梯度沖提結果

首先在等位沖提實驗中，樣品分子之移動速度可透過 WCD 系統 所獲得之遷移路徑圖與管外時圖計算而得，並在本研究 4.3 節指出，

由一般管柱外偵測器所獲得之管外時圖，即可代表樣品在管柱中的移 動速度。在梯度沖提模式下[18,61,101]，由於移動相之組成並非固定，

在先使用溶劑強度較弱之移動相再變換為強度較強之移動相時，其 k 值亦會隨著沖提時間改變，且有波峰壓縮效應現象產生，因此樣品在 此種模式下，其在管柱中之滯留因子 k 值，則應視為一帄均值k，而 非樣品在個別移動相在等位沖提情況下所得之 k 值，由於波峰壓縮效 應[61]，在梯度沖提時，變換為溶劑強度較強之移動相時，其所表現 之 k 值，相較於在等位沖提模式下，使用同樣溶劑強度之移動相所獲 得之 k 值較大，然而欲正確計算梯度沖提模式下所表現之帄均 k 值，

需要考量許多參數，以及應用到許多繁瑣之公式，且在此類型研究上 仍有許多爭議點，在文獻中[10]，利用兩移動相在等位沖提下之個別 k 值所計算出之樣品移速則會有所誤差，因此在本實驗中，將使用 WCD 系統獲得樣品在管柱內變換移動相所得之帄均移動速率，並計 算出其差異值。以下將探討兩梯度沖提實驗之結果，並說明計算理論 板數以及樣品移速方式。

5.1.1 階梯式沖提

於階梯式沖提模式之4組實驗中，以WCD系統觀察樣品位移至管

柱位置7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17公分處的管內空 圖(圖5-1)，可看出樣品波高在9公分處開始逐漸變高，而波峰變寬程 度亦有下降之趨勢，即可看出波峰壓縮效應之現象，在實驗1中，因 前後移動相極性差異最小，故其波峰壓縮程度較不明顯。從管內時圖 (圖5-2)結果顯示，將移動相變換為溶劑強度較強之移動相後，樣品在 管柱內之移速增加，故在管內時圖可明顯看出樣品之波峰寬度變小，

且所變換之第二移動相的溶劑強度，由實驗1至4逐漸變強，故在實驗 4中，因移動相極性差異最大，即前後兩移動相對樣品的移動速度差 值越大，其波峰壓縮程度最為明顯，因此從圖5-2(d)可觀察到變換成 溶劑強度最強之第二移動相，在管柱位置7公分處之時圖波峰，產生 不規則之波形，在圖5-2(c)於管柱位置9公分處之時圖波峰，亦可觀察 到此種不規則波形產生，此不規則波形產生發生原因為在樣品受到後 端溶劑強度較強之移動相沖提時所造成之波峰變化，即變換移動相使 得樣品移速增加所導致。於文獻[3,102-103]有提及此類相關研究，其 中在文獻[3]，利用所發展之郵包理論(Parcel model)探討層析中由於時 間扭曲效應(temporal distortion effect)造成各類型不對稱波形產生；

文獻[102-103]指出，在等位沖提情況下，當選用之移動相與溶解樣

(a)實驗 1 (b)實驗 2

(c)實驗 3 (d)實驗 4

圖 5-1 階梯式沖提實驗中，當樣品抵達管柱約 7、8、9、10、11、12、

13、14、15、16、17 公分處之管內空圖結果 註：詳細實驗條件可參考圖 3-8

(a)實驗 1 (b)實驗 2

(c)實驗 3 (d)實驗 4

圖 5-2 階梯式沖提實驗中，當樣品抵達管柱約 7、8、9、10、11、12、

13、14、15、16、17 公分處之管內時圖結果 註：詳細實驗條件可參考圖 3-8

文獻[102-103] 指出，在等位沖提情況下，當選用之移動相與溶解樣 品之溶劑，兩溶劑之黏度差異過大，會造成不對稱波形產生，原因為 當移動相之黏度與溶解樣品之溶劑差異極大時，在沖提過程中，兩不 同黏度之流體接觸時其交界處會產生不穩定之情況，進而使得其波形 產生變化。而變換移動相產生之黏度差異，亦可反映在樣品移速之改 變，即變換為極性較小，黏度較低之第二移動相，樣品在管柱中之移 速會提升。樣品移速之改變，透過4組實驗之遷移路徑圖(圖5-3)可看 出；在遷移曲線斜率變化處，也就是樣品開始受變換的第二移動相所 影響，其移速開始變化的位置，約在管柱9公分位置處，且變換後之 移動相與原移動相移速差異越大，其在遷移路徑圖中所變化程度即越 明顯，而其中實驗1(圖5-3(a))中因為移動相移速差異較小，因此在管 內空圖與遷移路徑圖中變化程度較不明顯。

5.1.2 連續式沖提

於連續式沖提模式之4組實驗中，以WCD系統觀察樣品位移至管 柱位置7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17公分處的管內空 圖(圖5-4)所示，可看出樣品波高在9公分處開始逐漸變高，而波峰變 寬程度亦有稍微下降之趨勢，然而此處改變之幅度較無階梯式沖提模 式明顯。從管內時圖(圖5-5)結果顯示，將移動相變換為溶劑強度較強 之移動相後，樣品在管柱內之移速增加，故在管內時圖可明顯看出樣

(a)實驗 1 (b)實驗 2

(c)實驗 3 (d)實驗 4

圖 5-3 階梯式沖提實驗中，樣品之遷移路徑圖

樣品開始受第二移動相影響，移速開始變化的位置，約在 9 cm 處 註：詳細實驗條件可參考圖 3-8

(a)實驗 1 (b)實驗 2

(c)實驗 3 (d)實驗 4

圖 5-4 連續式沖提實驗中，當樣品抵達管柱約 7、8、9、10、11、12、

13、14、15、16、17 公分處之管內空圖結果 註：詳細實驗條件可參考圖 3-8

(a)實驗 1 (b)實驗 2

(c)實驗 3 (d)實驗 4

圖 5-5 連續式沖提實驗中，當樣品抵達管柱約 7、8、9、10、11、12、

13、14、15、16、17 公分處之管內時圖結果 註：詳細實驗條件可參考圖 3-8

品之波峰寬度變小，然而由於移動相之組成為隨時間作線性改變，移 動相在管柱中之移速變化亦較小，故管內時圖並無如階梯式沖提模式 中產生不規則波形。樣品移速之改變，透過 4 組實驗之遷移路徑圖(圖 5-6)可看出；在遷移曲線斜率變化處，也就是樣品開始受變換之第二 移動相所影響，其移速開始變化的位置，約在管柱 9 公分位置處，於 連續式沖提模式中，為隨時間將移動相成分以線性變換成第二移動相，

而不像階梯式沖提模式中瞬間變換成第二移動相，故其在遷移路徑圖 中，移速改變點較不明顯，且在實驗 4 中(圖 5-6(d))，由於變換至第 二移動相所需時間較長，故可看出其遷移曲線轉折點較不明顯，且稍 呈圓弧狀改變，非像階梯式沖提中呈現折線改變情形。