三、方 法
1. 標準藥材鑑定----考證與切片鏡檢：搜集來之藥材經切片鏡檢，並與文
獻記載
(3,4,11,12)
之性狀及組織特徵作比對，確定為真品，才進行液相層析串聯式質譜指紋圖譜分析與建檔。
1-1：粉防己：本品為防己科（Menispermaceae）植物粉防己 Stephania
tetrandra S. Moore 之根或根莖（Fig.3），又稱之為石蟾蜍《中藥大
辭典》、瓜防己《本草原始》、漢防己《儒門事親》等。粉防己之名 稱在歷代之本草鮮少記載，但在梁代陶弘景曰：”今出宜都、建平大 而青白虛軟者良”， 宜都、建平則為湖北西北部及四川之東南部，又無”內黑文如車輻解”之記載，應非馬兜鈴科植物，此為粉防己最 早之記載。另在本草原始之漢防己下附有瓜防己圖，極像粉防己之斜 切飲片藥材。明代《品匯精要》謂防己以根大而有粉者良，應指粉防 己無誤。
【性狀】本品根剖切成呈不規則圓柱形、半圓柱形、塊状或塊片状，多少 彎曲，彎曲處有橫溝而呈結節狀瘤塊樣，彎區處有縊縮之橫溝，長約 5 ~15 ㎝，直徑約2 ~6 ㎝。未刮去栓皮者表面灰棕色，粗糙且多細 皺，具橫向突起皮孔。去栓皮者，表面灰白色，較平滑。可見殘留灰 褐色栓皮。質重而堅脆，易折，具粉質。橫斷面灰白色至灰黃色，有 排列較稀疏的放射狀紋理，具淺棕色維管束，呈放射狀紋理，紋如車 輪。氣微，味苦。主產於浙江､安徽､江西､湖北等地，集散於漢口，
故 又 名 為 漢 防 己 ， 是 為 名 稱 混 淆 原 因 之 一 。粉 防 己 含 粉 防 己 鹼 (tetrandrine)、防己諾林鹼(fangchinoline)、小檗胺(berbamine)、輪環藤 酚鹼(cyclanoline) 、二甲基粉防己鹼(dimethyltetrandrine)、氧防己鹼 (oxofangchirine)、防己斯任鹼(stephanthrine)及小檗銨(berbamine)等，
9
症
(,4)
。其化學結構可參閱（Tab.12）。【組織】粉防己根之橫切面組織圖：（Fig.4）
1. 皮層極薄，木栓細胞10 ~20 餘層，呈切線性延伸。
2. 韌皮部外緣有單個或2 ~ 3 個成群石細胞或厚壁纖維散生。韌皮部 薄壁細胞中含有許多草酸鈣結晶，除單晶以外，尚有柱狀晶、砂 晶，澱粉粒。
3. 木質部放射狀排列，導管徑約5 0 ~ 7 0 µ m ，具有厚膜填充部。
導管周圍有纖維性假導管、木質部纖維、薄壁細胞，均木質化。
1-2.廣防己：本品為馬兜鈴科（Aristolochiaceae）植物廣防己(Aristolochia
fangchi Wu.)之根（Fig.5）。 防己始載於《本經》：”一名解離，生
川谷”， 《別錄》云：” 文如車輻理解者良，生漢中，二月八月採 根陰乾”。 《范子計然》云：”防己出漢中甸陽”，吴普曰：” 木 防己一名解離，一名解燕……如葛藤，蔓延如芄，白根，外黃似桔梗，內黑文如車輻解，二月、八月、十月採根”。由此可見，最早使用之 防己，又名木防己，一名解離，產於漢中，用根，具有內黑文如車輻 解之特徵，應非防己科之Cocculus屬之木防己。由此觀之，此防己應 屬馬兜鈴科植物漢中防己，又稱異葉馬兜鈴(Aristolochia heterophylla Hemsl.).，因未取得異葉馬兜鈴藥材之正品，且在台灣市場以廣防己
Aristolochia fangchi Wu.為多見，因此本研究報告乃以廣防己為研究
之主體。【性狀】本品呈圓柱形或多少彎曲，彎曲處有橫溝，直徑約2 ~ 6 ㎝，一 般約3 ㎝。外觀灰褐色，並覆有栓皮，栓皮粗糙多縱皺紋（Fig.5）。
有時栓皮部份或全部刮除。除去粗皮者呈淡黃色，較光滑。橫斷面為 灰白色至淺棕黃色，無粉質。具細而較密的放射紋，從髓部射出一次 維管束數多，二次維管束在形成層附近成短條放射狀排列，為灰褐色 維管束與類白色髓線相間排列而成。順維管束方向，易成片剝下，質
地堅硬，不易折斷。無臭，味微苦而澀。廣防己含馬兜鈴酸Ⅰ及
Ⅱ(aristolochic acid)
(4)
、馬兜鈴酸內環酯(aristololactam)、木蘭花鹼 (magnoflorine)、β-sitosterol、allantoin，其化學結構可參閱（Tab.12）。效能為袪風止痛、清熱利水，主治濕熱身痛、下肢水腫、小便不利、
腳氣腫痛。主產於廣東､廣西，又因極像粉防己，故名廣防己，此為 外觀上之混淆。
【組織】廣防己根之橫切面組織圖：(Fig.6)
1. 栓皮特別明顯發達，為數十層木栓細胞組成。
2. 栓內層為薄壁細胞，內含草酸鈣簇晶與澱粉粒，內側有石細胞群 大致成環狀排列，缺乏韌皮纖維。
3. 二次皮層及木質部射出之髓線含有多量的澱粉粒和少量的草酸鈣 結晶。
4. 維管束放射狀排列。
5. 韌皮部射線寬廣，篩管皺縮，有少數石細胞散生。
6. 木質部射線寬，導管較大，旁有木纖維束，壁較厚。
7. 中心為異形複合維管束，髓由薄壁細胞及少數厚壁細胞所組成。
1-3：木防己：本品為防己科（Menispermaceae）植物木防己 Cocculus trilobus D C .之根或根莖（Fig.7）。
【性狀】本品略呈疙瘩狀突起之不完整彎曲之圓柱形，直徑約1.5~ 3 ㎝。
外表灰褐色，有深淺不等彎曲縱溝及橫皺，具支根之痕跡及部份皮層 剝落而露出黃白色木質部。質地堅硬，不易折斷，不具粉質。橫斷面 皮層很窄，約1.2 ㎜，約佔半徑 1 / 7，呈淡灰黃色。木質部寬廣排 列整齊具放射狀紋理。斷面呈暗褐色，徑約1.5~ 3 c m ，皮層狹窄 易脫落，木質部約 1 2 束，排列整齊，可見導管小孔，灰白色放射狀 導管與暗褐色髓線呈放射狀排列。木射線寬廣，中心有之髓線（菊花
11
毛木防己鹼(normenisarine)、毛木防已鹼(menisarine)、表千金藤鹼(epi- stephanine)、木防己賓鹼(coclobine) 、mufangchinoline C
14
H21
N14
O11
、 thunbergin C20
H14
O9
等成分，其化學結構可參閱（Tab.12）。效能為 袪風除濕、通經活絡、解毒消腫，主治風濕痺痛、小便淋痛、閉經、跌打損傷、咽喉腫痛、瘡瘍腫毒、溼疹、毒蛇咬傷。主產於陜西､甘 肅､四川､貴州等地，台灣亦有產，唯一般以草藥使用。
【組織】木防己根之橫切面組織圖：（Fig.8）
1. 栓皮下皮層很薄，為薄壁細胞所組成，內含很多砂晶與小板狀晶。
2. 維管束鞘為薄膜性石細胞環繞韌皮部外側，韌皮部具癒合組織，
缺韌皮纖維。
3. 木質部導管及薄壁細胞均木化，導管徑約300 µ m ，假導管徑約 18µm。放射狀狹窄之導管群穿過，質較堅硬，不易折斷。
4. 髓全部厚膜化。
1-4：漢防己：本品為防己科（Menispermaceae）植物漢防己 Sinomenium
acutumn Rehd. et Wi l s .之根或根莖（Fig.9）。又名為青藤，據仇良
棟(11)
在日本考證結果發現日本所用防己即為青藤，日本多數文獻以 此稱為「漢防己」。【性狀】本品為屈曲不整圓柱形，直徑約0 .5~2 ㎝，外表覆蓋栓皮層，
呈灰褐色，粗糙具細皺，具疣狀皮孔突起。質硬不易折斷，不具粉 質。橫斷面灰黃色至灰棕色，皮部窄，僅佔半徑1 / 6。維管束約可 見導管小孔。灰褐色維管束與黑褐色之髓線呈放射狀紋理。髓線較 維管束為窄，每一維管束外側各有一條淡色弧狀線（中柱鞘纖維）
相互連結成波狀環。中央為黃白色之圓心髓，UV366下照射下呈淡 藍色之螢光。味苦。青藤(漢防己)則含青藤鹼(sinomenine) 、青風 藤鹼(sinoacutine)、尖防己鹼(acutumine)、N-去甲尖防己鹼
(N-acutumidine)、白蘭花鹼(michelalbine)、光千金藤鹼(stepharine)、
雙青藤鹼(disinomenine)、異青藤鹼(isosinomenine)、木蘭花鹼 (magnoflorine)等成分，
【組織】漢防己根之橫切面組織圖：（Fig.10）
1.一次皮層，由類圓形薄壁細胞組成，散存少數木化的厚壁纖維及 石細胞。皮層薄壁細胞含有針晶。
2. 韌皮部外有維管束鞘（中柱鞘纖維），具厚壁細胞，其內側常有 2~3 列石細胞，排列於每一維管束之外側，而此部分常和髓線之 石細胞相連而成環。篩管外部有癒合韌皮組織，篩管下為韌皮部 薄壁細胞，有束間形成層。
3. 木質部有導管、薄壁細胞及纖維，導管徑約40~150 µ m ，呈階梯 狀排列，導管具填充物。
4. 髓線為薄壁細胞，多少破裂。有髓。中央部分細胞較周圍者為大。
外圍為厚壁細胞；中央為薄壁細胞，含有針晶。
，其化學結構可參閱（Tab.12）。
13
Fig. 3: The plant macromorphology of Stephania tetrandra S. Moore
Fig.4 : The microscopic observation and histologic biopsy of Stephania
tetrandra herb（x 40）
15
Fig.5: The plant macromorphology of Aristolochia fangchi Wu.
Fig.6 : The microscopic observation and histologic biopsy of Aristolochia
fangchi herb（x 40）
17
Fig.7 : The plant macromorphology of Cocculus trilobus D C .
Fig.8 : The microscopic observation and histologic biopsy of Cocculus
trilobus herb（x 40）
19
Fig.9 : The plant macromorphology of Sinomenium acutumn Rehd. et Wi l s .
Fig 10: The microscopic observation and histologic biopsy of Sinomenium
acutumn herb
A
B
1. Aristolochic acid 2.廣防己 3.Tetrandrine 4.粉防己 5. Sinomenine 6. 漢防己 7. 木防己
21
2.藥材之薄層層析並與藥材指標成分比對
(10)
2-1. 對 照 標 準 品 溶 液 之 調 製 ： 取 對 照 標 準 品 aristolochic acid 、 sinomenine、tetrandrine 各2 m g，分別加入甲醇，定容至10 ml ，供 作對照標準品溶液。
2-2. 檢液之調製：取廣防己、粉防己、漢防己、木防己檢體生藥粉末各2 . 5 g ，分別加入乙醇10 ml ，超音波振盪1 小時，過濾，濃縮後定容 至10 ml，供作檢液。
2-3. 薄層層析條件
† 層析板： Silica gel 60 F254
† 展開溶媒：乙酸乙酯：甲醇：氨水（8:1:1）
† 點注量：各10 µl
† 展開距離：10 cm
† 檢出方法：置於U.V. 254 nm下檢視(Fig.11A)。
† 噴Dragendoff's spray reagent後檢視。(Fig.11B)。
† 噴Vanillin/sulfuric acid spray reagent ，置於 U.V. 366nm 下檢視 3.標準藥材之液相層析串聯式指紋質譜圖庫(LC/MS/MS database)之建檔 3-1. 檢品溶液配製:各取上述經鑑定之標準藥材粉末 1.0 g，分別以兩次
10 mL 之 70% MeOH 萃取，以濾紙過濾，收集濾液，置於減壓濃縮 裝置中濃縮到接近乾，以 70% MeOH 溶解殘渣，並定容成 10 mL 供 作檢品溶液。
3-2. 正離子電灑法第一段全質譜掃描（ESI+/MS 1 scan）
(20~21)
:取上述3-1 之檢品溶液，依下列表一之儀器參數設定液相層析串聯式質譜儀，待 溶 媒 系 平 衡 後 ， 開 始 進 行 正 離 子 電 灑 法 第 一 段 全 質 譜 掃 描 分 析（Fig.12）。質譜儀之毛細管電壓設定為 3.0 kV，錐口電壓設定為線 性上升(ramp)，離子源溫度（source temperature）為 120℃、溶媒揮 散溫度（desolvation temperature）為 350℃；液相層析儀之分離管柱
(column)為 Cosmosil 5-C
18
, 4.6 x150mm, 5um，mobil phase 為 methanol : acetonitrile: 0.1% ammonium acetate + 0.1% formic acid mixed aqueous solution (17:17: 66)，流速為 0.5mL/ min，photodiode array 掃描範圍為 200 〜350nm，待溶媒系穩定平衡後，注入 10 μL 之上述 2-2 之檢品 溶液，並以1:1 之比例分流(spit)。各藥材分別獲得第一段全質譜掃描 圖（MS 1 scan total ion current，MS 1/TIC）（Fig.12A），並經解析 每 個 明 顯 波 峰 ， 獲 得 數 張 第 一 段 全 掃 描 質 譜 圖(MS 1 spectrum)（Fig.12B）。
A B
Fig.12 : The mechanism of MS 1 scan and obtained MS1 spectrum