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本研究以 20 名台北市北投國中與台北市和平高中的足球選手為受試 對象,探討10 公里跑步過程中增補 OPC 溶液對黃嘌呤氧化酶變化率、尿 酸濃度、丙二醛與肌酸磷化酶之影響。每位受試者在實驗前皆詳細閱讀並 填寫告知同意書(附錄一),確認願意遵守實驗情境條件之規範及填寫健康 情況調查表(附錄二),以做為實驗過程控制的參考。受試者在運動過程中 配戴心率錶記錄其運動過程中之運動強度。

第二節 實驗設計

(一)自變項

實驗組受試者增補 OPC 溶液,控制組受試者增補安慰劑,並進行 10Km

跑步。

(二)依變項

氧化傷害相關指標,黃嘌呤氧化酶變化率、尿酸濃度、丙二醛濃度與 肌酸磷化酶濃度。

第三節 實驗日期

本研究於中華民國九十八年一月二十三日起進行相關試驗。

(一)第一批受試者實驗日期為:九十八年一月三十日至一月三十一 日,共計二天。

(二)第二批受試者實驗日期為:九十八年二月二日至二月三日,共計 二天。

第四節 實驗地點

(一)本研究之身高、體重、PACER 檢測,於台北市青江國小五人制足 球場進行。

(二)本研究之血液離心、冰存地點,於國立台灣師範大學公館校區體 育館一樓生理學實驗室進行。

(三)本研究誘發氧化傷害的10Km 跑測驗,於台灣師範大學本部操場 進行。

第五節 實驗流程

圖3-5-1 實驗流程圖

第六節 實驗儀器

本研究所採用儀器,如表 3-6-1:

表 3-6-1 實驗儀器

器材名稱 廠 牌 型 號 產 地 數量

心率表 POLAR S810i 5

高速離心機 HETTICH MIKRO 22 Germany 1

天秤 AND HR200 1

生物安全操作台 華湧 TBH-420 1

微量吸取器 GILSON P2、P10、P20、P100、

P200、P1000 France 1

體脂計 Karada Scan Japan 1

分光光度計 JASCO V550 Japan 1

溫濕度計 1

-86 Freezer℃ 1

第七節 實驗方法與步驟

(一)受試者的準備

(1)受試者在參與實驗前,對研究目的、方法與受試者須知,須完全了 解。

(2)受試者填寫健康問卷調查表與受試者同意書,並填寫最近是否服用 任何藥劑,或是有吃其他的增補品(肌酸、善存、鈣片等等)的習慣。

(3)受試者於抽血前 1 天到第 4 次抽血期間,不能飲用含有咖啡因的飲 料,不能吃水果、不得服用其他的增補品,若因生病有服用藥物,

請告知實驗人員。

(4)10Km 跑當天請穿著輕便運動服,避免因天氣濕熱增加體內的氧化

傷害。

(二)測驗人員準備

(1)備妥實驗組與控制組跑步過程中所要喝的溶液。

(2)每位測驗人員必須知道自己的工作內容,並熟悉所有操作。

(3)測驗人員須確定心率表有在運做,並且有在記錄資料。

(4)測驗人員須事先進行所有測驗流程,檢測實驗流程是否有瑕疵,確 定無誤後才可以定案施測。

(5)測驗人員於血液分析之前,須事先對所有檢體備製過程及分析儀器 全盤了解。

(三)儀器校正與設備檢視

(1)確定心率表電量是否充足,記憶體是否充足。

(2)分光光度計檢測與校正。

(3)體脂計檢測與校正。

(4)化學分析及免疫酵素全自動分析儀檢視。

(四)實施PACER 測量

受試者在進行運動試驗前(10Km 測驗)一週,先至青江國小五人制足 球場,測量來回距離為 20 公尺的 PACER 檢測,依 PACER 音樂 CD 的節奏 跑至衰竭,衰竭判定的方式為,第二次沒有跟上節奏,即停止測驗。

(五)運動試驗

16 名受試者分別完成 10Km 跑步運動,每隔 2Km 分別補充一次 OPC 溶液與安慰劑飲料。受試者於途中不得停下來休息,跑步過程中實驗人員 必須隨時提醒完成時間,督促受試者盡力跑完。

(六)血液樣本的採集

血液樣本採集由合格的醫護人員執行,採坐姿方式橈骨靜脈處抽血

15ml。採集到的血液直接由醫檢人員帶回檢驗所分析,黃嘌呤氧化酶的檢 體委託聯合醫事檢驗所代為離心後,寄至高雄醫學院做分析,MDA 則在師 大分部運動科學研究室進行分析。採血地點在台北市青江國小五人制足球 場與國立台灣師範大學和平校區操場。

(七)飲食控制

受試者於實驗前三天至實驗結束,不能食用任何水果與含咖啡因之飲

料,且若本身有在服用增補劑的選手,這段時間必須停止使用,若實驗期 間因病得吃藥,必須主動告訴研究人員,實驗期間受試者必須記錄日常飲 食內容,以供實驗參考。

(八)MDA-TBA 分析

(1) MDA 分析:本研究檢測採用 Cayman TBARS 試劑組,透過 TBARS

(Thiobarbituric Acid Reactive Substances)方法以監控 MDA 的含 量,檢測原理為透過TBA 及 MDA 於高溫(95℃)的環境下可反應 形成 MDA-TBA,而此物質即可透過吸光值 532nm 檢測,後面皆以 MDA-TBA 代表 MDA 濃度。

(2) Color Reagent 配製

530mg TBA + 50ml TBA Acetic Acid 5 倍稀釋液 + 50ml TBA Sodium Hydroxide 10 倍稀釋液。

(3) 將血漿自全血狀態中分離出來後,取 100μL 至分光比色管中。

(4) 再添加 100μ 的 TBA SDS Solution 及 4mL 的 Color Reagent。

(5) 充分混合後再以 95℃的環境下反應 1 小時,置於 4 10℃ 分鐘以快 速終止反應。

(6) 再以 1600g 於 4℃離心 10 分鐘。

(7) 最後以分光光度計(Japan, JASCO V550)於 532nm 光波長分析其

吸光值。再以預做的標準趨線換算MDA 濃度(μM)。

(8)黃嘌呤氧化酶交由高雄醫學院檢驗。尿酸、乳酸與 CPK 交由聯合醫 事檢驗所檢驗。

表3-7-1 MDA 標準液稀釋表

Test Tube MDA(μL) Water (μL) MDA 濃度(μL

A 0 1000 0

B 5 995 0.625

C 10 990 1.25

D 20 980 2.5 E 40 960 5 F 80 920 10 G 200 800 25 H 400 600 50

第八節 資料分析與處理

(一)以混合設計二因子變異數分析,進行兩組間(黃嘌呤氧化酶、尿 酸濃度、肌酸磷化酶、乳酸、丙二醛)濃度與濃度變化率的顯著 性考驗。

(二)以費雪爾氏LSD 法(Fisher’s least significant difference)進行事後 比較。

(三)本研究以皮爾森積差相關(Pearson product-moment correlation)考 驗黃嘌呤氧化酶濃度變化率與其他依變項(尿酸濃度變化率、肌酸

磷化酶濃度變化率、乳酸濃度變化率、丙二醛濃度變化率、保留 心跳率與完成時間)間的相關情形。

(四)本研究以各項顯著水準定為 α = .05。

第肆章 結果

本章將研究期間所得之數據經統計處理後予以呈現。結果內容主要分 為:受試者基本資料、運動前後黃嘌呤氧化酶(XOD)活性的變化率、運 動前後尿酸(UA)濃度的變化情形、運動前後肌酸磷化酶(CPK)濃度的 變化情形、運動前後血乳酸(LA)濃度的變化情形、運動前後丙二醛

(MDA-TBA)濃度的變化情形、運動前後各指標間的相關情形等小節進行 說明。

第一節 受試者基本資料

本研究的受試者為國、高中健康足球選手,開始時有20 人(實驗組:

10 人;控制組:10 人)參與實驗,部分受試者因受傷而無法繼續參與,因 此,測驗結束時只剩16 人(實驗組:8 人;控制組:8 人)。兩組別受試者 之年齡、身高、體重、身體質量指數(BMI)、受試者折返跑趟數、保留心 跳率、運動強度與完成時間等基本資料如表 4-1-1 所示。

本研究受試者分組方式採折返跑趟數為依據,受試者跟著PACER音樂節奏 進行折返跑,再依折返跑趟數做能力分級,趟數相同的受試者則採隨機方 式安排組別,其餘皆採對抗平衡設計安排。兩組所得PACER數據,經t test 分析,發現兩組折返跑趟數沒有顯著不同的狀況(t = -0.34;p> .05)。

Polar數據因受試者流失與操作問題,實驗結束後實驗數據僅有 15 名,

實驗組 7 名,控制組 8 名。本研究採用保留心跳率來界定運動強度,測驗 過程中記錄安靜心跳率(A)、平均運動心跳率(B)與最大心跳率(C),

運動強度=(B-A)/(C-A),實驗組的運動強度為 78 ± 8%,控制組的運動強度 為 76 ± 7%。兩組所得數據經t test分析後,發現兩組受試者運動強度沒有顯 著不同(t = 0.66;p> .05)。

受試者完成時間的數據經t test分析後,發現兩組受試者的完成時間沒有 顯著不同(t = 0.49;p> .05)。

表4-1-1 實驗組與控制組受試者個人基本資料

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