第一章、 前言
第三節、 過度增生的平滑肌細胞與粥狀動脈硬化之關聯-19
有相當多的文獻指出，平滑肌細胞在粥狀動脈硬化形成過程中，
扮演了很重要的角色（63、64、65）。其中原因為粥狀動脈硬化形成 過 程 中 ， 血 管 內 皮 細 胞 所 釋 放 的 M-CSF （ marophage colony-stimulating factor ） 分化為巨噬細胞，對 ox-LDL 具有極高的 親合力，形成一含巨噬細胞之泡沫細胞 ( macrophage foam cell )，進 而刺激平滑肌細胞穿過彈性纖維層進入內膜增生（3），增生的平滑肌 細胞再與泡沫細胞、低密度脂蛋白及其他脂質形成動脈硬化斑塊，造 成血管的管腔狹窄（4）。由於平滑肌細胞是動脈最主要的構成物之 一，且當異常增生的平滑肌細胞對粥狀動脈硬化疾病的形成有很重要 的影響，因此很多的文獻極力的在探討，如何抑制過度增生的平滑肌 細 胞 ， 普 遍 方 法 為 造 成 平 滑 肌 細 胞 的 細 胞 週 期 停 滯 使 其 無 法 proliferation ；或者造成細胞的 Apoptosis（65、63、64）。
由上述可知，抑制異常增生的平滑肌細胞已成為探討粥狀動脈硬 化疾病的重要實驗模式，而文獻中，使用 體外（
in vitro
）實驗 的設計中，促成平滑肌細胞異常增生的方式包含：實驗時增加細胞培 養時的血清比例（63），或者給予細胞生長因子等方式（64）。本論文 實驗過程中，採用將細胞培養時的血清比例，由原本的 10 ％ 增加 至 15 ％，模擬平滑肌細胞異常增生的情形。第四節、細胞凋亡之介紹
細胞凋亡 （ Apoptosis ）首先被 Kerr, Wyllie, 及Currie 等病理 學家於1972年用來描述一種過程被嚴密控制的細胞死亡機制且與細 胞壞死 ( necrosis ) 不同的現象【表1】，指出當細胞受環境刺激後，
在基因調控之下所產生的自然死亡現象，故亦稱之為細胞計劃性死亡 ( programmed cell death )（5、6）。
一般而言細胞死亡的形式分兩大類：一類是細胞壞死 ( necrosis ) 指細胞受到外在激烈且有害的刺激，通常為非生理性的損傷如：毒藥 作用、缺氧、發炎等反應時；或細胞內在環境嚴重的錯亂而造成細胞 急劇的死亡，所以正常的生理狀態下細胞死亡是不走此途徑的，過程 中細胞膜通透性增加使水分大量進入細胞中，細胞因而腫脹破裂，典 型的特徵有：細胞膨脹、被分解、細胞核及細胞質的內涵物被釋放到 細胞外等現象。另一類細胞死亡的形式則為細胞凋亡 ( apoptosis )，
是一種藉由基因的調控，維持體內細胞數量動態平衡、清除不需要或 病變細胞的基本措施。
細胞凋亡在多細胞生物中扮演幾個生理角色，包括：挑選最適細 胞 （ the fittest cells ）、塑造個體及器官形態的機制、原狀恆定 ( homeostasis )、剔除危險性細胞等功能，可見細胞凋亡在生物體之正 常發育及生理功能是所不可或缺的，過多或過少的細胞凋亡可能導致
疾病的發生（6）。
細胞凋亡的形態學特徵包括有：染色質濃縮 ( pyknosis )、細胞 質濃縮、細胞形態變得不規則而且有斷裂 ( fragmentation )、及由凋 亡細胞脫落出細胞凋亡體 ( apoptotic body ) 等情形。而在生化學特徵 包括了：細胞膜變化、凋亡蛋白酵素 （ caspases ）的活化、與去氧 核醣核酸的斷裂 ( DNA fragmentation )。細胞膜變化：凋亡中的細胞 會在細胞膜上表現出一些 “請吞噬我” 的信號來告知其鄰近細胞或 巨噬細胞。這些信號已知有 phosphatidylserine （ PS ）由細胞膜內 翻轉至膜外的表層， anionic thrombospondin binding sites，與一些醣 分子。這些信號可能在細胞凋亡的早期便會出現（7）。凋亡蛋白酵 素的活化，這些凋亡蛋白酵素的作用造成大部份細胞凋亡的典型表 徵，標的受質（target substrates）可歸納成三大類：凋亡蛋白酵素的 前質、凋亡過程中必須去活化的蛋白質、與凋亡過程中必須活化的蛋 白質。去氧核醣核酸的斷裂：凋亡細胞所產生的斷裂去氧核醣核酸會 在膠片電泳上呈現 “階梯” 圖案，這個階梯圖案被認為是細胞凋亡 的生化學特徵之一（8），因此看到去氧核醣核酸的斷裂，為現今偵 測細胞凋亡有用的方法，例如 terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling ( TUNEL ) 可用來測定細胞凋亡。
另外，利用 ELISA 的斷裂去氧核醣核酸測定法更可用來定量細胞凋
亡的程度。
細胞凋亡在細胞內的分子機制大致可分為二種：包含有 extrinsic pathway 及 intrinsic pathway。extrinsic pathway 是由death ligand 鍵 結至death receptor，進而將死亡的訊息送到細胞內，誘發一連串凋亡 事件的產生。而 intrinsic pathway 則是經由 DNA damage、hypoxia、
和生長因子的缺乏所引發，其主要過程中會活化 apoptosis proteins 且抑制 antiapoptosis proteins 的表現（9）。
細胞凋亡的過程中涉及許多相關的基因和蛋白，其中研究最多的 包含：caspase家族、p53、Fas等。（A）Caspase 為半胱氨酸蛋白酶，
當細胞接受來自藥物或細胞激素（ TNF, FasL, IFN ）的刺激，將引 發細胞內死亡訊息的傳遞，最後會活化caspase，活化後主要會切斷細 胞內的結構蛋白質，並破壞某些參與代謝的酵素和訊息傳遞的蛋白 質。如：被活化的caspase-8、9能引起Caspase 級聯反應，進而降解結 構蛋白和功能蛋白，引起凋亡，此外細胞中也具有caspase的抑制因 子 ， 這 些 因 子 屬 於 一 個 龐 大 的 蛋 白 家 族 稱 為IAPs ( inhibitors of apoptosis proteins ) ，他們能與caspase 結合，抑制其活性，藉由此抑 制以相互調節。（B）p53為一抑癌基因，存在於細胞核內為一核蛋 白，當細胞的DNA受到損傷、生長因子短缺、或缺氧…等情況，進 而會觸發凋亡的進行，過程中活化的p53會進一步促進下游凋亡相關
基因的轉錄如：pro-apoptosis Bax protein、Fas/CD95 ligand、PIGs
（ p53- induced genes ）等，導致 apoptosis的進行；且其亦可活化抑 制存活相關蛋白的表現如：IGF-BP3 protein來促使apoptosis的發生。
（C）Fas屬於TNF家族，具有三個富含半胱氨酸的胞外區和一個死亡 結合區 （ Death domain ），當FasL （Fas ligand ）與Fas結合後，
會使胞內的Death domain 改變並與pro-caspase-8（或-10）結合，形成 DISC（death-inducing signaling complex），進而激活caspase（ 8、9、
and 10 ），引起Caspase 級聯反應，最後降解結構蛋白和功能蛋白，
引起細胞凋亡（7、10、11）。
第五節、桑黃（
Phellinus merrillii）之介紹
一、藥用菇類簡介
中要典籍很早即記載部分真菌（菇類）之子實體及其菌絲體均可 被食用或應用於醫療上。而近年來許多文獻指出靈芝、樟芝、松茸、
舞茸或巴西蘑菇等菇類具有抗腫瘤、降血壓、降膽固醇或增強免疫力 等生物活性，因此如何從中得到有效的抗氧化或抗腫瘤成分，以製造 抗心血管疾病或抗腫瘤新藥，是目前及未來的研究趨勢（12）。
菇是一種具有明顯子實體（ fruit body ）的大型真菌，能形成此 種子實體之菇類，少數為子囊菌綱真菌，大部分屬於擔子菌綱，其中 大多為食藥用菇類，少數為毒菇。因食藥用菇之子實體集菌絲體富含 有蛋白質、多醣、有機酸、核苷酸和酵素等成分及抗腫瘤、降血壓等 生物活性物質，現已成為高經濟價值及學術價值之產品（13、14）。
近來的研究中發現，菇類的子實體萃取液或是菌絲體發酵液中，
含 有 相 當 多 的 生 理 活 性 成 分 ， 如 水 溶 性 多 糖 體 、 超 氧 歧 化 酵 素
（ superoxide dismutase, SOD ） 及 10-ODA （ 10-oxo-trans-8- decenoic acid ）等，分別具有免疫調節、自由基清除等特性（10、11）。
此外還發現菇類萃取物還具有抗腫瘤（15、16）、增加免疫力（20）、
降血壓（17）等生理活性功能。特別在抗腫瘤方面，菇類的子實體萃 取液或是菌絲體發酵液中具有多醣體（β-葡聚醣以及與蛋白質結合
的葡萄糖）、triterpene、agglutinin、dietary fiber 等，主要功用為恢復 或增強體內免疫能力，經由活化多種免疫細胞如：刺激巨噬細胞、嗜 中性細胞、T 細胞、B 細胞及自然殺手細胞等（20），以達抗腫瘤之 效果。
二、桑黃之生物特性
桑黃為一種寄生於桑樹上的多年生覃菇類，在分類上桑黃是屬於 真菌界（ Fungi ）、擔子菌門（ Basidiomycotina ）、真正擔子菌綱
（ Hymenomycetidae ）、平滑臥孔菌目（ Aphyllophorales ） 刺革 菌科（ Hymenochaetaceae ）、火木層孔菌屬（ Phellinus ）、桑黃種
（ Phellinus merrillii ）。本論文所使用之桑黃，經大陸中國科學研究 院 戴 玉 成 博 士 及 台 中 科 學 博 物 館 植 物 組 主 任 吳 聲 華 博 士 確 認 為 Phellinus merrillii 。
桑黃特徵為馬蹄型，長約 9 公分，寬 6~15 公分，厚 2~5 公分，
傘的表面具有，呈現淡紅褐色或暗褐色，有明顯的環溝與縱溝形成龜 裂紋。邊緣的新生部分為鮮黃色，底部則由鮮黃色逐漸變成黃褐色，
而底部的管孔是多層黃色或黃褐色的楔形，會生長厚膜的剛毛，藉此 可和其他種類區別。
生長時主要寄生於桑樹的古木上，但也會寄生於其他的闊葉樹 上，是會讓心材腐朽枯死的木層孔菌型的白色腐朽菌，原本為瘤狀，
慢慢的生長為扇狀。主要產地為中國、菲律賓、北美、中南美等地。
『本草綱目』將桑黃歸納為木耳的項目中，指其為硬蕈類，記載 療效包含：治療子宮出血、白帶、月經不順等婦女病，支氣管炎、氣 喘、肺結核等呼吸系統疾病，胃痛、下痢等消化系統疾病，以及過度 疲勞、淋巴腫瘤等疾病。
桑黃子實體的主要成分包含有：多醣體β-（1-3）D
葡聚糖、β-（1-6）D 葡聚糖、蛋白質結構的酸性雜聚糖α-（1-4）、三帖類
（ truterpenoids ）、 腺苷、脂肪酸（ C22 及 C24 的飽和脂肪酸 ） 及氨基酸。
三、桑黃之生物活性
目前國內外關於桑黃的研究中，主要是針對其子實體的藥理作 用，包含有：具有抗肝纖維化作用，結果顯示桑黃能明顯改善肝功能，
提高 SOD 活性，表現出清除自由基的作用。也具有增強自體免疫能 力之作用，研究顯示桑黃可以誘發γ-干擾素（ IFN-γ ）的能力
「30」、刺激巨嗜細胞（ marcrophage ）活化（24）、刺激巨噬細胞 產生 interleukin-10（ IL-10 ）「26」、誘導殺手細胞（27）活化進而 調節自體免疫能力，抑制腫瘤細胞的增殖作用（30）。
四、桑黃的其他相關研究
綜合文獻發現桑黃除了抑制癌症及抗氧化的作用外，尚包含具有
免疫調節、增加傷口癒合、降低血糖等作用。首先，在免疫調節方面，
文獻指出桑黃可以增強免疫能力，藉由促進活化免疫細胞如：T 細 胞、B 細胞、自然殺手細胞、巨噬細胞等以增強免疫能力（24、26、
27）。此外桑黃亦具有減低過敏反應的作用（28），2003 年 kim 等學 者提出桑黃可藉由減低血清中的IgG 及 IgG2a 且減低 tumor necrosis factor-α（ TNF-α）與 interferon-γ（ IFN-γ）以達到減低過敏之 作用（29）。而也有學者提出桑黃的減低敏感作用中，interferon-γ
27）。此外桑黃亦具有減低過敏反應的作用（28），2003 年 kim 等學 者提出桑黃可藉由減低血清中的IgG 及 IgG2a 且減低 tumor necrosis factor-α（ TNF-α）與 interferon-γ（ IFN-γ）以達到減低過敏之 作用（29）。而也有學者提出桑黃的減低敏感作用中，interferon-γ