波峰壓縮效應

液相層析法發展至今，目前普遍以耐高壓之不鏽鋼管柱作為層析 分離管柱，且僅能由管柱外偵測器所接收之訊號來衡量管柱效能，在 無法直接觀測到分析物在層析管柱中的流動情形下，因此一些隱藏在 管柱中之層析現象常被忽視，在層析管柱中所發生的波峰壓縮效應 (peak compression effect)現象即為其中之一，然而波峰壓縮效應又可 以分為兩種：一為，樣品在初注入管柱時，由於樣品同時受移動相與 固定相之作用因而產生波峰壓縮效應之現象，二為，使用梯度沖提之 非線性層析系統中，由於移動相組成之變化而造成之波峰壓縮效應。

以下將介紹兩種波峰壓縮效應現象。

2.4.1 樣品注入管柱入口端之波峰壓縮效應

文獻[93-95]指出，當一樣品注入至分離管柱入口端時，樣品受到

溶劑強度較小(為與溶解樣品之溶劑相比)之移動相沖提時，會發生濃 縮 (concentrated)或聚集 (focused)之情形，稱此現象為「 On-column focusing」，並指出此原因為樣品在初注入至管柱入口端時，受固定 程度不同，並稱此現象為「Effect of solvent on focusing」，在其研究 中為利用其設計之WCD系統獲得樣品在管柱內的波峰寬度，根據其

_(s)，其應與 成正比關係。於2010年，由Gritti等人提出[13]可 1

1 k

1 1 k

分別計算空間與時間為單位之波峰寬度公式，並指出樣品初注入管柱

攝影鏡頭來記錄螢光樣品在玻璃層析管柱中分離過程，也發現有此現 象[88-89]，Yamamoto於1995年發表文獻指出，在離子交換層析系統 中，以梯度沖提模式對蛋白質進行分離時，理論板高可藉由一系列實 驗參數來進行修正[97]，之後提出更多在不同沖提模式下的理論板高 修正理論[98-100]。文獻[14]提及波峰壓縮效應對理論板數的計算也 會有所影響，而後Snyder等人對層析波峰標準偏差以及理論板高進行 修正[14-16]，且在文獻[17]特別對層析波峰壓縮效應進行理論板數探 討與修正，並使用ㄧ些常見偵測器來佐證其模擬數據，Gritti等人提 出一系列公式用於計算非線性條件下之理論板數計算[18-19]。本實驗 室亦透過自行設計之WCD系統，觀測於非線性層析實驗條件下，層 析波峰壓縮效應之現象[9,10]，並指出在梯度沖提之非線性層析系統 中，以時間單位為定義的理論板高H值與理論板數N值並不適用。其 主要原因由於式2-7~2-10是建構在樣品移動速度固定之下發展而成 的公式，但在非線性層析系統中，由於移動相之組成會隨時間改變，

樣品在不同時間會受到不同溶劑強度影響，而使樣品移動速度有所改 變，導致式2-7~2-10無法使用，故頇將此層析公式作修正才能獲得較 正確的理論板高H值以及理論板數N值。

第三章 實驗