結果與討論

(一) 葉酸含量對 MES-13 小鼠腎間膈細胞分泌細胞激素的影響

MES-13 小鼠腎間膈細胞株以 F0、F1 或 F10 培養液培養 72 小時後，經過 LPS 刺激 24 小時，測定上清液中 IL-6 與 MCP-1 含量結果如圖 2-3，結果顯示未經 LPS 刺激的葉酸缺乏組的 MES-13 細胞分泌較多的 MCP-1；而經 LPS 刺激後的葉酸缺 乏組分泌較多的 IL-6 與 MCP-1。

(a) MCP-1 (b) Interleukin 6

圖 2- 3. 不同葉酸含量對 MES-13 小鼠腎間膈細胞株分泌 MCP-1 與 IL-6 的影響

Figure 2-3 Effects of different folate content on pro-inflammatory cytokines production of MES-13 mesangial cell stimulated with LPS (1µg/mL) or not for 24 hours. Mean ± SD (n=3). Different letters indicate significant difference between the mean values of the groups analyzed by ANOVA followed by Duncan's multiple range test.

過去細胞實驗指出，人類初代腎間膈細胞透過 CRP (C-reactive protein) 活化 NF-κB，進而促使 MCP-1 基因表現量的增加 (Chang et al., 2005)。臨床研究也指出，

糖尿病病患因高血糖刺激使腎間膈細胞分泌較多 MCP-1 與基因表現量，且與血清 AGEs (Advanced glycation end products) 濃度呈正相關，推測腎間膈細胞的 MCP-1 分泌量與表現量增加，會促使糖尿腎病變病情加速 (Banba et al., 2000)。有文獻指 出，腎臟疾病的病程中，MCP-1 將啟動 NF-κB 以增加 IL-6 分泌量，且吸引單核球 浸潤並附著到腎小管間質的內皮細胞，最終引起腎臟組織的發炎反應與促進腎病

的分泌量增加，可引起 NF-κB 之活化，最終使 IL-6 分泌量增加，促使腎功能異常 或腎病變的加劇。

(二) 葉酸含量對小鼠腎臟發炎與纖維化相關細胞激素基因表現量的影響

本實驗利用修淯琳碩士實驗的 C57BL/6J 小鼠，餵飼 20 週高油飲食誘發肥胖，

犧牲後取小鼠腎臟組織，分析腎臟發炎與纖維化相關細胞激素基因表現量。結果如 圖 2-4 所示，十倍葉酸組的 IL-6 基因表現量有較低的趨勢，其他基因表現量皆無 顯著差異。

圖 2- 4. 不同葉酸含量高油飲食對小鼠腎臟發炎與纖維化相關細胞激素基因表現量的影響

Figure 2-4 Effect of dietary folate content on kidney mRNA expression of inflammation-related cytokines in high-fat diet mice. Values are mean ± SD. The significance is indicated as ^# 0.05< p < 0.1 compared to the Control group analyzed by Student's t-test. (n = 6 for Control, n = 9 for HF-f0, n = 11 for HF-f10)

如圖 2-5 所示，血清葉酸含量與腎臟 IL-6 基因表現量呈顯著負相關 (r=-0.69473, p=0.002)，顯示不同葉酸含量高油飲食對小鼠腎臟的免疫影響可能會有所 不同。因此分析不同葉酸含量各組間的腎臟發炎相關基因表現量之間的相關性，結 果如圖 2-6 至圖 2-8 所示，唯有在葉酸缺乏的高油飲食之下，腎臟發炎相關基因表 現量彼此呈顯著正相關 (圖 2-6)，顯示葉酸缺乏的高油飲食可能促使腎臟發炎反應 加劇發生。

0 0.5 1 1.5 2 2.5

Il-6 Il-1β Mcp-1 Tgf-β Tnf-α

mRNA expression (Fold of HF-f1)

HF-f0 HF-f1 HF-f10

#

圖 2- 5. 不同葉酸含量高油飲食對小鼠血液葉酸含量與腎臟 IL-6 基因表現量的相關性

Figure 2-5. The correlation between serum folate content and renal il-6 mRNA gene expression in high-fat diet mice.

有公衛研究指出，膳食和血中的葉酸含量與腎絲球過濾率呈負相關，顯示膳食 葉酸攝取越少，慢性腎臟疾病進展越加劇 (Hassan, 2015)。另外，動物實驗結果指 出，給予經單一腎切除的 Sprague-Dawley 大鼠 6 週葉酸缺乏飲食，導致大鼠 24 小 時尿液的尿蛋白 (urine albumin) 含量較正常飲食大鼠組更高，且尿液肌酸酐廓清 率 (creatinine clearance, Ccr) 較低，顯示了葉酸缺乏飲食會促使腎功能下降 (Zhang et al., 2010)。本實驗發現血液葉酸含量與腎臟 IL-6 基因表現量呈顯著負相關 (圖 2-5)，且只有在葉酸缺乏組的促發炎細胞激素之間呈顯著正相關 (圖 2-6)，葉酸 1、

10 倍組皆無此相關性 (圖 2-7 與圖 2-8)。

在 STZ (streptozotocin) 誘發大鼠糖尿病實驗結果顯示，糖尿病組大鼠腎臟皮 質 (renal cortical) 的 IL-6 基因表相量顯著高於對照組，且與尿蛋白排除率呈正相 關 (Navarro et al., 2006)。臨床研究也指出，第二型糖尿病病患的血清 IL-6 含量與 腎絲球基底膜 (glomerular basement membrane) 增厚之現象呈正相關 (Dalla et al., 2005)。

綜合以上推測， 膳食中葉酸缺乏將導致腎臟組織 IL-6 基因表現量增加，且藉 由影響促發炎細胞激素之間的表現量，進而引起腎臟發炎加劇與腎臟腫大，最終可 能導致腎功能逐漸下降。

20 40 60 80 100

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8

Serum Folate (ng/mL)

Renal il-6 (fold of HF-f1)

r= -0.69473 p= 0.002

HF-f1 & HF-f10

圖 2- 6. 葉酸缺乏高油飲食小鼠的腎臟發炎相關基因表現量之間的相關性

Figure 2-6. The correlation between renal inflammation-related mRNA gene expression in high-fat diet mice. (HF-f0)

0

圖 2- 7. 葉酸一倍高油飲食小鼠的腎臟發炎相關基因表現量之間的相關性

Figure 2-7. The correlation between renal inflammation-related mRNA gene expression in high-fat diet mice. (HF-f1)

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圖 2- 8. 葉酸十倍高油飲食小鼠的腎臟發炎相關基因表現量之間的相關性

Figure 2-8. The correlation between renal inflammation-related mRNA gene expression in high-fat diet mice. (HF-f10)

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