第四章 實驗設計與方法
4.5 實驗前準備
1. 玻璃器皿
玻璃器皿使用前需先用不含磷之清潔劑浸泡、清洗,然後以自來水沖 洗5 至 6 次,接下來則用 10﹪之鹽酸(HCl)浸泡最少一個小時,之後再 以自來水沖洗 5 至 6 次後,再以去離子水沖洗 3 至 4 次,至入烘箱中以 52℃之溫度烘乾。使用前需在其開口處封上鋁箔,置入滅菌斧中,以 1.1Kg/cm2、121℃的條件滅菌 15 分鐘(定量瓶於泡酸液清洗完後,置於 架上陰乾即可)。
2. 藻類之培養及保存
開始時先進行固態培養基的培養,固態培養基組成和液態培養基相 同但加1 % 之洋菜膠(Agar),通常可保存約 6 個月(在 4 ℃下)。藻類 每四個星期移植至新的培養皿以保持菌種的健康。另外也做液態培養基 的培養,通常可保存4 個星期(4 ℃下),四個星期後繼續做移植以保存
3. ISOTON II 之配製及電子顆粒計數器之操作
ISOTON II 之作用主要是作為電子顆粒計數器之導電溶液,也就是 說,電子顆粒計數器中所用之溶液皆為ISOTON II。ISOTON II 的配製比 例為1 公升的超純水中加入 10g 氯化鈉(NaCl),攪拌使其混合均勻,然 後以電導計測量其導電度,所需要之導電度為17mmho。若是導電度低於 17mmho,則再慢慢加入氯化鈉,攪拌均勻,直到導電度為 17mmho;相 反的,如果導電度超過了17mmho,則慢慢加入超純水,攪拌均勻,直到 導電度降至17mmho。待導電度達 17mmho 後再以 0.2µm 之濾膜過濾此溶 液,其濾液即是我們所要之 ISOTON II 溶液 ,以顆粒計數器量測到之食 鹽顆粒數空白值須小於200。
電子顆粒計數法及操作原理:
電子顆粒計數器在使用前須先暖機約半小時以使機器內之管路可抽 至真空狀態,使用前後皆須流洗管路,並補充上方之300ml ISOTON 抽取 溶液。在電子顆粒計數器內有一根玻璃管,操作中需浸入含有Isoton 稀釋 樣品的燒杯中。而在玻璃管近底端的側面具有半透膜的精密小圓孔,用以 吸取水樣。在玻璃管內外各有一電極片通以直流電,當水樣中所含之顆粒 經過圓孔時,會暫時性地干擾到電流,其干擾正比於每個顆粒的大小。所 產生的電阻則由示波器的波峰顯示,其高度正比於顆粒的多少,個別的脈 衝數由電子數位器直接記錄顯示。而水樣在量測的過程須加以攪拌以使顆 粒 均 勻 分 佈 。 電 子 顆 粒 計 數 法 適 用 於 單 顆 粒 藻 類 之 計 數 , 如 Pseudokirchneriella subcapitata。電子顆粒計數器主要條件設定如下表 4.4。本實驗採用 50μm 孔徑之毛細玻璃管,其設定之量測粒徑上下限為 2.622μm 至 30μm。量測時,所取之藻液量依生長情形而定,若藻液色澤 較深時則取1 ml,若藻液色澤較淺則取 5 ml,放入 50 ml 之量瓶內,再加
入Isoton 至 50 ml 。將之倒入燒杯,放進顆粒計數器內量測。以顯示之讀 數值扣除空白顆粒數之數值(純 Isoton 之背景值),連續三次其值相差在 2 % 者之平均值為量測值。
Table. 4.5.1 電子計數器設定之條件
項 目 數 值
滿刻度電流量 (Full scale) 10mA
極性 (Polarity) +
電流 (Currents , I) 100
粒度下限 (Diameter Lower Threshold , Tl) 2.622µm 粒度上限 (Diameter Lower Threshold , Tu) 30µm 脈衝衰減倍率 (Attenuation , A) 1
脈衝放大倍率 (Preset Gain) 1
警戒粒徑限度 (Alarm Threshold) OFF
分析量 500µL
4. 盤面光度之調整
使用單面為白色亮面具反射光線效果之木板和錫箔紙,組裝於震盪 器四周,調整木板大小及形狀,使整個震盪器盤面之光度落在64.5 ± 10﹪
μEm-2s-1 之範圍內,以減少實驗之誤差。
5. 溶氧測定儀之校正
濃度之抑制率。使用溶氧測定儀之前須先將其偵測頭以去離子水沖洗充 分濕潤後,放置一段時間觀測其在空氣中之飽和溶氧量是否為8.5 mg/L 上 下,若其值相去甚遠則需進行校正,校正方法為將電極置於 2.5 公分左右 水量之BOD 瓶(可視同 100%溼度),轉鈕至校正鍵,輸入校正值(100
% ) , 確 認 後 轉 回 一 般 測 定 鍵 , 連 續反 覆 校 正 三 次 。 每 月 定 期 更換 CLARK-TYPE 薄膜與 3M 氯化鉀電解質;若有必要時,需以亞硫酸鈉 30
%將 PROBE 表面清洗乾淨,不要殘留任何化學物質,而得 0%之 DO 溶 液,進行零點校正。