第一節左金丸抑制肝癌細胞轉形之效應
中醫藥是越來越受人們重視與喜愛，是眾多替代醫學中非常重要 的一支，應用在人體健康的維護以超過三千年，累積大量的臨床成果，
惜其機轉與現代研究未能有效結合，影響力仍以亞洲地區為主。所以 如何將過去的臨床經驗轉化成現代研究，讓更多的研究人員投入中醫 藥的研究，是推廣中醫藥的重要方向。例如：過去的研究中，應用小 柴胡湯在肝腫瘤兼有腹水的病人，特別是沒有B 型肝炎表面抗原的病 人163。輔助療法應用中藥處方 MSSM-002 在治療過敏性氣喘164。白 虎湯原用在治療糖尿病病人，研究顯示可強化 3T3-L1 脂肪細胞經胰 島 素 刺 激 的 葡 萄 糖 攝 取 乃 透 過 peroxisome proliferator-activated receptors-γ 訊息傳遞路徑165。左金丸，屬於傳統的中醫藥處方，過去 都用來治療腸胃病及肝病72, 74, 133。本研究左金丸用在抗肝腫瘤的化學 治療效果。研究結果顯示：左金丸可在肝母細胞瘤細胞株 HepG2 阻 止 TPA 所 誘 發 的 AP-1 和 NF-κB 活 性 、 細 胞 的 anchorage-independentcellular growth，且呈劑量反應。結果提示左金 丸 可 以 抑 制 肝 癌 細 胞 轉 形 。 從 過 去 研 究 發 現 AP-1 的 轉 活 化 (transactivation)對 tumor promotion 是必需；阻斷 tumor promotor 上 AP-1 的活性，可抑制腫瘤轉形37, 40, 66。NF-κB 可以調控參與發炎反 應(inflammatory responses ) 的 基 因 表 現 166。 另 外 在 細 胞 凋 亡 (apoptosis)、血管新生(angiogenesis)、細胞增殖(cell proliferation)及細 胞轉形(cellular transformation)都可偵測到 NF-κB 的活化，顯示 NF-κB 是發炎與癌症重要聯結15, 50, 167。因此有效對抗肝癌癌症形成的策略可 透過抑制AP-1 和/或 NF-κB 活性。進一步的研究需分析左金丸可治 療抗肝細胞腫瘤成份活性化物。我們的發現指出小蘗鹼與吳茱萸鹼分 別屬於黃連與吳茱萸的主要生物鹼成份，可阻斷AP-1 和/或 NF-κB，
又可以抑制肝癌細胞的anchorage-independentgrowth 方式。吳茱萸鹼
與小蘗鹼皆屬於多樣性的藥物(pleiotropic agents)；如：促細胞凋亡 (apoptotic)、抗分化(anti-differential)、抗增生(anti-proliferative)等特點
168, 169。同時也有治療中樞神經系統疾病的作用170, 171。在此我們發現
兩種藥物同時有效地減少 AP-1 活化、影響肝癌細胞的轉形，且都呈 現劑量反應。
第二節吳茱萸抑制肝癌細胞轉形之機轉
吳茱萸應用在消化道疾病與肝病已超過千年 72, 74, 113, 182, 183。先前 的研究指出吳茱萸及其主要成份吳茱萸鹼(EVO)和吳茱萸次鹼可有 效抑制IgE 誘發的過敏性疾病，如：異位性皮膚炎和鼻炎172。吳茱萸 的乙醇萃取物對脂多醣(lipopolysaccharide)引起小膠質細胞的一氧化 氮合成增加與一氧化氮合成酶的活性上升 173。然而，沒有直接證據 顯示吳茱萸及吳茱萸鹼與抗腫瘤或者抗細胞轉形間的關聯性。本部份 研究是第一次提出吳茱萸的甲醇萃取物可以經抑制 AP-1 轉錄活化，
阻斷 TPA 誘發的人類肝細胞轉形。此外，吳茱萸的活性有效化物:
吳茱萸鹼亦能隨著濃度的上升增加抑制 ERKs 路徑而達到阻斷 AP-1 活性的效果。AP-1 是關鍵的轉錄因素，可調控多種生物性功能；諸 如：細胞增殖、分化、細胞凋亡及癌細胞轉形 174。之前的研究曾提 出 AP-1 的轉活化(transactivation)對 tumor promotion 是必需；阻斷 tumor promotor 上 AP-1 的活性，可抑制腫瘤轉形16。本部份的研究指 出經吳茱萸的甲醇萃取物處理後，TPA 引起 AP-1 活性上升與肝細胞 的轉形都會減少。既然 TPA 引起 AP-1 活化與細胞的轉形可被吳茱萸 的甲醇萃取物所抑制，那麼吳茱萸的活性組成份；吳茱萸鹼、吳茱萸 次鹼及檸檬苦素(limonin)175最有可能為有效成份。結果發現，吳茱萸 鹼可抑制TPA 引起 AP-1 活化，並呈劑量反應；而吳茱萸次鹼隨濃度 上升先活化AP-1，當濃度到達 100 µM 降到 basal level。由於吳茱萸 鹼與吳茱萸次鹼在TPA 誘發 AP-1 活化上展現相反的效果，我們推測 吳茱萸鹼才是主要吳茱萸的抗腫瘤效果的主要活性藥物，因為兩者的 效果雷同。過去的研究指出吳茱萸鹼、吳茱萸次鹼及檸檬苦素具有抗
腫瘤、抗發炎、抗過敏、及抗血管新生的效果 174-176。但是這些化合 物都沒有發現與 AP-1 活性的關聯性。本研究揭諸吳茱萸鹼可抑制 AP-1 活性，且呈劑量反應，是吳茱萸主要的生物活性化物，而非吳 茱萸次鹼或檸檬苦素。Ogasawara 等，曾提出吳茱萸鹼比吳茱萸次鹼 有更強的 antimigratory 活性 177。另外，吳茱萸鹼可抑制細胞增殖與 invasion [178]。比較結構與功能的關係發現：在 N-14 上甲基及組態上 C-13β 的氫可能是吳茱萸鹼具抑制活性的原因。
AP-1 活性的調控主要經 MAP kinase 途徑，包括 ERKs、p38 及 JNK。在人類的肝腫瘤發現，MAP kinase 表現明顯上升，顯示 MAP kinase 對於肝腫瘤的形成與維持可能是重要49, 179。另外觀察人類的乳 癌細胞也發現致癌基因所調控的MAP kinase 活化經由 p27 失控，歸 功於抗雌激素阻力；抑制MAP kinase 活性可以恢復 p27 的抑制作用 及雌激素的靈敏度[180]。我們的結果指出吳茱萸鹼抑制ERKs 磷酸化，
但不是JNK 或 p38 kinase。細胞群落的形成分析也被吳茱萸鹼所阻斷。
因此，抑制ERKs 磷酸化是可能是吳茱萸鹼調控的機轉，有助於抑制 TPA 引起的 AP-1 活性及細胞轉形。
吳茱萸鹼是傳統中藥吳茱萸中的主要生物鹼之一，除具有抗炎、
降低血糖等作用外，還具有抗腫瘤活性。研究發現，吳茱萸鹼一方面 能抑制腫瘤細胞生長，引起細胞週期阻滯於 G2/M 期或 G0/G1 期，並 改變細胞週期相關蛋白的表達；另一方面能通過多條信號通路，如依 賴於caspase、凋亡誘導因子(AIF)或通過 κB(NF-κB)、p38 MAPK/ERK 等通路誘導細胞凋亡、壞死，從而提高腫瘤細胞的死亡率6。此外，
吳茱萸鹼還能在體外抑制腫瘤細胞合成血管內皮生長因數(VEGF)以 及與血管生成相關的多種酶的活化，從而抑制血管生成，並且在體內 體外抑制腫瘤細胞的浸潤和轉移181。