5. 圖十、TTO-E之GC-MS指紋圖譜. 1.25. 1.00. 0.50. 10.0. 12.5. 圖十一、TTO-F之GC-MS指紋圖譜. 29 15.0 17.5 20.0 22.5. 15.0. 17.5. 20.0. 22.5.
(37) 第四節 討論 自然界精油依照化學結構分類可殆分為萜烯、酸、醇、醛、酯、 酮、酚、醚、內酯、芳香烴類等，而茶樹精油之主要成分以萜烯類之 衍生物為主。單萜和倍半萜為具有高度揮發性與特殊氣味的油狀液 體，其分子量較小，可用水蒸氣蒸餾獲得。此類的萜烯物質具有防腐、 消炎、抗菌、抗氧化的作用，但含高比例的萜烯化合物則不能直接用 於皮膚，需與基礎油合用。萜類化合物並非由異戊二烯 (isoprene)在 酶催化下直接聚合而成，實際上則是在植物體內的 3(R)-甲戊二羥酸 經生物轉化形成焦磷酸異戊烯酯 (isopentenyl pyrophosphate, IPP)，經 過焦磷酸異戊烯酯異構酶的催化下，轉化為焦磷酸 3,3-二甲基烯丙酯 (dimethylallyl pyrophosphate, DMAP)，DMAP再轉換為單萜、倍半萜， 或者在酶催化下合成其他萜類化合物. 159. 。植物二次代謝物生合成主. 要途徑如圖十二 160。 桃金孃科植物精油多含有萜烯類化合物，如白千層 (Melaleuca cajeputi)精油含有α-pinene (5.3 %), β-pinene (2.24 %), ρ -cymene (3.98 %), 1,8-cineole (75.48 %), α-terpineol (6.36 %) 等 ； 香 桃 木 (Mytus communis) 精 油 則 含 有 α-pinene (29.23 %), ρ -cymene (1.52 %), d-limonene (8.68 %), 1,8-cineole (38.84 %)；而易光輝等以GC-MS檢驗 市售某品牌澳洲茶樹精油則含有α-pinene (0.98 %), β-pinene (2.24 %), α-terpinene (5.89 %),. m-cymene (9.81 %), 1,8-cineole (1.05 %),. γ -terpinene (15.13 %), terpinolene (2.52 %), terpinen-4-ol (56.99 %), α-terpineol (3.62 %)等。其中ISO 4730 規範之含量未檢出者有ρ -cymene, limonene, aromadendrene, cadinene, sabinene, globulol, viridiflorol等，而 其檢出之β-pinene, m-cymene, phellandrene則未在ISO 4730 之規範 內。根據文獻指出市售茶樹精油之品質並非全然符合相關國際標準規 範，也更讓我們深切體會相關品管程序之重要，所以本研究亦分析台 30.
(38) 灣市售品。. Respiration Polysaccharides, glycosides. Photosynthesis, assimilation. Monosaccharides. Pyruvic acid. Shikimic acid Peptides Prephenic acid. Mevalonic acid. ACETIC ACID (Acetyl CoA). Aliphatic amino acids. Alkaloids 3,3-Dimethylallyl pyrophosphate. Aromatic amino acids. Cinnamic acid. Malonic acid Coumarins Polyketides. Terpenoids. Flavonoids, Other aromatics. Fatty acids Fats. 圖十二、植物二次代謝物生合成主要途徑160。 茶樹精油主要成分之變化因收成季節、播種之茶樹狀況、甚至 種 植 地 區 經 緯 度 與 高 度 而 產 生 變 化 ， 而 terpinolene, terpinen-4-ol, cis-sabinene hydrate, β-pinene等主成分之關鍵濃度也與茶樹幼苗葉片 萌發時間有關。因此採收後立即蒸餾萃取精油產率會較高，反之若採 收後未低溫保存且儲存超過數月就會影響精油之產率，蒸餾萃取精油 TTO-A之terpinen-4-ol及 1,8-cineole含量都較低，可能與精油工廠蒸氣 蒸餾製程差異與分液漏斗靜置分層後之取樣有關。至於不同產地即使 是相同之母株，植栽採收後之精油含量也會有差異，例如 2002 年張 31.
(39) 孝祺等檢測廣東省產之茶樹精油其成分大致上都符合ISO 4730 規 範，唯獨terpinolene含量低於 1.5~5 %之範圍，而濃度僅有 0.18 %。 本次實驗市售品茶樹精油含量之純度皆符合ISO 4730 標準，蒸餾 萃取之茶樹精油TTO-A完全符合ISO規定，因此我們將利用此六種不 同的茶樹精油樣品及其活性、毒性主要成分之標準品進行後續的安全 性評估試驗。此外茶樹精油的有效成分之含量與市場售價沒有成正 比的關係，不會因價格差異而出現品質明顯差異的現象。. 32.
(40) 第三章 茶樹精油之抗痤瘡療效評估 第一節 前言 所有澳洲茶樹精油的性質裡最受矚目的就是其抗微生物活性， 早期文獻記載就推測澳洲新南威爾斯省北方的Bundjalung原住民有開 採及使用茶樹植物傳統，將澳洲茶樹葉搗碎吸入精油以治療咳嗽及 感冒，或灑在傷口當作敷藥使用；或者以澳洲茶樹葉經浸泡後之浸液 治療喉嚨痛及輕微的皮膚疾病。澳洲原住民的口述歷史也曾提及「治 療湖」就是經年有澳洲茶樹葉掉落及腐爛的潟湖。先前並無單獨使用 精油的記錄，直到Penfold在1920至1930年代間發表了其抗微生物活 性的第一篇報告，他以當時最佳標準消毒劑石碳酸或酚進行測試，比 較茶樹精油及其各項組成之Rideal-Walker (RW)係數 (表八)，進而評 估澳洲茶樹及其他精油的抗微生物活性。茶樹精油的活性與酚直接 比較高出11倍，茶樹精油內許多成分的RW係數也曾被研究報告過， 包括cineole是3.5，cymene是8，linalool是13，terpinen-4-ol是13.3， 而terpineol是16。36因為此項結果，而促使茶樹精油在二次世界大戰 時成為沙場中之外傷治療劑。但這些文獻提供茶樹精油醫療價值之 證據力不足，以今日的標準觀之，其所提供的數據僅能當作逸聞或 趣談罷了。 反之，同時代的資料清楚顯示茶樹精油包括抗細菌、抗真菌、 抗病毒及抗原蟲等廣效的抗微生物活性，並非所有的體外活性皆被 完整記載描述，而僅有少數案例實際用於臨床，數據上雖然看似有 用，但到目前為止並不充分。抗微生物的活性曾被茶樹精油本身之 物理性質所妨礙 (如表四所示)。茶樹精油及其成分微溶於水，因此限 制了它們在培養基試驗時之可混溶性。有許多不同的實驗研究之調 整策略曾被用於克服此類問題，例如加入界面活性劑到肉湯或瓊脂 33.
(41) 試驗培養基中使其運用更廣泛。茶樹精油散佈在液體的培養基中， 通常會產生混濁的懸浮液，這使得要測定感受性之最終值變得困 難。通常以染料成功混合後，可當作最小抑菌濃度之可視指標。 表八、茶樹精油及組成之Rideal-Walker coefficient Material. RW coefficient. ISO 4730 range. Tea tree oil. 11.0. —. 1,8-cineole. 3.5. ≤15. ρ -cymene. 8.0. 0.5-12. linalool. 13.0. —. terpinen-4-ol. 13.3. ≥30. α- terpineol. 16.0. 1.5-8. 痤 瘡 桿 菌 (Propionibacterium acne) 、 金 黃 葡 萄 球 菌 (Staphylococcus aureus)與表皮葡萄球菌 (Staphylococcus epidermidis) 為痤瘡病灶常見的幾種菌株。而金黃色葡萄球菌與痤瘡之關係有著最 多的研究文章發表，其次為痤瘡桿菌。本研究為探討茶樹精油抗痤瘡 之有效性，選擇金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) ，以實驗來 驗證茶樹精油及其相關化合物對金黃色葡萄球菌的抑菌或殺菌能 力，來探究其對抗痤瘡之作用。. 第二節 茶樹精油作用之實證醫學探討 一、茶樹精油用於痤瘡治療之系統評價 1. 文獻來源 2007年12月以臺北醫學大學圖書館所購置之Medline, EMBASE, Cochrane及PubMed等資料庫作為搜尋基礎。澳洲茶樹之關鍵字為tea tree及Melaleuca alternifolia，痤瘡之關鍵字為acne及acne vulgaris。 2. 文獻之納入標準 34.
(42) 關 鍵 字 茶 樹 精 油 及 痤 瘡 為 以 Medline, EMBASE, Cochrane 及 PubMed等資料庫搜尋，排除非臨床試驗部份，如文獻回顧及個案報 告等。 3. 納入文獻之質量評值方法 以表九之Jadad score所規範，提出隨機分配方法、雙盲方法及退 出實驗之機制、原因說明者皆給予一分，隨機分配及雙盲方法不當者 各扣一分，總分最高為五分，最低為零分。上述第一篇僅有隨機分配 及雙盲方法而無退場機制說明，所以僅評值二分。第二篇則為隨機但 單盲試驗，所以僅能給予一分之評值。 表九、Jadad score calculation Item Was the study described as randomized (this includes words such as randomly, random, and randomization)? Was the method used to generate the sequence of randomization described and appropriate (table of random numbers, computer-generated, etc)? Was the study described as double blind? Was the method of double blinding described and appropriate (identical placebo, active placebo, dummy, etc)? Was there a description of withdrawals and dropouts? Deduct one point if the method used to generate the sequence of randomization was described and it was inappropriate (patients were allocated alternately, or according to date of birth, hospital number, etc). Deduct one point if the study was described as double blind but the method of blinding was inappropriate (e.g., comparison of tablet vs. injection with no double dummy).. Score 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 0/-1. 0/-1. 資料來源：Jadad, A.R., Moore, R.A., Carroll, D., Jenkinsen, C., Reynolds, D.J., Gavaghan, D.J., & Mcguay, H.J. (1996). Assessing the quality of reports of randomized clinical trials: Is blinding necessary? Controlled Clinical Trials, 17(1), 1-12.. 二、茶樹精油作用之實證醫學探討結果 1. 茶樹精油用於痤瘡治療之系統評價結果 經過系統性文獻回顧有關茶樹精油用於痤瘡治療之相關臨床試 驗 (clinical trials)文章共兩篇，Jadad score分別為 2 分及 1 分，如表十 所示。. 35.
(43) Enshaieh等人的研究經過 45 天的觀察，研究對象每 15 天回診一 次後，指出 5 %茶樹精油之組別降低痤瘡嚴重指數及病灶總數 (黑頭 粉刺、白頭粉刺、丘疹及結節等)都較安慰組來得高，分別為 5.75 倍 及 3.55 倍。而Bassett等人所做的單盲試驗則指出，5 %茶樹精油較 5 % benzoyl peroxide lotion有較低之不良反應發生率，兩者對發炎及未發 炎痤瘡病灶 (白頭粉刺、黑頭粉刺)都有顯著治療效果，但是茶樹精油 發生作用時間較 5 % benzoyl peroxide lotion來得慢 154。 表十、茶樹精油用於痤瘡治療之文獻摘要及Jadad評分 Enshaieh S, Jooya A, Siadat AH, Iraji F. (2007)161 RCT, (double-blind Study Design placebo-controlled study) N=60 Sample size Total lesion count (TLC) Acne severity index (ASI) Efficacy on comedones number Type of (CN) Intervention Efficacy on papules number (PPN) Efficacy on pustules number (PUN) 5 % TTO之降低ASI及TLC分別 Results/ Conclusion 為安慰組之 5.75 及 3.55 倍 5 %TTO: 10 % minimal pruritus, 3.33 % little burning sensation, Adverse effect 3.33 % minimal scaling; Placebo: 6.66 % minimal pruritus, 6.66 % little burning sensation. 2 Jadad score Reference. Bassett IB, Pannowitz DL, Barnetson RS. (1990)154 Single-blind, randomised clinical trial N=124 Reducing the number of inflamed and non-inflamed lesions (open and closed comedones). 實驗組為 5 % TTO；對照組為 5 % benzoyl peroxide lotion 實驗組較對照組少. 1. 2. 茶樹精油用於痤瘡治療之基礎研究文獻回顧 (1)茶樹精油之抗細菌活性 在1940年至1980年間僅有極少的茶樹精油抗菌活性文章發表， 先前在別處曾綜述過。1990年代初期起描述茶樹精油抗微生物活性 之文章開始在許多科學文獻中發表，雖然在不同研究中所使用的方 法間依然存在不同程度的差異，但最小抑菌濃度報告則經常相對地 36.
(44) 相似。廣泛範圍的細菌及其對茶樹精油的感受性曾被測試，有些已 發表的感受性資料整理在表十一。金黃色葡萄球菌MIC為0.5~1.25 %，MBC為1~2 %；表皮葡萄球菌MIC為0.45~1.25 %，MBC為4 %； 痤瘡桿菌MIC為0.05~0.63 %，MBC為0.5 %；Malassezia furfur之MIC 為0.03~0.12 %，MBC為0.5~1.0 %。一般而言其對厭氧性桿菌有較佳 之抗菌效果，如：中間普氏菌 (Prevotella intermedia)之MIC及MBC 均為0.003~0.1 %。大多數細菌對茶樹精油之感受性在1.0 %或更低的 濃度，曾被報告過的如皮膚共生菌葡萄球菌(Staphylococci)、微球菌 (Micrococci) 、 糞 腸 球 菌. (Enterococcus faecalis) 及 綠 膿 桿 菌. (Pseudomonas aeruginosa)等其最小抑菌濃度均大於2 %。茶樹精油本 質上絕大部分是殺菌劑，雖然其在低濃度時可能是抑菌。 早在1925年Penfold就針對澳洲茶樹及狹葉白千層研究，並以酚 係數 (RW coefficient)指出Terpinen-4-ol與α-terpineol為主要活性成分 162. 。時至今日有許多研究者以MICs及MBCs或MFCs，確認此兩化合. 化在此濃度或稍低之濃度有抗菌及抗黴活性163-168。但α-terpineol在茶 樹 精 油 中 所 佔 濃 度 並 不 高 (ISO 4730 規 範 1.5-8 %) 。 α-Pinene, β-pinene與linalool均有類似之MICs，但它們在茶樹精油中之含量亦 不高166, 169。 Nelson於體外的短期實驗發現金黃色葡萄球菌對茶樹精油有抗 藥性，其中有三株金黃色葡萄球菌在MICs為1 %時，另一株則在2 % 及16 %之MICs170。Gustafson等另發現有多重抗藥性 (Mar mutants)之 E. coli對茶樹精油之感受性亦降低 171。Davis等亦發現家庭清潔者茶 樹精油及α-terpineol對金黃葡萄球菌之感受性亦輕微降低 172 。對S. aureus, C. albicans, C. glabrata, P. aeruginosa與Enterococcus faecium 有抗藥性之菌株對茶樹精油體外亦有感受性. 37. (without.
(45) cross-resistance)。 (2)茶樹精油之抗真菌活性 痤瘡的病源菌之一Malassezia furfur就是真菌，除此之外茶樹精油 亦對白色念珠菌有效，其MIC及MBC分別為0.06-8與0.12-1；茶樹精 油之抗真菌活性文獻摘要如表十二。 (3)茶樹精油之抗病毒活性 菸草鑲嵌病毒 (Tobacco mosaic virus in tobacco plant)以100, 250 及500 ppm之茶樹精油灑在感染菸草鑲嵌病毒10天後與控制組相較， 植物葉片每平方公分有較少之損傷. 173. 。. Herpes simplex virus (HSV)以茶樹精油及eucalyptus oil實驗對 HSV之抑制濃度。4天後茶樹精油與控制組相較，分別以0.0009 %及 0.0008 % 抑 制 HSV-1 及 HSV-2 百 分 之 五 十 斑 塊 形 成 (plaque formation) 。以0.003 %之較高的濃度可分別降低HSV-1及HSV-2之 病毒量達98.2 %及93.0 %174。 Minami在2003年也以茶樹精油針對綠猴腎細胞 (Vero cell)之 HSV-1活性做研究，發現0.1 % 茶樹精油可抑制10 %斑塊形成，1 % 則可完全抑制175。 (4)茶樹精油之抗原蟲活性 Mikus等人以茶樹精油分別在403 mg/ml及0.5 mg/ml降低利什曼 原蟲 (Leishmania major)與羅得西亞錐蟲 (Trypanosoma brucei) 50 % 生長，其抗原蟲活性成分為terpinen-4-ol 176。 Viollon等人則研究顯示茶樹精油在300 mg/ml濃度時可殺死陰道 滴蟲(Trichomonas vaginalis)之所有細胞。Pena在1962年就曾以體內 試驗證實177。 (5)茶樹精油之抗發炎反應. 38.
(46) 林佩儒曾進行精油之抗發炎活性評估，茶樹精油及其水溶性成分 均可明顯抑制由LPS 誘導THP-1細胞分泌產生的TNF-α量178。 (6)結論 茶樹精油之抗痤瘡作用來自於其對毛囊狀態失衡後，大量孳生之 四 種 主 要 痤 瘡 病 源 細 菌 (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Propionibacterium acnes)、真菌 (Malassezia furfur)都有抗 菌作用，而達成降低毛囊內細菌數量之目的，進而能使痤瘡病灶儘速 恢復正常。單萜類化合物結構式之官能基會影響抗菌活性，一般而 言，抗菌強弱依次是酚類 > 醛類 > 酮類 > 醇類 > 醚類 >碳氫化合 物。醇類架構成分如terpinen-4-ol及terpineol可造成菌之蛋白質變性、 破壞細胞膜及溶解脂質。 茶樹精油於體外試驗對發炎之相關介質如COX-2、PGE、TNF-α 、 ROS及histamine diphosphate都有抑制作用。Graham等人於2004年研究 指出痤瘡桿菌會使角質細胞產生IL-1α、TNF-α和GM-CSF，且會活化 CD4+ T淋巴球，而導致毛囊發炎。茶樹精油也存在著抑制TNF-α產生 的活性，而達到抗發炎的作用，因此可推論茶樹精油對於發炎性痤瘡 病灶，能藉由減少TNF-α等發炎介質的產生，而降低發炎反應，因此 有治療痤瘡的功效。體表之角質細胞屏障若遭破壞將會產生發. 39.
(47) 表十一、茶樹精油之抗細菌活性 Bacterial species Acinetobacter baumannii Actinomyces viscosus Actinomyces spp. Bacillus cereus Bacteroides spp. Corynebacterium sp. Enterococcus faecalis E. faecium (vancomycin resistant) Escherichia coli Fusobacterium nucleatum Klebsiella pneumoniae Lactobacillus spp. Micrococcus luterus Peptostreptococcus anaerobius Porphyromonas endodentalis P. gingivalis Prevotella spp. Prevotella intermedia Propionibacterium acnes Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus S. aureus (methicillin resistant) S. epidermidis S. hominis Streptococcus pyogenes Veillonella spp.. % (vol/vol) MIC MBC 1 1 0.6 > 0.6 1 1 0.3 0.06-0.5 0.06-0.12 0.2-2 2 0.5->8 >8. Reference(s) Hammer KA, 1996 Shapiro S, 1994 Hammer KA, 2003 Griffin SG, 2000 Hammer KA, 1999 Christoph F, 2000; Griffin SG, 2000; Hammer KA, 1996 Banes-Marshall L, 2001; Griffin SG, 2000. 0.5-1. 0.5-1. Nelson RRS, 1997. 0.08-2 0.6->0.6 0.25-0.3 1-2 0.06-0.5. 0.25-4 0.25 0.25 2 0.25-6. Banes-Marshall L, 2001; Carson CF, 1995; Gustafson JE, 1998; Mann CM, 1998 Shapiro S, 1994; Takarada K, 2005 Griffin SG, 2000; Hammer KA, 1996 Hammer KA, 1999; Hammer KA, 2003 Hammer KA, 1996. 0.2-0.25. 0.03->0.6. Hammer KA, 1999; Shapiro S, 1994. 0.025-0.1. 0.025-0.1. Hammer KA, 2003. 0.11-0.25 0.03-0.25 0.003-0.1 0.05-0.63 0.08-2 1-8 0.5-1.25. 0.13->0.6 0.03 0.003-0.1 0.5 4 2->8 1-2. Shapiro S, 1994; Takarada K, 2005 Hammer KA, 1999 Hammer KA, 2003 Carson CF, 1994; Griffin SG, 2000; Raman A, 1995 Banes-Marshall L, 2001; Christoph F, 2000; Griffin SG, 2000; Mann CM, 1998 Banes-Marshall L, 2001; Griffin SG, 2000; Hammer KA, 1996 Banes-Marshall L, 2001; Carson CF, 1995; Raman A, 1995. 0.04-0.35. 0.5. Carson CF, 1995; Christoph F, 2000; Mann CM, 1998; Nelson RRS, 1997. 0.45-1.25 0.5 0.12-2 0.016-1. 4 4 0.25-4 0.03-1. Christoph F, 2000; Hammer KA, 1996; Raman A, 1995 Hammer KA, 1996 Banes-Marshall L, 2001; Carosn CF, 1996 Hammer KA, 2003. 40.
(48) 表十二、茶樹精油之抗真菌活性 Fungal species Alternaria spp. Aspergillus flavus A. fumigatus A. niger Blastoschizomyces capitatus. % (vol/vol) MIC MBC 0.016-0.12 0.06-2 0.31-0.7 2-4 0.06-2 1-2 0.016-0.4 2-8 0.25. Reference(s) Hammer KA, 2002 Griffin SG, 2000; Hammer KA, 2002; Nenoff P, 1996; Shin S, 2003 Hammer KA, 2002; Vazquez JA, 2000 Beylier MF, 1979; Griffin SG, 2000; Hammer KA, 2002 Oliva B, 2003 Banes-Marshall L, 2001; Christoph F, 2000; D'Auria FD, 2001; Ergin A, 2002; Hammer KA, 1998; Mondello F, 2003; Nenoff P, 1996; Oliva B, 2003; Vazquez JA, 2000 Banes-Marshall L, 2001; D'Auria FD, 2001; Ergin A, 2002; Hammer KA, 1998; Mondello F, 2003; Oliva B, 2003; Vazquez JA, 2000 D'Auria FD, 2001; Hammer KA, 1998; Mondello F, 2003; Oliva B, 2003 D'Auria FD, 2001; Ergin A, 2002; Vazquez JA, 2000 Hammer KA, 2002 Mondello F, 2003. Candida albicans. 0.06-8. 0.12-1. C. glabrata. 0.03-8. 0.12-0.5. C. parapsilosis C. tropicalis Cladosporium spp. Cryptococcus neoformans Epidermophyton flocossum Fusarium spp. Malassezia furfur M. sympodialis Microsporum canis M. gypseum Penicillium spp. Rhodotorula rubra Saccharomyces cerevisiae Trichophyton mentagrophytes T. rubrum T. tonsurans Trichosporon spp.. 0.03-0.5 0.12-2 0.008-0.12 0.015-0.06. 0.12-0.5 0.25-0.5 0.12-4. 0.008-0.7. 0.12-0.25. Christoph F, 2000; Hammer KA, 2002. 0.008-0.25 0.03-0.12 0.016-0.12 0.03-0.5 0.016-0.25 0.03-0.06 0.06 0.25. 0.25-2 0.5-1.0 0.06-0.12 0.25-0.5 0.25-0.5 0.5-2 0.5 0.5. Hammer KA, 2002 Hammer KA, 2000 Hammer KA, 2000 D'Auria FD, 2001; Hammer KA, 2002; Nenoff P, 1996 D'Auria FD, 2001 Hammer KA, 2002 Hammer KA, 2003 Hammer KA, 2003. 0.11-0.44. 0.25-0.5. D'Auria FD, 2001; Griffin SG, 2000; Nenoff P, 1996. 0.03-0.6 0.004-0.016 0.12-0.22. 0.25-1 0.12-0.5 0.12. Christoph F, 2000; D'Auria FD, 2001; Hammer KA, 2002; Nenoff P, 1996 Hammer KA, 2002 Hammer KA, 2003; Nenoff P, 1996. 41.
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