3-1-1. 實驗藥品
(1). ethyl-2-oxazoline, EOz (ACROS) (2). Acetonitrile, ACN (TEDIA)
(3). Methyl p-toluenesulfonate (ALDRICH) (4). Potassium thioacetate, KSAc (ACROS) (5). 2,2'-dithiodipyridine (ACROS)
(6). Acetone (TEDIA)
(7). Ammonia in methanol solution, 7N (ACROS) (8). Dichloromethane, DCM (TEDIA)
(9). Hydrochloric acid, 35 % (聯工) (10). Sodium hydroxide (聯工) (11). Methanol (TEDIA)
(12). Ethanol, 99 % (NASA)
(13). Dulbecco’s modified Eagle’s medium, DMEM (GIBCO) (14). 3-(4,5-dimethylthyazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,
MTT (ICN)
(15). Trypsin 0.25 % in EDTA (GIBCO) (16). Trypan blue stain 0.4 % (GIBCO) (17). Fetal bovine serum, FBS (GIBCO) (18). Terrific broth, TB (Scharlau)
(19). 含有質體 DNA—pUHC-13-3 之大腸桿菌為清華大學生命科學系 楊嘉鈴教授所提供。
(20). Agarose (Vegonia)
(21). 5X Tris-Borate-EDTA buffer, TBE buffer(GeneMark)
(22). Ethidium bromide, EtBr (GeneMark) (23). Ampicillin, Amp (Gerbu)
(24). 10 kb DNA ladder (Violet)
mega)
25000 (ALDRICH)
-1-2. 實驗儀器
) 旋轉蒸發器 (Rotary vaccum evaporator：EYELA)
rophotometer,
(3) romatography, GPC：
(4) sizer 3000HSa：Malvern
(5) 儀 (UV/Vis spectrophotometer, UV/Vis：Perkin
(6) bing, MWCO 6000-8000, 10000：Spectrum
(7) Reader：Awareness Stat Fax 2100) (25). Loading dye 6X (Violet)
(26). Protein assay (Bio-Rad) (27). Luciferase kit #E1531 (Pro
(28). Plasmid Maxiprep Kit (Lambda) (29). Branched poly(ethylenimine) ,Mw:
3
(1
(2) 核磁共振光譜儀 (Nuclear magnetic resonance spect NMR：Varian UnityInova 500 nmr)
凝膠滲透層析儀 (Gel permeation ch Machery-Nagel NUCLEOGEL) 粒徑分析儀與界面電位儀 (Zeta
Instruments Ltd) 紫外光/可見光光譜
Elmer Lamda 2S) 透析膜 (Dialysis tu
Medical Industries)
96 孔盤酵素判讀儀 (Elisa
(8) 迷你電泳槽 (Mini Electrophoresis Apparatus MP-100：Major Science)
紫外光箱
(9) (UV light box：Major Science)
odel 6100 CO2)
ild MPS 51S)
儀 (Luminometer：Wallac 1420 Multilabel Counter,
(17) bath：TKS)
-2. 高分子合成
3-2-1.藥品純化
(10) 無菌抽風櫥 (Laminar flow：海天) (11) 恆溫培養箱 (Incubator：NAPAC M
(12) 倒立式相位差顯微鏡 (Phase contrast microscopy：W (13) 離心機 (Centrifuge：KA-1000, KUBOTA)
(14) 高壓滅菌鍋 (Autoclave：TM-329, Tomin) (15) 血球計數盤
(16) 螢光強度判讀 Perkin Elmer)
恆溫振盪水槽 (Shake
3
(1). EOz : 以 calcium hydride 除水，減壓蒸餾後使用。
(2). ACN : 以 calcium hydride 除水，蒸餾後使用。
3-2-2. 名詞縮寫
(1). PEOz-SAc：末端官能基為 thioacetate 之 poly(2-ethyl-2-oxazoline) (2). PEOz-Py：末端官能基為 2-pyridyldithio 之 poly(2-ethyl-2-oxazoline) (3). P(EOz-co-EI)：Poly(2-ethyl-2-oxazoline-co-ethylenimine)
(4). PEOz-b-P(EOz-co-EI)：Poly(2-ethyl-2-oxazoline)-block-poly(2- ethyl-2-oxazoline-co-ethylenimine)
3-2-3. 親水性高分子 Poly(2-ethyl-2-oxazoline)之合成
(1). PEOz-SAc 之合成
高 分 子 合 成 流 程 如 圖 3-1 。 取 單 官 能 基 起 始 劑 Methyl p-toluenesulfonate(MeOTs)置入 250mL 雙頸圓底燒瓶內，其中一瓶口 以血清塞封住，另一瓶口裝設冷凝管並連至真空管線，經除氣三次後 導入無氧無水之乾燥氮氣，以乾淨玻璃針筒注入 3 倍單體體積的乙 腈 。 在 油 浴 下 升 溫 至 100℃ 迴 流 ， 待 溫 度 穩 定 後 ， 再 將 2-ethyl-2-oxazoline(EOz)加入瓶中反應，反應條件如表 3-1。反應完成 後，以冰浴冷卻至 0℃並在氮氣下加入 potassium thioacetate(KSAc)固 體，在室溫下均勻攪拌反應2-3 天，使其末端導入 thioacetate(SAc)官 能基。將產物用旋轉蒸發器濃縮後溶解於丙酮，流過矽膠層析管柱以 除去鹽類和雜質，反覆進行數次。最後，用乙醚進行再沉澱純化產物，
再以真空烘箱乾燥24 小時後得到棕色的固體產物，產率約 90 %。
表 3-1. PEOz 之合成條件
PEOz1 PEOz2 PEOz3
MeOTs 0.37g(2mM) 0.19g(1mM) 0.74(4mM) EOz 20ml(200mM) KSAc 0.7g(6mM) 0.35g(3mM) 1.4g(12mM) reation time 24hr 48hr 12hr
(2). PEOz-Py 之合成
如圖3-2 所示，在雙頸圓底燒瓶中加入上述步驟得到的PEOz-SAc 與 5 倍莫耳數的 2,2'-dithiodipyridine，瓶口分別以血清塞封住及連通 真空管線，經除氣三次後導入無氧無水之乾燥氮氣，以乾淨玻璃針筒 注入含NH3的甲醇溶液，在室溫下均勻攪拌反應 1-2 天。將產物用旋 轉蒸發器濃縮後溶解於二氯甲烷，用乙醚進行再沉澱，反覆數次，最 後將得到的PEOz-Py以真空烘箱乾燥 24 小時，得到黃色的固體產物，
產率約85 %。
3-2-4. P(EOz-co-EI)之合成
陽離子高分子 P(EOz-co-EI)的合成如圖 3-3。此高分子的合成方 式為將 PEOz-Py 進行加酸水解，首先把上一步得到的 PEOz-Py 與純 水及HCl 溶液置於圓底燒瓶中，在 100℃下反應 3 小時，反應條件如 表3-2。反應結束後冷卻至室溫，用 NaOH 調整 pH 値在 9-10 之間，
再倒入分子量 3500 的透析膜中，以純水透析 3 天，將產物以旋轉蒸 發器濃縮後置於真空烘箱乾燥 24 小時，產物為黃色的膠狀物，產率 約70 %。
表 3-2. P(EOz-co-EI)之合成條件
PEOz1 PEOz2
polymer 1g 1g
water 8ml 11ml HCl solution 6ml 10ml 6ml 10ml
3-2-5. PEOz-b-P(EOz-co-EI)雙團聯共聚物之合成
雙團聯共聚物之合成如圖3-4。將PEOz-SAc及 3 倍莫耳數的 P(EOz-co-EI)置於雙頸圓底燒瓶中，瓶口分別以血清塞封住及連通真 空管線，經除氣三次後導入無氧無水之乾燥氮氣，以乾淨玻璃針筒注 入含NH3的甲醇溶液，在室溫下均勻攪拌反應2-3 天。產物以適當分 子量(6000-8000 或 10000)的透析膜於純水中透析 3 天，最後以旋轉蒸 發器濃縮後置於真空烘箱乾燥24 小時，產物為黃色的膠狀物，存放 於-20℃冰箱中備用，產率約 75 %。
MeOTs/CH3CN
N
圖3-4. PEOz-b-P(EOz-co-EI)之合成流程圖