第三章 實驗材料與方法
第三節 枳實與其混淆藥材高效液相層析之指標成分測定
一、標準品之高效液相色譜層析圖
枳實之四種指標成分各別滯留時間見圖二十五
圖 二十五、枳實之指標成分 naringin (柚皮苷)、hesperidin (橙皮苷)、
neohesperidin(新橙皮苷)及 synephrine(辛弗林)之層析圖 在約 13.6 min 時有 naringin (柚皮苷)peak 出現。
在約 15.4 min 時有 hesperidin (橙皮苷) peak 出現。
在約 18.0 min 時有 neohesperidin (新橙皮苷)peak 出現。
在約 42.2 min 時有 synephrine (辛弗林)peak。
由文獻
[49]
查得，在 naringin(柚皮苷)及 hesperidin(橙皮苷)後之特 徵 峰 可 能 為 neohesperidin ( 新 橙 皮 苷 ) ， 故 以 酸 橙 ② 添 加 neohesperidin(新橙皮苷)做以下確認試驗：Neohesperidin (新橙皮苷) Naringin (柚皮苷)
Naringin Hesperidin (橙皮苷)
Hesperidin
Synephrine (辛弗林)
圖 二十六、Neohesperidin (新橙皮苷)之 HPLC 色譜層析圖
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
neohesperidin
neohesperidin
neohesperidin
二、檢量線之繪製
Naringin (柚皮苷)、hesperidin (橙皮苷)、neohesperidin (新橙皮苷)及 synephrine(新弗林)標準品各自配製成一定濃度，再取配置好濃度之儲 備溶液，再依比例向下稀釋成 7 濃度：
標準品之檢量線
圖 二十九、Naringin(柚皮苷)之檢量線
圖 三十一、Neohesperidin (新橙皮苷)之檢量線
圖 三十二、Synephrine (辛弗林)之檢量線
表 十一、標準品之有效線性範圍
三、指標成分之定性及定量
酸橙檢品層析圖見圖三十三~三十五 甜橙檢品層析圖見圖三十六~三十八 綠衣枳實檢品層析圖見圖三十九~四十一 枳實四種指標成分含量見表十三
在 13.7 min 時有 naringin (柚皮苷) peak 出現。
在 15.4 min 時有 hesperidin (橙皮苷) peak 出現。
在 17.9 min 時有 neohesperidin (新橙皮苷) peak 出現。
在 42.2 min 時有 synephrine (辛弗林) peak。
standard 線性方程式 相關係數(R
2
)Naringin (柚皮苷) y = 70,979,512.4562 x + 699,568.0605 R² = 0.9995 Hesperidin (橙皮苷) y = 19,652,203.1725 x + 86,677.0350 R² = 0.9995 Neohesperidin (新橙皮苷) y = 42,168,543.5481 x - 170,373.2727 R² = 0.9997 Synephrine (辛弗林) y = 24,207,425.8732 x + 78,022.1959 R² = 0.9999
圖 三十三、酸橙(Citrus aurantium L.) ①HPLC 層析圖
圖 三十四、酸橙(Citrus aurantium L.) ②HPLC 層析圖
圖 三十五、酸橙(Citrus aurantium L.) ③HPLC 層析圖 由圖三十三~三十五可知：
三批酸橙皆含有 naringin (柚皮苷)、neohesperidin (新橙皮苷)、hesperidin (橙皮苷)成分，並含有藥 典規範之 synephrine(辛弗林)成分。
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Peak Standard
1 Naringin
圖 三十六、甜橙(Citrus sinensis Osbeck) ①HPLC 層析圖
圖 三十七、甜橙(Citrus sinensis Osbeck) ② HPLC 層析圖
圖 三十八、甜橙(Citrus sinensis Osbeck) ③ HPLC 層析圖 由圖三十六~三十八可知：
三批甜橙皆含有 hesperidin (橙皮苷)成分，並含有
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Peak Standard
2 Hesperidin
圖 三十九、綠衣枳實(Poncirus trifoliata Raf.) ①HPLC 層析圖
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Peak Standard 1 Naringin
1
1 1
表 十二、各類藥材其指標成分含量
圖 四十二、抽驗市售科學中藥之 HPLC 層析圖
由圖四十二可知：
經抽查之枳實市售科學中藥其 HPLC 層析圖譜特徵峰滯留時間與酸橙 一致，含有 naringin(柚皮苷)、neohesperidin (新橙皮苷)、hesperidin (橙 皮苷)、synephrine (辛弗林)成分。比較滯留時間，推測其基原為酸橙 (Citrus aurantium L.)。
AU
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Peak Standard
1 Naringin
第四節 枳實之黃麴毒素檢驗
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
G
2
G1
B2
B1
二、檢量線之繪製
圖 四十四、黃麴毒素 G
2
之檢量線圖 四十五、黃麴毒素 G
1
之檢量線圖 四十六、黃麴毒素 B
2
之檢量線圖 四十七、黃麴毒素 B
1
之檢量線表 十四、黃麴毒素標準品之有效線性範圍
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Fluorescence
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Fluorescence
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
G
1
G
1
圖 五十一、甜橙檢品①黃麴毒素檢驗之 HPLC 層析圖(G
2
)0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Fluorescence
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Fluorescence
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
G
2
圖 五十四、綠衣枳實檢品①黃麴毒素檢驗之 HPLC 層析圖(B
1 )
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Fluorescence
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
Fluorescence
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00
B
1
B
2
G
2
三、黃麴毒素定性及定量部分
表 十五、各藥材其黃麴毒素檢驗含量
Sample Aflatoxin ng/mL(ppb)
符合CA② G
1
0.97 是CA③ G
1
2.48 是CS① G
2
1.37 是PT① B
1
0.35 是PT② B
2
0.22 是PT③ G
2
1.13 是CA(酸橙)：Citrus aurantium L.；CS(甜橙)：Citrus sinensis Osbeck；
PT(綠衣枳實)：Poncirus trifoliata Raf.
由表十五可知：
綠衣枳實三批檢出三批；酸橙三批檢出二批；甜橙三批檢出一批；皆 符合衛生署規定中藥材黃麴毒素總量以下(15 ppb)。而單獨黃麴毒素 B