第三章 實驗材料與方法
第二節 枳實與其混淆藥材薄層層析之指標成分鑑定
此實驗使用了三種萃取方法與三種展開溶媒系統，再經由一再的比較 選擇較好的分析方法。
一、萃取方法之比較
用來選擇較好之萃取方法所使用的溶媒系統，為臺灣中藥典
[1]
之展 開溶媒。【正丁醇：冰醋酸：水 (4：1：5)混液之上層溶液】
萃取方法一
修飾中華中藥典 2004－1%茚三酮 (Ninhydrin)/可見光 檢出
1: Synephrine (辛弗林) (0.5 mg/mL)，5μL 2: CS sample 1，5μL
3: CA sample 2，5μL 4: CA sample 3，5μL 5: CA sample 4，5μL 6: CA sample 5，5μL 1 2 3 4 5 6
萃取方法二
中華人民共和國藥典 2010－1%茚三酮 (Ninhydrin)/可見光 檢出
萃取方法三(建議之萃取方法)
自行開發－1%茚三酮 (Ninhydrin)/可見光 檢出
圖 十六、自行開發萃取方法之薄層層析圖
1: Synephrine (辛弗林) (0.5 mg/mL)，5μL 2: CS sample 1，5μL
3: CA sample 2，5μL 4: CA sample 3，5μL 5: CA sample 4，5μL 6: CA sample 5，5μL
1: Synephrine (辛弗林) (0.5 mg/mL)，5μL 2: CS sample 1，5μL
由上三圖可知：
1. 對照標準品 synephrine (辛弗林) R
f
= 0.36。2. 方法三 萃取法所跑出的薄層層析圖(如圖十六)不拖尾，比方法一、
方法二萃取法有較好之展現；且方法三萃取僅經超音波震盪後取 其濾液，較其他二法簡便，因此選擇用方法三的萃取方法。
以方法三萃取 萃得本實驗三種品項各三批，以 synephrine (辛弗林) 為對照標準品，臺灣中藥典
[1]
之展開溶媒：【正丁醇：冰醋酸：水(4：1：5)混液之上層溶液】
圖 十七、綠衣枳實、酸橙及甜橙各三批之薄層層析圖
1：Synephrine (辛弗林) (1 mg/mL)，5μL 2、3、4： 綠衣枳實①、②、③，5μL 5、6、7： 酸橙①、②、③，5μL 8、9、10：甜橙①、②、③，5μL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
以方法三萃取 萃得臺灣產甜橙一批及本實驗甜橙各三批，以 synephrine (辛弗林)為對照標準品，臺灣中藥典
[1]
之展開溶媒：【正丁醇：冰醋酸：水(4：1：5)混液之上層溶液】
圖 十八、臺灣產甜橙與本實驗甜橙三批比較之薄層層析圖
由圖十八可知：臺灣產甜橙與三批甜橙主要斑點一致，推測臺灣產甜 橙應符合臺灣中藥典枳實之鑑別規範。
1：synephrine (辛弗林) (1 mg/mL)，5μL 2： 臺灣產甜橙，5μL
3、4、5：甜橙①、②、③，5μL
1 2 3 4 5
二、展開溶媒系統之比較
使用方法三之萃取方法來試另外三種溶媒系統(以黃酮類成分為指標) 展開溶媒一 【二氯甲烷：甲醇：水（13：7：2）之下層溶液】
呈色劑：香莢蘭醛-硫酸（Vanillin/H
2
SO4
）圖 十九、萃取樣品在展開溶媒一之薄層層析圖 (R
f
約 0.4) 1：naringin (柚皮苷) (1 mg/mL)，5μL5：neohesperidin (新橙皮苷) (1 mg/mL)，5μL 9：hesperidin (橙皮苷) (1 mg/mL)，5μL 2、3、4： 綠衣枳實①、②、③，5μL 6、7、8： 酸橙①、②、③，5μL 10、11、12：甜橙①、②、③，5μL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
展開溶媒二 【乙酸乙酯：甲醇：水 (10：2：3)】
呈色劑：茴香醛-硫酸（p-anisaldehyde/H
2
SO4
）圖 二十、萃取樣品在展開溶媒二之薄層層析圖 (R
f
約 0.2) 1：naringin (柚皮苷) (1 mg/mL)，5μL5：neohesperidin (新橙皮苷) (1 mg/mL)，5μL 9：hesperidin (橙皮苷) (1 mg/mL)，5μL 2、3、4： 綠衣枳實①、②、③，5μL 6、7、8： 酸橙①、②、③，5μL 10、11、12：甜橙①、②、③，5μL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
溶媒系統三 【正丁醇：水：冰醋酸（7：2：1）】(建議之展開溶媒) 呈色劑：10% 硫酸乙醇 (H
2
SO4
/EtOH)圖 二十一、萃取樣品在展開溶媒三之薄層層析圖 (R
f
約 0.6)由以上三組展開溶媒系統圖比較，可以看的出來：圖二十一的展開溶 媒【正丁醇：水：冰醋酸（7：2：1）】所跑出來的結果有較高的 R
f
值(約 0.6)的效果，因此分別添加黃酮標準品 naringin(橙皮苷)、neohesperidin (新橙皮苷)、hesperidin (橙皮苷)，作以下確認試驗。
1：naringin (柚皮苷) (1 mg/mL)，5μL
5：neohesperidin (新橙皮苷) (1 mg/mL)，5μL 9：hesperidin (橙皮苷) (1 mg/mL)，5μL 2、3、4： 綠衣枳實①、②、③，5μL 6、7、8： 酸橙①、②、③，5μL 10、11、12：甜橙①、②、③，5μL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
圖 二十二、酸橙添加標準品之確認試驗層析圖
由圖二十三可知：
1. 酸橙具有 naringin (柚皮苷) (line 5 具加成性)、neohesperidin (新橙 皮苷) (line 6 具加成性)、hesperidin (橙皮苷) (line 7 具加成性)
1：酸橙①，3μL
2：naringin (柚皮苷) (1 mg/mL)，3μL
3：neohesperidin (新橙皮苷) (1 mg/mL)，3μL 4：hesperidin (橙皮苷) (1 mg/mL)，3μL 5：酸橙① (3μL) + naringin (3μL)
6：酸橙① (3μL) + neohesperidin (3μL) 7：酸橙① (3μL) + hesperidin (3μL) 1 2 3 4 5 6 7
圖 二十三、甜橙添加標準品之確認試驗層析圖
由圖二十四可知：
1. 甜橙具有 hesperidin (橙皮苷) (line 7 具加成性)。
1：甜橙①，3μL
2：naringin (柚皮苷) (1 mg/mL)，3μL
3：neohesperidin (新橙皮苷) (1 mg/mL)，3μL 4：hesperidin (橙皮苷) (1 mg/mL)，3μL 5：甜橙① (3μL) + naringin (3μL)
6：甜橙① (3μL) + neohesperidin (3μL) 7：甜橙① (3μL) + hesperidin (3μL) 1 2 3 4 5 6 7
展開溶媒三 【正丁醇：水：冰醋酸（7：2：1）】
呈色劑：10% 硫酸乙醇
圖 二十四、綠衣枳實添加標準品之確認試驗層析圖
由圖二十二可知：
1. 綠衣枳實具有 naringin (line 5 具加成性)
2. 綠衣枳實不具有 neohesperidin (新橙皮苷)及 hesperidin (橙皮苷) 1：綠衣枳實①，3μL
2：naringin (柚皮苷) (1 mg/mL)，3μL 3：neohesperidin (新橙皮苷)(1 mg/mL)，3μL 4：hesperidin (橙皮苷)(1 mg/mL)，3μL 5：綠衣枳實① (3μL) + naringin (3μL) 6：綠衣枳實① (3μL) + neohesperidin (3μL) 7：綠衣枳實① (3μL) + hesperidin (3μL) 1 2 3 4 5 6 7
第三節 枳實與其混淆藥材高效液相層析之指標成分測定