第一節、綜合討論
一、高油飲食對小鼠誘發腎臟損傷的影響
選擇高油飲食誘發腎臟損傷模式，因有研究指出 C57BL/6J 小鼠利用高油飲食 52 週後誘發肥胖致腎損傷，發現隨著時間增加尿蛋白含量也顯著增加 (Heijden et al., 2015)。但本研究進行 51 週並未發現高油飲食有顯著尿蛋白增加，可能原因有 (1) 本實驗高油飲食 60%脂肪主要來自於奶油，而 Heijden 等人實驗中高油飲食 45%脂肪主要選用豬油，相同重量下奶油的 omega-3 脂肪酸含量較豬油高出 0.5 倍，
且本實驗油脂比例多出 Heijden 等人實驗 15%。有臨床研究指出 18 個月，每天 3 次 1 克 omega-3 脂肪酸補充劑能降低肥胖者空腹血糖、空腹血漿胰島素與 HDL 膽 固醇含量。顯示 omega-3 脂肪酸具有降血糖功效 (Derosa et al., 2016)。(2) 本實驗 小鼠誘發平均體重約為 40 公克，較 Heijden 等人的研究小鼠體重約 50 公克，相差 10 公克左右。高油飲食誘發肥胖致腎損傷模式以體內脂肪重量為關鍵，本實驗高 油飲食小鼠腎周脂約為 0.6 公克，而 Heijden 等人的研究則約為 1.7 公克，較重的 腎周脂提高了誘發腎損傷的機率。(3) C57BL/6J 小鼠為較不易經高油飲食誘發肥胖 致腎臟損傷的品系。有研究比較兩種易經由高油飲食誘發肥胖的品系 C57BL/6J 與 DBA2/J，實驗進行 12 週後結果發現，高油飲食組中的 DBA2/J 小鼠的尿蛋白比值 較高、podocyte 細胞數較少；而 C57BL/6J 小鼠無此現象 (Wicks et al., 2016)。綜合 以上，小鼠的油脂種類、體重與品系可能為本實驗高油飲食誘發腎損傷的限制因子。
二、葉酸營養狀況在 in vitro 與 in vivo 對腎臟發炎反應的影響
以細胞實驗結果顯示，葉酸缺乏促使 MES-13 小鼠腎間膈細胞分泌 MCP-1 與 IL-6 (圖 2-3)，這可能原因是當葉酸缺乏時啟動了細胞內 NF-κB 的活化，因而促使 此現象的發生。有類似研究分別指出，葉酸缺乏促使巨噬細胞的 IL-6 與 MCP-1 表
現量增加 (Kolb, 2013)，以及高劑量葉酸補充可以抑制巨噬細胞的 NF-κB 活化，而 減少 LPS 刺激下細胞激素的分泌量 (Feng, 2011)。
在動物實驗的部分，發現葉酸缺乏 20 週的高油飲食小鼠，犧牲後的血清葉酸 含量與腎臟 IL-6 基因表現量呈顯著負相關 (圖 2-5)；以及實驗二結果中，葉酸缺 乏 51 週的小鼠血清 IL-6、TGF-β 與 galectin-3 含量也顯著較高 (表 3-5) ，再次驗 證葉酸缺乏增加腎發炎相關的因子。研究指出，臨床研究發現腎絲球腎炎病患尿液 中的 IL-6 含量，較健康受試者顯著較高 (Horii et al., 1989)，有文獻也指出末期腎 臟疾病患者血漿 IL-6 含量在病情急性期較高 (Pecoits-Filho et al., 2003)，因此葉酸 缺乏可能促使體內傾向慢性發炎，加劇腎炎的進展。
血清葉酸含量與血清 galectin-3 呈顯著負相關 (圖 3-14C)。Galectin-3 為 lectin 家族成員之一，有研究指出 galectin-3-/-小鼠的巨噬細胞不分泌 galectin-3 之下，對 腎臟組織纖維化具有保護作用 (Henderson., 2008)。另外，有文獻指出抑制 galectin-3 能預防末期腎臟疾病的發生 (Desmedt et al., 2016)。在葉酸缺乏組血清 TGF-β 含 量也顯著較高 (表 3-5)，TGF-β 一直以來被認為對於腎臟相關疾病具有雙重角色，
一方面促進慢性腎臟疾病的病情；另一方面又具有促進傷口修復、組織再生與抗發 炎的能力 (Blobe et al., 2000)。本實驗腎臟組織均質液中，發現葉酸缺乏組 galectin-3 與 TGF-β 含量也顯著較高。根據文獻指出，腎臟組織中 TGF-β 藉由抑制腎臟的 發炎反應，與 galectin-3 共同促使腎臟走向纖維化的發生 (Cao et al., 2015)。因此，
葉酸的營養狀況對預防腎臟疾病應有其重要性。
三、實驗中添加馬兜鈴酸之目的與影響
添加馬兜鈴酸目的為促使腎臟發炎，加速腎臟損傷。在過去文獻中多以腹腔注 射或管餵的方式給予，較少以飼料方式進行實驗。因此為了更直接模擬人類攝取馬 兜鈴酸的途徑，在高油飲食小鼠實驗中添加馬兜鈴酸 (8 mg/Kg/day) 於飼料中，卻 造成小鼠體重下降，甚至造成部分小鼠死亡，尤其是正常油脂組。因給予 19 週後
較未給予馬兜鈴酸的高油飲食小鼠有較高的尿蛋白比值與血清 BUN 含量，所以實 驗二在給予高油飲食 48 週時發現較正常油脂飲食組尿蛋白比值無顯著差異時，開 始連續給予高油飲食小鼠馬兜鈴酸 (8 mg/Kg/day) 3 週。只給予 3 週誘發乃因馬兜 鈴酸具減重效應，又小鼠週齡較大可能死亡，且 3 週後葉酸缺乏組的尿蛋白比值 較高，因此進行犧牲。
本研究第三章實驗二，發現腎臟組織均質液在高油飲食組促發炎細胞激素如:
IL-6、IFN-γ 與 TNF-α 皆比正常油脂組較低。可能原因為高油飲食組飼料中添加馬 兜鈴酸導致，馬兜鈴酸除了具有致腎毒性，同時有文獻指出可能具有抗發炎的效果。
添加馬兜鈴酸於 MES-13 小鼠腎間膈細胞中，能夠抑制 LPS/IFN-γ 刺激而產生的 NO (Nitric oxide) 與 CTGF (connective tissue growth factor) 的蛋白含量，主要是透 過抑制 JAK/STAT-1α 與 NF-κB 訊息傳遞路徑，進而達到腎臟組織抗發炎的效果 (Tsai et al., 2014)。Tsai 等人實驗結果顯示本實驗高油飲食組，可能馬兜鈴酸導致促 發炎細胞激素降低。
第二節、總結
葉酸缺乏促使小鼠腎間膈細胞 MES-13 分泌顯著較多 MCP-1 與 IL-6，動物實 驗 20 週高油飲食小鼠的血清葉酸含量，也與腎臟 IL-6 基因表現量呈顯著負相關。
葉酸缺乏 51 週的高油飲食小鼠血清 IL-6、TGF-β 與 galectin-3 含量顯著較高，以 及腎臟組織均質液中 TGF-β 顯著較高與 galectin-3 含量有較高的趨勢。葉酸缺乏促 進 ConA 刺激的脾臟細胞分泌較高的 IL-2 與 TGF-β。而葉酸十倍組顯著增加肝臟 的三酸甘油酯與膽固醇含量，以及肝臟組織切片中顯示有較多油滴堆積在肝臟肝 門靜脈周圍。
綜合以上，葉酸缺乏可能促進高油誘發肥胖小鼠的發炎反應與腎臟纖維化進 展，而高劑量葉酸會增加肝臟脂質堆積，但對腎損傷無顯著影響。