對血管及子宮平滑肌之舒張作用 1、實驗動物:

取雄性 Sprague-Dawley (SD)大白鼠，體重 200-250 g，購自 國立陽明大學動物 中心，飼養在國立中國醫研究所動物中心，室溫控制在攝氏 20-22℃，光照與黑暗 週期為 12:12 小時，相對濕度是 55 %，餵以大白鼠飼料 (Purina Mills, Richmond, IN, USA)，自來水任其飲用，至少飼養兩週後才用於實驗。

2、實驗藥品:

(1). Acetylcholine、L-NNA (N^-Nitro-L-Arginine)、Phenylephrine 購自 Sigma-Aldrich Chemical Co﹒(St. Louis, MO, USA)。

(2). Dextrose、KCl、NaCl、CaC12、MgCl2、MgS04、NaHCO3、KH2PO4、NaH2PO4

購自 BDH Inc. (Toronto, Ontario, Canada)。

3、儀器設備：

張力轉換器 (Force displacement transducer FT-03; Grass lnstrument Co., Quincy, MA, USA)，多功能生理記錄器 (Gould RS 3800, Valley View, OH, USA)

4、血管平滑肌之製備：

(1) 血管平滑肌之製備：

取 SD 大白鼠斷頭犧牲後，迅速摘取胸主動脈血管，置於含 95% O2+ 5 % C02 混 合氣之 Krebs'溶液(含有 NaCl 118 mM、KCl 4.7 mM、MgCl21.2 mM、NaHCO325 mM、

KH₂PO₄1.2 mM、dextrose 11 mM 及 CaC1₂2.5 Mm, 用 NaOH 調 pH 值到 7.4 )中，清 除血管脂肪及結締組織，再將大白鼠胸主動脈剪成 3-4 mm 長度之血管環備用。同

一隻動物的動脈環分為 2 組，一為內皮細胞完整組，另一為去除內皮細胞組。

(2) 血管平滑肌之張力裝置:

用兩根 Z 形白金鉤將動脈環懸掛在組織浴器中(37℃)，下端固定於組織浴器的底 部，上端連接張力轉換器，加入 37℃之 Krebs'溶液。並將等長收縮(Lsometric Contraction)之張力改變，記錄於多功能生理記錄器中。調整動脈環之基礎張力 (Passive tension)為 l.8g，每隔 15 分鐘更換一次 Krebs'溶液，待血管環張力達到穩定 後(約 60-90 分鐘)，開始進行預實驗。

(3) 預試驗:

取 SD 大白鼠動脈環(去除內皮細胞組與內皮細胞完整組)，加入 Phenylephrine (PE, 0.3 μM)引起血管環收縮，收縮力至少要大於 1 g 以上，約 10 分鐘後達穩定收 縮狀態(tonic phase)，設其張力為 100%；加入 acetylcholine(Ach,3 μM; 已知的內皮 細胞依賴性血管舒張劑)，觀察舒張反應的程度，以鑑定內皮細胞的完整性。含完整 內皮細胞血管環可達 90%以上的舒張反應，而去除內皮細胞之動脈環對 ACh 無舒張 作用，表示已成功地去除內皮細胞。

5、配製吳茱萸檢品：

本實驗分取不同來源之吳茱萸藥材有：

A、 大陸吳茱萸、台灣吳茱萸、台灣賊仔樹(武陵和梨山)。

B、 大陸吳茱萸生品與炮製品。

C、 儲存一年後之台灣賊仔樹。

稱取 A、B 和 C 藥材各 1 g，加入甲醇 20 ml ，靜置 1 小時，以超音波 40℃振 盪 30 分鐘，此萃取步驟重覆兩次，混合這三次的濾液，所得之甲醇萃取液，再以

迴旋式濃縮機 (Rotatory evaporator) 在減壓狀態下濃縮 (50℃)，然後進行作冷凍乾 燥後備用。

6、血管平滑肌收縮實驗：

取 SD 大白鼠動脈 (去除內皮細胞組與內皮細胞完整組)，給予 phenylephrine (0.3 μM)，約 10 分鐘後達穩定收縮狀態，視其張力為 100%。而後加入累積濃度之檢測 藥品(0.04~0.40 mg/ml ) 或同體積 0.1%的 DMSO 溶液，其產生之舒張作用以百分比 表示，當張力回復到基礎值 (1.5 g) 時，視為完全舒張。含內皮細胞完整組，休息 一小時後，注入 L-NNA 100 μM，15 分鐘後達穩定收縮狀態，加入檢測藥品，重複 上述做法，檢測其產生之舒張作用。

7、子宮平滑肌收縮實驗：

取雌性 SD 老鼠，體重為 230 到 250 克，實驗前 24 小時用 17 β-estradiol benzoate (20 mg/kg, i.p.)處理。老鼠犧牲後，取出子宮製備約 5 毫米長標本，浸泡在 15ml 的生 理食鹽溶液(PSS：NaCl 154mM； KCl 5.6 mM； CaCl₂0.54 mM； MgCl₂0.95 mM；

NaHCO₃5.95 mM； 以及葡萄糖 2.78 mM, 用 NaOH 調 pH 值到 7.4），儀器設定 0.5 克 的張力， 通入 95% O2+5% CO2 混合氣，並且保持在 32℃，低 Ca²⁺ 溶液中，避免子 宮自主性收縮 。子宮之張力變化，經張力轉換器連接放大器和記錄器 。使用 acetylcholine (1 mM) 檢測子宮的最大收縮，直到獲得穩定收縮狀態，視其張力為 100%。而後加入累積濃度之檢測藥品 (0.04~0.40 mg/ml ) 或同體積 0.1%的 DMSO 溶液，其產生之舒張作用以百分比表示，當張力回復到基礎值 (0.5 g) 時視為完全 舒張，重複上述做法，檢測其產生之舒張作用。

B. 對人類白血球及微膠細胞之抗發炎作用