實驗材料

囊胚型態與著床率相關性所使用的小鼠品系皆為購自國 科會動物中心的ICR 小鼠，包括 4 至 8 週齡之供胚母鼠(embryo donor)、8 至 12 週齡之受胚母鼠(recipient)及 8 至 20 週齡之輸 精管切除之公鼠(vasectomy male mice)。血癌抑制因子對著床前 期胚胎發育的影響所使用的供胚小鼠品系亦購自國科會動物 中心包括 C57BL/6J 母鼠及 CBA 公鼠。C57BL/6J 母鼠及 CBA 公鼠用於自行繁殖第一子代小鼠(B6CBF1)，B6CBF1 母鼠飼養 至4 至 8 週齡作為供胚母鼠(embryo donor)、B6CBF1 公鼠飼養 至 8 至 12 週齡則用於與母鼠交配，此外仍以 ICR 母鼠作為受 胚母鼠，8 至 20 週齡之 ICR 公鼠作為輸精管切除之雄鼠，各品 系小鼠皆飼養於李茂盛婦產科診所之動物室。

貳、藥品試劑

一、下列產品購自中國化學製藥廠

動物用血清哥娜注射劑(Sergona Inj.) 動物用哥娜 500 注射劑(Gona-500 Inj.) 二、下列產品購自美國Sigma 化學公司

液體礦物油(mineral oil; M8410)、氯化鈉(NaCl;

S9888)、氯化鉀(KCl ; P5405)、磷酸二氫鉀 KH2PO4

(P5655)、硫酸鎂(MgSO4^˙7H2O; M2643)、乳酸鈉(Na Lactate 60 % syrup; L4263)、丙銅酸鈉(Na pyruvate;

P5280)、葡萄糖(glucose; G7021)、碳酸氫鈉(NaHCO3;

S4019)、水合氯化鈣(CaCl2^˙2H2O; C7902)、玻尿酸酶

(hyaluronidase, H3735)、戊巴比妥鈉 (sodium pentobarbital;

P3761)、蛋白水解酵素(proteinase; P8811)、 M16 培養液 (M16 medium; M7292)、M2 培養液(M2 medium; M7167)、

三硝基苯磺酸 (trinitrobenzenesulphonic acid, TNBS;

P2297) 、 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone, PVP;

P5288 )、牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA;

B2518)、天竺鼠血清補體(guinea pig complement serum;

S1639)、甘油(glycerol, G9012)、碘化丙啶(propidium iodide, p4170)、Triton X- 100 (t-octylphenoxypolyethoxyethanol;

T9284)、Tween 20(polyoxyethylenesorbitan monolaurate;

P-7949)、bis-benzimide (hoechst 33258, B2883)、芝加哥天 空藍Chicago Sky Blue 6B (C8679)

三、以下藥品購自美國Invitrogen 公司

青 黴 素- 鏈 黴 素 (penecillin-G streptomycin, Gibco 15140-122) 、 磷 酸 緩 衝 液 (Dulbecco’s Phosphate-buffered saline, PBS, Gibco 11500-030)、胎牛血清(Fetal bovin serum, Gibco 10270-106)、乙二胺四醋酸鹽(Ethylene Diaminetetra Acetic Acid Disodium Salt Dihydrate EDTA, Gibco 60-00-4)、小鼠血癌抑制因子重組蛋白( recombinant mouse leukemia inhibitory factor, L5158)、3,3-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride Tablet (DAB; D5905)

四、以下藥品購自德國默克公司 酚紅(Phenol red; 7241.0025)

五、以下藥品購自日本國產化學株式會社 絕對酒精(Ethanol; 2140063)

六、以下藥品購自日本和光純藥株式會社 甲醇(methanol; Wako 137-01823)

七、以下藥品購自美國INC 生物醫學公司

兔子抗二硝基酚抗體(rabbit anti-dinitrophenol; DNP, 61006) 八、以下藥品購自聯工化學廠股份有限公司

福馬林(formaldehyde solution ; 88725) 九、以下藥品購自澳大利亞Chemicon 公司

血癌抑制因子抗體(anti recombinant murine LIF, 16121102-05)

十、以下藥品購自美國Vector 公司 VECTABSTAIN ABC kit (PK-6101) 十一、以下藥品購自美國Gene Tool 公司

fluoresceinated standard control morpholino antisense oligo (31Oct00A)、fluoresceinated LIF morpholino antisense oligo (41-17-Jan01A-K-F)

參、儀器設備

一、電動電子顯示天平(Mettler Toledo, MT AB 104; Switzerland) 二、解剖顯徽鏡 (Nikon, SMZ-2B, Japan)

三、螢光顯微鏡(Nikon, LABOPHO-2, Japan)

四、二氧化碳培養箱(Heraeus Instrument, Cytoperm 2, Germany) 五、相位差顯微鏡( Nikon, Diphot 300, Japan)

六、無菌操作台(造鑫公司, CVM-420T, R.O.C.) 七、微電腦控制拉針器(Sutter Instrument Co., P-87

Flaming/Brown Micropipette Puller, U.S.A.) 八、顯微鍛燒器(Nikon, Microforge, Japan )

九、顯微操做手臂(Narishige, Micromanipulator, Japan)

肆、其他實驗器材

35mm 培養皿、90mm 培養皿、4 孔培養皿、96 孔培養 皿、酒精燈、手術針、線、鑷子、外科剪刀、30G 注射針、眼 科鑷子、止血鉗、l ml 之針筒、27G 針頭、眼科夾、載玻片、

蓋玻片、拋棄式培養液過濾器、玻璃毛細管、玻璃微 管.(Borosilicate Glass, 外徑 1.0mm，內徑 0.75mm, Sutter Instrument Co.)、含細絲之玻璃微管(Borosilicate Glass with filament, 外徑 1.0mm，內徑 0.78mm, Sutter Instrument Co.)。

第二節、實驗方法