結果

3.1 萃取柚籽表面黏質物所得的產率

以水做為溶媒，萃取柚籽表面黏質物，將所得水萃物命名為 water extract (WE)。相對於柚籽乾重，WE 的產率約為 3% (表 3-1)。

3.2 陰離子交換層析純化多醣體

使用 DE-52 做為陰離子交換介質，注入 25 mL (1.5 mg/mL) WE，

並以二次水及 0.00.5 M NaCl 濃度梯度流洗。利用酚-硫酸呈色法分 析各 fraction 的總醣含量，發現流洗二次水可分離出一類未被 DE-52 吸附的 fraction，命名為 Fraction A (圖 3-1A)，收集範圍為第 7 管至 第 17 管。另一方面，以 Blumenkrantz 與 Asboe-Hansen (1973)的方法 分析各 fraction 的醣醛酸含量，於 0.100.18 M NaCl 濃度梯度流洗出 一類可被 DE-52 吸附的 fraction，命名為 Fraction B (圖 3-1B)，收集 範圍為第 40 管至第 50 管。相對於注入的 WE 乾重，Fraction A 與 Fraction B 的回收率分別為 8.3%與 59.7% (表 3-2)。因 Fraction A 回收 率較低，本論文並未對此 fraction 進行分析。

3.3 多醣體組成分析

3.3.1 總醣、醣醛酸及蛋白質含量

表 3-3 顯示，WE 之總醣、醣醛酸以及蛋白質的含量分別為 42.6%、38.7%與 0.1%；而 Fraction B 則為 16.3%、53.4%與 0.2%。

不論 WE 或 Fraction B，蛋白質含量皆相當低。經過陰離子交換

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層析後，Fraction B 的醣醛酸含量比率是較 WE 提升 1.4 倍；而 總醣的比率較 WE 減少 2.6 倍。

3.3.2 醣類成份

Fraction B 以 TFA 水解後，利用液相層析系統 (CarboPA10, Dionex) 分 析 中 性 醣 的 成 份 為 rhamnose 、 arabinose 、 galactose 、 glucose、mannose 或 xylose (圖 3-2A)，且各組成的相對比例依序 為 5：5：3：2：4 (表 3-4)。Fraction B 以 H₂SO4水解後，利用液相 層析系統 (IonPac AS11, Dionex)分析醣醛酸組成，其中 peak 2 為 galacturonic acid，peak 3 為 glucuronic acid ，peak 1、4、5 則為未 知成份 (圖 3-2B)。

3.3.3 甲基化程度

表 3-5 顯示 Fraction B 的甲基化程度為5.7± 1.3%。

3.4 純化多醣體的分子量分析

圖 3-3A顯示，標準品Blue dextran T2000、Dextran T500、Dextran T70及Dextran T40經過Sephacryl S-400膠體後，分別於74、95、116及 127 mL被流洗出。Fraction B的溶離體積為98108 mL (圖 3-3B)。將 標準品的分子量以底數為10的對數對應標準品的溶離程度 (Kav)製 作Kav檢量線 (圖 3-4)，再以Fraction B的流洗體積計算Kav並內插 Kav檢量線，可得知 Fraction B的分子量範圍約為73242 kDa。

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3.5 多醣體特性分析 3.5.1 水合能力

表 3-6 顯示，WE 及 Fraction B 的水合能力分別為 9.4 與 15.2 mL/g DW，而一般做為水合能力測試的標準品小麥蛋白則僅為 1.3 mL/g DW。因此，WE 與 Fraction B 皆具有良好的水合能力，並且部份純 化的 Fraction B 比 WE 的水合能力提升 1.6 倍。

3.5.2 黏度

圖 3-5 顯示，WE 水溶液的黏度曲線隨著濃度的增加而升高，並且 1% (w/v)的 WE 水溶液之黏度可達 6000 cP 以上。相較於對照組－阿 拉伯膠，1%的水溶液黏度則近乎 0 (11.5 cP)。

3.5.3 抗氧化分析

3.5.3.1 清除 DPPH 自由基能力

添加不同濃度 (0.25、0.5、1、2、4 mg/mL)的WE及Fraction B皆 無顯著清 除DPPH自由 基之能 力；但 WE的清 除能力 略佳，在 2 mg/mL達最大清除能力為14% (圖 3-6)。而抗壞血酸的IC50約為0.05 mg/mL ( 清 除 50% 的 DPPH 自 由 基 效 力 之 濃 度 ， 50% inhibiting concentration)，最大清除能力則可達80%，明顯優於柚籽的WE與 Fraction B。

3.5.3.2 SOD活性測定

每克WE含有7300的SOD單位活性，而每克Fraction B含有3600的

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SOD單位活性，顯示WE的SOD單位活性約為Fraction B的2倍。每 克的 EGCG 的SOD單 位活 性則 為73300 ，明 顯高 於柚 籽 的WE及 Fraction B (表 3-7)。

3.5.3.3 螯合亞鐵離子能力

WE的螯合亞鐵離子能力與添加濃度具有正比關係，且IC50為2.48 mg/mL (螯合50%的亞鐵離子效力之濃度)，但Fraction B則無顯著螯合 亞鐵離子能力 (圖 3-7)。而EDTA的IC₅₀約為0.1 mg/mL，而最大螯合 能力則可達100%，明顯優於柚籽的WE及Fraction B。

3.5.4 細胞毒性分析

添加不同濃度的 WE 及 Fraction B 於小鼠纖維母細胞 (NIH-3T3 cell)培養 24 小時後觀察細胞的存活率。以控制組的細胞存活率為 100%，含 0.001、0.01、0.1、1、10 μg/mL 的 WE 及 Fraction B 實 驗組的細胞存活率分別為 112、90、95、98、101%與 94、106、106、

98、95%。結果顯示，兩者對細胞存活率在生物統計上皆無顯著差 異 (圖 3-8)。

3.5.5 細胞型態

使用倒立式相位差顯微鏡觀察細胞是否有受損狀況。圖 3-9 顯 示，添加 10 μg/mL 的 WE 與 Fraction B 並培養 24 小時，皆不影響 小鼠纖維母細胞的細胞型態。

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