第三章 實驗材料與方法
第六節 枳實之抗氧化成分活性評估
DPPH 是一種相當穩定的自由基，其為黑紫色，在 517 nm 波長下有 強的吸收光，當 DPPH 與具有提供氫能力之抗氧化劑反應時，其顏色 會變淡，因此，在 517 nm 的吸光值就會降低，而吸光值越低，表示 自由基清除力越強，也就是抗氧化劑提供氫能力越強。其反應式：
DPPH (violet) + AH → DPPH：H (decolorized) + A
˙
實驗結果如圖五十九，橫軸代表樣品之濃度，縱軸則為樣品清除 DPPH 自由基的清除率，圖中可以清楚看到隨著樣品濃度增加，其對 DPPH 自由基的清除率也逐漸上升。
圖 五十九、DPPH 自由基的清除率
CA(酸橙)：Citrus aurantium L.；CS(甜橙)：Citrus sinensis Osbeck；
PT(綠衣枳實)：Poncirus trifoliata Raf.
由圖五十九可知：
DPPH 自由基清除能力依序為：酸橙 > 甜橙 > 綠衣枳實。
第五章 討論
本研究針對枳實與其混淆藥材進行外部形態鑑別、顯微鑑別、薄 層層析(定性分析)、高效液相層析(定性、定量分析)、總多酚含量、
總黃酮含量、抗氧化活性測定、黃麴毒素測定等實驗。所有實驗結果，
將作下列幾個主題探討：
外部形態枳實可依其外觀、顏色、瓢囊數及毛茸有無大致區別出 酸橙(Citrus aurantium L.)、甜橙(Citrus sinensis Osbeck)及綠衣枳實 (Poncirus trifoliata Raf.)。酸橙外果皮棕褐色，表面較粗糙具顆粒狀突 起；斷面中果皮為三者中最寬，約佔半徑 2/3，呈黃白色或淡棕色，
瓢囊數 9~11 瓣，深棕褐色。甜橙外果皮棕褐色，表面較酸橙細緻，
斷面中果皮寬，約佔半徑 1/3，瓢囊數 9~11 瓣，灰棕色。綠衣枳實外 果皮灰綠色，密被細絨毛；斷面中果皮約佔半徑 1/4，瓢囊數 5~7 瓣，
深棕褐色。目前市埸品多為綠衣枳實，誤用情形嚴重(71%)，收樣 17 家僅 5 家正品
[4]
。若飲片因切製角度或炮製後外觀特徵改變，不易辨 識則需做進一步檢測辨別。顯微鑑別部分，組織切片可觀察到綠衣枳實表皮細胞外被非腺毛 (鑑別特徵)，中果皮發達，細胞鬆散。酸橙油室 1~2 列，中果皮發達，
細胞較緻密，偶有草酸鈣方晶，維管束縱向及橫向分布。甜橙油室 1 列，中果皮發達，細胞緻密，扇形橙皮苷結晶遍布(鑑別特徵)，維管
束縱向及橫向分布。粉末鑑別部分，非腺毛僅存在綠衣枳實粉末，且 綠衣枳實、酸橙及甜橙皆可觀察到草酸鈣方晶，而甜橙粉末中散布橙 皮苷黃色扇形結晶。另有文獻
[34]
指出酸橙氣孔凹下，甜橙氣孔突起，可能因收得藥材經炒製，外果皮已有受損情形，並不易觀察到。
薄層層析鑑定中發現，在臺灣中藥典
[1]
展開溶媒【正丁醇：冰醋 酸：水(4：1：5) 混液之上層溶液】中，偽品綠衣枳實在 Rf
= 0.36 處 指標成分 synephrine 處僅微淡粉紅呈色，而正品則有較深呈色以鑑別。進一步添加黃酮類指標成分(naringin、neohesperidin、hesperidin)，經 過三種展開溶媒試驗比對後，在中藥檢驗方法專輯八之展開溶媒【正 丁醇：水：冰醋酸（7：2：1）】中可清楚分辨特徵黃酮類指標成分 R
f
值(naringin = 0.53，neohesperidin = 0.48，hesperidin = 0.50 )進而判 定基原為何。高效液相層析成分定性與定量部分，偽品綠衣枳實在指紋圖譜中 未發現滯留時間 42.2 分鐘的指標成分 synephrine 波峰。而酸橙與甜 橙在滯留時間 18.0 分鐘的特徵指標成分 neohesperidin 之波峰(酸橙鑑 別特徵)加以區分，在 60 分鐘的指紋圖譜中鑑別。以指標成分 synephrine 含量多寡加以區分三種品項，則甜橙(0.60%) >酸橙(0.44%)
>> 綠 衣 枳 實 ( 未 檢 出 ) 。 另 有 文 獻
[25]
指 出 綠 衣 枳 實 中 含 有 辛 弗 林 (synephrine)且質量分數達 5.511%，高於其他枳實中藥材。然而在實驗中十批綠衣枳實並未測得 synephrine，推測可能與採收季節有關。
黃麴毒素檢測中，綠衣枳實取樣三批檢出三批；酸橙取樣三批檢 出二批﹔甜橙取樣三批檢出一批；雖皆未超過行政院衛生署規定限量 (15 ppb)，但考量枳實採收來源為自落的果實，極易因地面潮溼而受 真菌污染，黃麴毒素含量應加以重視。
抗氧化成分分析中，綠衣枳實中以多酚類含量較高，酸橙以黃酮 類含量較高，而甜橙多酚類及黃酮類含量均高。然而在抗氧化能力分 析中，抗氧化能力依序為酸橙 > 甜橙 > 綠衣枳實，可能與酸橙中黃 酮類成分之協同抗氧化作用有關
[50]
。枳實有破氣消積、化痰散痞的功用，其黃酮類成分(如 naringin 及 hesperidin)與胃腸道功能
[51]
有關，而生物鹼類成分(如 synephrine) 與增加代謝率有關，臨床廣泛應用於減重[52]
(如 bitter orange extract) 及改善胃腸道功能(如枳實消痞丸)，說明其藥理作用的多樣化。其相 對應的品質標準也應是多種指標的綜合，單純評估一類成分含量是片 面的。若以品質管制角度，應對不同來源的枳實訂定不同的指標成分，其中綠衣枳實明顯不符合臺灣中藥典規範，市場上使用有待改進。
第六章 結論
本研究對枳實與其混淆藥材，從歷代本草學文獻、植物學、藥理 學探討及對今臺灣市售枳實進行基原鑑定與品質評估。
枳實在臺灣市售品可分為三種：
A. 綠衣枳實 Poncirus trifoliata (L.) Raf.
B. 酸橙 Citrus aurantium L.
C. 甜橙 Citrus sinensis Osbeck
1. 外觀鑑定可先由瓢囊數 7 以下及表皮綠褐色、被茸毛而將偽品綠 衣枳實區分出。正品包含酸橙與甜橙則可由瓢囊形態、中果皮氣 味有所差異分別。
2. 顯微鑑定綠衣枳實果皮有非腺毛。甜橙有扇形橙皮苷結晶遍佈。
3. 薄層層析鑑定綠衣枳實在臺灣中藥典收錄溶媒【正丁醇：冰醋酸：
水 (4：1：5) 混液之上層溶液】展開後，在 R
f
= 0.36 處有微淡粉 紅點。若無對照藥材，可逕行【正丁醇：水：冰醋酸 (7：2：1）】 極性較低之展開溶媒進行黃酮類化合物分析，確認基原。4. 高效液相層析鑑定綠衣枳實並未檢出 synephrine，明顯不符合臺灣 中藥典的規範。在黃酮類化合物指標成分分析中，偽品綠衣枳實 含 naringin，正品酸橙含 naringin、neohesperidin、hesperidin，正
品甜橙含 hesperidin。正品藥材均符合藥典辛弗林(synephrine)不 得少於 0.30% 規範。
5. 黃麴毒素檢測中雖有檢出，然而並未超出國家規範。
6. 抗氧化成分分析中酸橙黃酮化合物含量較高，甜橙多酚含量較高。
而 DPPH 抗自由基活性評估依序為酸橙 > 甜橙 > 綠衣枳實(多 酚含量最高)。
中藥枳實正品品種從上古時代枸橘(綠衣枳實)，逐漸演變成地區習用 品(褔建、廣東)。現今正品則以酸橙為主流，甜橙則在近代(中華人民 共和國藥典 1985 始)收載。這是由於經過長時間的臨床選擇，枸橘(綠 衣枳實)肉薄且有臭氣，酸橙肉厚且香氣濃烈，甜橙留待成熟後經濟 價值更高。本研究呈現臺灣市場枳實藥材之現況，品質管制並非一時 之工作，枳實由於採收方式(落地果實)及採收季節(初夏)，易受霉茵 污染，黃麴毒素含量實應加強管制。
第七章 參考文獻
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