肝癌現代醫學之相關文獻探討

癌化 (carcinogenesis) 是重複而連續性所造成細胞轉型的結果

31-33。一般腫瘤的形成可分三個階段，分別為：initiation、promotion

及progression。Initiation 是屬於可逆性且快速、發生頻率很高的一個 階段。通常是正常細胞在受到致癌因子刺激時，引發DNA 受損，若 無法即時修復DNA，而致癌因子持續刺激，細胞基因會因而突變。

promotion 是指細胞突變後，改變正常細胞週期的調控，進行增生而 形成腫瘤，其間需時相當長且長期暴露在 promotion agent，通常超過 10 年以上。癌化的 Progression 期是不可逆的過程，這時腫瘤細胞會 透過增生(proliferation)、侵襲(invasiveness)和轉移(metastasis)而增加腫 瘤細胞的數量。所以預防癌症生成的過程中以抑制速率限制期的 tumor promotion，是已知最有效的策略³⁴。轉錄因子 activator protein 1(AP-1)對 tumor promotion 是非常重要^35-38。因為腫瘤在promotion 階 段時，必需有AP-1 的存在，而 AP-1 可啟動相關基因的轉錄，促腫 瘤從neoplastic transformation 轉成 tumor promotion 階段^38-42。以往研 究中指出照射紫外線會引起tumor initiation 和 tumor promotion，進而 形成皮膚癌^{43, 44}，由此推論AP-1 在 tumor promotion 是非常重要的因

素^{40, 45, 46}。另外有些藥物抑制劑，如：flucinolone acetonide、retinoic acid；

生物抑制劑，如：突變的 c-jun 和 negative phosphatidylimositol-3 kinase 也可抑制AP-1 的活性，而阻斷 neoplastic transformation 40, 42, 46-48。所 以臨床上也發現肝癌形成時會有activator protein 1 (AP-1)或 nuclear factor-κB (NF-κB)連續性活化^{49, 50}。AP-1 為 dimeric 蛋白質包括 JUN (c-Jun, JunB 和 JunD)，FOS (c-Fos, FosB, Fra-1 和 Fra-2)，和 ATF families of proteins ³⁵。AP-1 會黏附在 DNA 上含有

2-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate 結合序列的操縱子(promoter )的區 域且活化與細胞增殖細胞凋亡細胞轉形的轉錄基因相關35, 40, 51-53。例

如:以 TPA 或 epidermal growth factor 刺激 JB6 P+ 或 U937 細胞株會 引起細胞anchorage-independentgrowth 及癌化^{40, 53, 54}。

增加AP-1 表現量也與多種癌症的 tumor promotion 及 progression 如皮膚、肺和乳癌^55-58，此外，有些食品也可抑制AP-1 活性而阻斷 JB6 細胞轉形諸如 omega-3 fatty acids 和 glycosides ⁵⁹。

另外，中藥萃取物降低AP-1 活性可能有效抑制 tumor promotion ^60,

61。Mitogen-activated protein (MAP) kinases 是細胞內訊息傳導途徑的 必要成員，可調整細胞增殖與細胞凋亡，MAP kinases 可分成三 群:extracellular signal-regulated kinase (ERK)，c-Jun N-terminal

kinase/stress-activated protein kinase (JNK/SAPK)和 p38 MAP kinase，

像TPA、UV radiation、growth factors 和 oxidative agents ^{52, 62, 63}。這 些刺激都可透過活化MAP kinases 達到提高 AP-1 活性。

NF-κB 是異雙分子 heterodimer 包括有 RelA (p65)、c-Rel、RelB、

p50 和 p52。NF-κB 在免疫與發炎上扮演重要的角色。甚至透過調 整細胞生長、凋亡與癌化過程，也影響細胞生長與存活⁶⁴。更進一步 說，NF-κB 在許多慢性肝病都被活化，像 cholestasis 和 HCC⁶⁵。

不論在活體外、或活體內的各種研究指出，AP-1 或 NF-κB 參與 癌症的initiation、promotion、progression 和 metastasis ^{66, 67}。在癌化的 過程中，AP-1 和 NF-κB 扮演重要的角色顯示：AP-1 和 NF-κB 可以 當作篩選化學治療試劑的目標⁶⁸。例如：C 型肝炎可經抑制人類巨大 細胞AP-1 的活化阻斷合成介白素-12 ⁶⁹。此外，抑制 NF-κB 活化明顯 降低癌化過程，不論是colitis-associated cancer 或者是發炎引發的 cholestatic carcinoma ^{70, 71}。所以我們推論中藥萃取物如可下調 AP-1 和/或 NF-κB 活性，便可有效抑制 tumor promotion。

左金丸(Zuo-Jin-Wan)，典籍上記載以治療肝火脅痛為主，方出自 丹溪心法⁷²，當今的臨床使用上以治療胃腸道疾病，例如噁心嘔吐發 炎性的消化道疾病^{73, 74}，另外有部分研究則認為左金丸可減緩或阻斷 大腸癌或胃癌的癌變過程^75-78。左金丸為中醫的傳統方劑，包含兩種 中藥：黃連(Coptis chinensis)與芸香科植物的未成熟果實，吳茱萸

(Evodia rutaecarpa)，比例為 6:1。其中吳茱萸主要含有吳茱萸鹼 (evodiamine)、吳茱萸次鹼(rutaecarpine) 屬於 quinazolinocarboline 的 生物鹼⁷⁹，有降血壓、減緩心跳 ⁸⁰、抗心律不整、刺激內皮細胞及抑 制巨噬細胞釋放一氧化氮之作用^{81, 82}。吳茱萸鹼可增加動脈壓、鎮痛、

血管舒張及抗腫瘤活化^{80, 83, 84}及抗腹瀉作用 ⁸⁵，在動物實驗發現可使 癌細胞生長周期停滯，引發細胞凋亡及壞死⁸⁶。而吳茱萸次鹼⁸⁷，在 肝中具很強的誘導CYP1A1 與 CYP1A2 活性^{87, 88}，另外吳茱萸次鹼 具有抗血小板凝集作用^{89, 90}。薑製吳茱萸後，吳茱萸鹼及吳茱萸次鹼 的含量會較生品含量多，會擴張皮膚血管，自覺溫熱感。吳茱萸鹼可 直接擴張離體血管的活性。吳茱萸次鹼也具有擴張離體腸繫膜動脈，

促使內皮細胞釋放endothelium-derived relaxing factor(EDRF)而使血 管舒張，亦直接對血管平滑肌產生舒張作用 ^{81, 82}。吳茱萸鹼萃取量，

以黃連炮製最佳，比生品多3.05 倍，生藥材最差；吳茱萸次鹼萃取 量，亦以黃連炮製較佳，比生品多1.42 倍，最差的是生藥材。吳茱 萸水製後較無辛辣味，顯示其水溶性成分減少最多⁹¹。黃連及其活性 成份小蘗鹼(berberine)同時也發現隨不同的炮制增加其活性成份⁹¹， 由此推論左金丸的配伍(黃連配吳茱萸)，能增加其主要成份吳茱萸鹼 與吳茱萸次鹼萃取量。另外從過去碩士吳泰賢的研究發現⁹²，吳茱萸 以多種溶劑萃取時對於肝細胞因TPA 所誘發 AP-1 活性的各種研究發 現，不論是EC50、TC50及SI 等效果都以吳茱萸的甲醇萃取物效果較 佳，如下表2.1.1.所顯示：

表2.1.2. 比較 5 種溶劑吳茱萸萃取物的 EC₅₀、TC₅₀及SI

Acetic

ethanol Ethanol methanol H2O

Boiled water EC50 24.8 24.44 24.72 ─ ─

TC₅₀ 90.42 79.77 122.51 >625 >625

SI 3.65 3.26 4.96 ─ ─

EC₅₀ (µg/mL)：抑制TPA所誘發AP-1活性達一半時的藥物濃度 TC₅₀ (µg/mL)：減少細胞存活量至一半時所需的藥物濃度 SI (selective index) = TC₅₀/EC₅₀

但左金丸、成分藥物及活性化物在肝細胞的抗腫瘤效、tumor promotion 的調控都不清楚。本研究針對左金丸及其成份組成，在 TPA 誘發的肝細胞轉形與機轉進行探究，找出左金丸及其成份組成可能的 抗癌作用。

第二節中醫學對肝癌之文獻探討